一种基于竞争抑制法的胶体金分段半定量检测试纸及半定量检测体系制造技术

本发明专利技术提供了一种基于竞争抑制法的胶体金分段半定量检测试纸条及半定量分段检测体系，涉及胶体金检测技术领域。本发明专利技术通过控制不同检测条带上半抗原的数量使得胶体金聚集体被分段结合显示，通过条带的显色数量得出肉眼可读的被检测物的浓度范围区间。制得一种新式能够分段显示被检测物的浓度范围的胶体金试纸检测工具，适用于疾病早筛和动态评估，同时也可以在其他非医学场景中应用，例如农药检测、食品安全检测和水物质检测。以医学为例，制备好的试纸在滴加患者的一滴血液后其分段式的颜色反应结果可用于快速检测血清学指标，便于疾病的早期筛查和动态评估临床某些高危特殊疾病的患病风险、严重程度，划定危险人群。划定危险人群。划定危险人群。

【技术实现步骤摘要】
一种基于竞争抑制法的胶体金分段半定量检测试纸及半定量检测体系


[0001]本专利技术属于胶体金检测
，具体涉及一种基于竞争抑制法的胶体金分段半定量检测试纸及半定量检测体系。

技术介绍

[0002]胶体金免疫层析技术(GICA)是以胶体金标记技术、免疫技术和层析技术为基础发展出来的一项快速检测技术，其基本原理是通过将硝酸纤维素膜作为载体，利用微孔膜的毛细血管作用，滴加的液体样品从膜条一端的缓慢渗移至另一端过程中，通过胶体金聚集呈现的颜色将试纸中抗原抗体结合反应显示出来。传统的胶体金方法当检测线和质控线同时呈红紫色的两条免疫复合物线条时，表明结果呈阳性；如果只有质控线出现一条免疫复合物线条，表明结果呈阴性。传统方法只能对抗原抗体的存在做定性判断，不能对检测物质进行定量判断。
[0003]竞争抑制法作为免疫胶体金技术的主要方法之一，主要用于检测具有单一结合位点的小分子物质，如D
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二聚体、三聚氰胺、氰戊菊酯、呋喃西林等。本实验以D
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二聚体为例专利技术一种基于竞争抑制法的胶体金分段半定量检测试纸条。D
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二聚体是交联纤维蛋白(Fb)经纤溶确作用后的特异降解产物，可作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物，是唯一反映凝血和纤溶的理想指标，D
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二聚体正常参考值范围为0～243ng/mL，临床上一般以0.5μg/mL作为判断D
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二聚体是否增高的临界值。随着现代生活节奏的加快及人们饮食结构的改变，近年来血栓及肺栓塞性疾病，DIC、心脑血管疾病及恶性肿瘤等疾病发病率有逐年增高的趋势，研究表明，在这些疾病中，均会有凝血及纤溶系统的异常，进而导致体内D
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二聚体水平的升高，其升高程度与病情进展程度密切相关。因此，检测样本血浆中D
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二聚体的含量可以辅助诊断以上疾病的发生发展，尤其在肺栓寒和深静脉血栓的排除诊断中，D
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二聚体具有极其重要的临床排除诊断价值。此外，也有研究表明，D
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二聚体的升高与急性胰腺炎，糖尿病血管性病变及急慢性荨麻疹等疾病的发生发展和预后有极其密切的联系。因此，检测样本血浆中D
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二聚体的含量具有极其重要的临床应用价值。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种基于竞争抑制法的胶体金分段半定量检测试纸条及半定量检测体系，可对抗原进行半定量检测，具有操作简便、成本低、特异性强、稳定性好等优点，有望在现场筛查和快速检测中广泛应用，同时辅助临床医生及时制定治疗方案，改善患者预后。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种基于双抗体夹心的抗原检测胶体金分段半定量检测试纸条，胶体金分段半定量检测试纸条包括依次粘贴在PVC板上的样品垫、抗体胶体金垫、半抗原包被的硝酸纤维素膜、二抗包被后的硝酸纤维素膜和吸水滤纸；
[0007]所述包被后的硝酸纤维素膜包含多条检测线和一条质控线；
[0008]所述质控线上包被兔抗鼠抗小分子抗体；
[0009]每条检测线上包被相同或不同浓度的半抗原。
[0010]优选的，在所述PVC底板中央粘贴包被后的硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜下缘粘贴吸水滤纸，硝酸纤维素膜上缘粘贴抗体胶体金垫，胶体金垫上缘粘贴样品垫。
[0011]优选的，所述每条检测线上包被的半抗原的量分段检测浓度；
[0012]所述半抗原包括D
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二聚体、三聚氰胺、氰戊菊酯、呋喃西林等，下述实验过程以D
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二聚体为例。
[0013]优选的，在所述胶体金分段半定量检测试纸条上的硝酸纤维素膜上设置3条检测线；
[0014]当所述抗原为D
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二聚体时，3条检测线上，检测线T1上喷涂1.0mg/mL的D
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二聚体半抗原3.0μL，检测线T2上喷涂1.0mg/mL的D
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二聚体半抗原3.0μL，检测线T3上喷涂1.0mg/mL的D
