一种补体活化C1s酶荧光检测试剂盒及检测方法与应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种补体活化C1s酶荧光检测试剂盒及检测方法与应用。本发明专利技术以检测样本中补体活化C1s的酶活性水平为目的，建立一种补体活化C1s酶荧光检测试剂盒及检测方法与应用。本发明专利技术基于重组C1s抗体预包被磁珠，对C1s标准品或待测样品中的C1s进行特异性捕获，磁吸分离，去除非特异性结合物后，加入FRET荧光物标记的活化C1s酶切底物肽，然后用酶标仪检测反应体系中的荧光信号；通过检测荧光强度变化，对活化C1s酶活性进行量化检测。具有灵敏度高、特异性强、误差小、操作简单方便等特点。可对人或动物血液及体液中C1s活化后的酶活性进行检测，以准确评估机体的补体经典活化状态。体的补体经典活化状态。体的补体经典活化状态。

【技术实现步骤摘要】
一种补体活化C1s酶荧光检测试剂盒及检测方法与应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种补体活化C1s酶荧光检测试剂盒及检测方法与应用。

技术介绍

[0002]补体是一类天然的免疫分子，由多种补体分子及其调节分子组成，在免疫应答中起重要作用。正常生理状态下，补体分子多处于非活性状态；当免疫应答激活后，补体分子经活化后才表现出各种生物学活性。从补体分子C1（简称C1）开始的补体激活途径称为补体活化经典途径。C1是由C1q、C1r和C1s三种亚单位在Ca
2+
作用下按1:2:2组成的五聚体大分子复合物（C1qC1r2C1s2）。其中，C1q有6个相同的免疫球蛋白（Ig）结合点。当其中两个及以上结合点与免疫复合物中的IgM或IgG的Fc段补体结合位结合后，C1q构型发生改变，并继而引起亚单位C1r的活化。活化的C1r进一步使得C1s活化。而活化的C1s具有酶活性，可裂解补体C4和C2，最终使后续活化的补体组份在靶细胞膜上形成一个跨膜的孔道（即攻膜复合物）。C1s的活化与感染、肿瘤、冷凝集素病、血小板减少性紫癜、系统性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组C1s特异性抗体，其特征在于，所述特异性抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述特异性抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。2.一种免疫磁珠，其特征在于，所述磁珠与权利要求1所述重组C1s特异性抗体偶联。3.一种补体活化C1s的酶荧光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2所述免疫磁珠，所述试剂盒还包括有C1s标准品、底物肽、磷酸缓冲液和Tris缓冲液。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述底物肽的FRET荧光物标记完整序列为2Abz
‑
GYLGRSYKVG
‑
Lys(Dnp)D
‑
OH；所述底物肽的氨基酸序列来自于噬菌体肽库。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述底物肽的N端连接有荧光基团R、C端连接有荧光淬灭基团Q；所述的C1s标准品为人源或重组的C1s标准品。6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的磷酸缓冲液包括如下组份：0.137M NaCl，0.0027M KCl，0.01 M Na2HPO4，0....

【专利技术属性】
技术研发人员：夏圣，叶军，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：