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二聚体半抗原6.0μL。
[0015]优选的，所述抗体胶体金垫的包被方法，包括：将利用PB溶液稀释后的抗原的对应一抗，与调节pH值的胶体金溶液混合均匀，静置20min后，加入封闭液，静置后离心弃上清，利用金胶缓冲液对离心后的沉淀进行重悬，得一抗
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胶体金标记物，将所述一抗
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胶体金标记物喷涂在金标垫上，得所述抗体胶体金垫。
[0016]优选的，利用所述胶体金分段半定量检测试纸条对血液样本进行检测。
[0017]优选的，以血液为检测样本时，只有质控线C显示红紫色时，结果其对应一阶梯浓度；当质控线C与T1同时显示为红紫色其结果对应二阶段浓度；当质控线C与T1、T2时显示为红紫色时，其结果对应三阶段浓度；当质控线C与三条T线同时显示为红紫色其结果对应四阶段浓度。当质控线C不显色时则试纸失效。
[0018]优选的，当只有质控线C显示为红紫色时，D
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二聚体浓度区间为(4mg/L，+∞)；当质控线C与T1线同时显示为红紫色时，D
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二聚体浓度区间为(2mg/L，4mg/L]；当质控线C与T1、T2线同时显示为红紫色时，D
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二聚体浓度区间为(1mg/L，2mg/L]；当质控线C与T1、T2、T3线同时显示为红紫色时，D
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二聚体浓度区间为(0，1mg/L]；当质控线C不显色时实验结果失效。
[0019]有益效果：本专利技术提供了一种基于竞争抑制法的胶体金分段半定量检测试纸条，包含多条检测线，在医学场景中可在短时间内对患者病情进行评估，预后预测准确性高、方法简单，为临床工作提供借鉴；同时也可以在其他非医学场景中应用，例如农药检测、食品安全检测和水物质检测。本专利技术实施例中通过设置检测线T1，T2，T3
……
Tn进行分段检测，在样本血液量固定的情况下，通过n条检测线的显色状况有助于易感人群的危险分级早筛判断：样本滴落在胶体金分段半定量检测试纸条上时依次经过金标垫、检测线T1、检测线T2、检测线T3
……
检测线Tn和质控线C。检测线T1
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Tn分别对应相应的分段检测浓度。检测线T1
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Tn和质控线C在检测前均无显色。聚集呈红紫色的免疫胶体金与鼠源抗体结合物(胶体金
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抗体复合物)均匀分布于胶体金结合垫上。检测线T中含有事先已经吸附的半抗原，其可以与胶体金
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抗体复合物结合。控制线C中含有可以与胶体金
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抗体复合物结合的兔抗鼠抗体。样本血液中不含半抗原时，检测线和质控线同时显色。样本血液中含有半抗原时，当样本中的半抗原经过免疫胶体金时，抗体会与半抗原结合。当胶体金
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抗体复合物随着血液样本移动至检测线时，未结合样本中半抗原的免疫胶体金会被吸附至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于竞争抑制法的胶体金分段半定量检测试纸条，其特征在于，胶体金分段半定量检测试纸条包括依次粘贴在PVC板上的样品垫、抗体胶体金垫、半抗原包被的硝酸纤维素膜、二抗包被后的硝酸纤维素膜和吸水滤纸；所述包被后的硝酸纤维素膜包含多条检测线和一条质控线；所述质控线上包被兔抗鼠抗小分子二抗；每条检测线上包被相同或不同浓度的半抗原。2.根据权利要求1所述胶体金分段半定量检测试纸条，其特征在于，在所述PVC底板中央粘贴包被后的硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上缘粘贴吸水滤纸，硝酸纤维素膜下缘粘贴抗体胶体金垫，胶体金垫下缘粘贴样品垫。3.根据权利要求1所述胶体金分段半定量检测试纸条，其特征在于，所述每条检测线上包被的半抗原的量与待测物质的分段浓度相对应；所述半抗原包括多糖、类脂、核酸和某些小分子化合物。4.根据权利要求3所述胶体金分段半定量检测试纸条，其特征在于，在所述胶体金分段半定量检测试纸条上的硝酸纤维素膜上设置3条检测线；当所述抗原为D
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二聚体时，3条检测线上，检测线T1上喷涂1.0mg/mL的D
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二聚体半抗原3.0μL，检测线T2上喷涂1.0mg/mL的D
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二聚体半抗原3.0μL，检测线T3上喷涂1.0mg/mL的D
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二聚体半抗原6.0μL。5.根据权利要求4所述胶体金分段半定量检测试纸条，其特征在于，所述抗体胶体金垫的包被方法，包括：将利用PB溶液稀释后的抗原的对应一抗，与调节pH值的...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦超祎，俞彗静，雷宇静，李家和，李钰杭，王若云，邓萍，史依，王优，陈钒萱，陈浩满，阮煜闻，周玎玲，焦蕊，张嘉琪，苏菲菲，钱秋萍，胡孝渠，周凯，潘景业，周云龙，帅建伟，
申请(专利权)人：国科温州研究院温州生物材料与工程研究所，
类型：发明
国别省市：