一种口腔癌标志物的完全抗原及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种口腔癌标志物的完全抗原及其应用，该口腔癌标志物的完全抗原包括α肽、融合肽1、融合肽1R、融合肽2、融合肽2R和Biotin

【技术实现步骤摘要】
一种口腔癌标志物的完全抗原及其应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体的说是一种口腔癌标志物的完全抗原及其应用。

技术介绍

[0002]口腔癌指发生在口腔的恶性肿瘤，有舌癌、牙龈癌、腭癌、口咽癌、唇癌等，最常见的是舌癌。尽管口腔癌在我国的癌症谱中并不是发病率和死亡率非常高的癌症，但近年来有上升趋势。全球疾病负担(GBD)研究结果显示，最近几十年，我国口腔癌无论是发病率还是死亡率，都呈现出较明显的上升趋势，从1990年
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2017年，我国口腔癌新发病与死亡人数分别上升280％和197％，且男性上升幅度超过女性。流行病学研究表明，口腔癌的发生和环境致癌物，特别是香烟、酒精和槟榔果等有关。
[0003]在过去的二十多年中，口腔癌患者的5年生存率，是主要癌症当中较低的，且没有明显改善；其标准治疗手段主要有手术、放疗或者多种措施并举。对于早期(I期、II期)的患者，这些标准治疗方案治疗效果比较明显；但仍有大约20％
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30％的患者复发，在原病灶处或淋巴结中再现癌细胞。对于晚期患者(III期、IV期)，标准治疗手段不是很成功，约有50
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60％的复发率，20％
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35％的病例还发生了远器官迁移。即使有较好的治疗手段，口腔癌患者会承受很大的痛苦，术后不论对面容还是日常起居都会产生很大的影响，降低生命质量。
[0004]良好的肿瘤标志物，对于肿瘤的早期发现、精准治疗、疗效观察、病情检测以及预后的评价具重要的意义。近年，一种高灵敏度(100％)和高特异性(97％)的口腔癌标志物通过蛋白组学被鉴定，是一种较有前景的检测指标。该标志物经鉴定为纤维蛋白原α链C端的一个大小为25aa的短肽段，其序列为：DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV。鉴于其多肽性质，适合用免疫手段进行检测。
[0005]但由于肽段太短，直接免疫该肽无法获得特异性抗体。为解决这一问题，很多免疫原性低下的抗原或半抗原通常需要偶联到载体蛋白上(主要有钥孔血蓝蛋白KLH和牛血清白蛋白BSA)。采用此方式制备的抗原存在两个主要的缺陷：一是机体会产生大量针对载体蛋白的抗体，针对抗原和半抗原的抗体量减少；而且对载体蛋白的抗体亲和力相对更高，导致针对偶联的抗原的亲和力较低。二是偶联到载体蛋白的过程复杂，通常一个载体蛋白上偶联了数个抗原或半抗原，抗体和偶联产物能二价结合，表现出极高的亲和力，但实际上原始的半抗原与抗体的结合力较弱，不利于获得高亲和力抗体，进而影响试剂盒的开发。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提出了一种口腔癌标志物的完全抗原及其应用，该口腔癌标志物的完全抗原可与T细胞表位融合，以促进免疫反应的发生，产生的抗血清具有较高的亲和力和特异性，可作免疫原免疫小鼠，以制备用于α
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肽检测的单克隆抗体，且该完全抗原免疫性强，基本不含不需要的B细胞表位，有利于α
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肽特异性的多克隆抗体或单克隆抗体研发。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]一种口腔癌标志物的完全抗原，包括α肽、融合肽1、融合肽1R、融合肽2、融合肽2R和Biotin
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α肽；
[0009]所述α肽的核苷酸序列为：
[0010]DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV；
[0011]所述融合肽1的核苷酸序列为：
[0012]SKDQIKKLTSLKNKLERRQNDEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV；
[0013]所述融合肽1R的核苷酸序列为：
[0014]DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPVSKDQIKKLTSLKNKLERRQN；
[0015]所述融合肽2的核苷酸序列为：
[0016]LEYYLREKAKMAGTLIIPESDEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV；
[0017]所述融合肽2R的核苷酸序列为：
[0018]DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPVLEYYLREKAKMAGTLIIPES；
[0019]所述Biotin
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α肽的核苷酸序列为：
[0020]biotin
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DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV。
[0021]优选地，所述α肽、融合肽1、融合肽1R、融合肽2、融合肽2R和Biotin
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α肽分别通过化学合成方法获得。
[0022]一种口腔癌标志物的完全抗原的应用，将α肽、融合肽1、融合肽1R、融合肽2、融合肽2R和Biotin
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α肽与T细胞表位融合，用于免疫动物来获得α肽抗体或进一步制备单克隆抗体。
[0023]优选地，所述T细胞表位是一种疟原虫来源的小分子短肽，该小分子短肽的核苷酸序列为：SKDQIKKLTSLKNKLERRQN。
[0024]一种口腔癌标志物的完全抗原的应用，将所述α肽、融合肽1、融合肽1R、融合肽2、融合肽2R和Biotin
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α肽用于α肽的抗原或抗体的检测。
[0025]采用上述技术方案后，本专利技术与
技术介绍
相比，具有如下优点：本专利技术的α肽、融合肽1、融合肽1R、融合肽2、融合肽2R和Biotin
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α肽由于肽段较短，适合通过化学合成的方法获得，获取简单方便，成本较低；α肽、融合肽1、融合肽1R、融合肽2、融合肽2R和Biotin
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α肽可与T细胞表位融合，可以在小鼠体内诱导产生较强的免疫反应，可作免疫原免疫小鼠，以制备用于α
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肽检测的单克隆抗体。该完全抗原免疫性强，基本不含不需要的B细胞表位，有利于α
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肽特异性的多克隆抗体或单克隆抗体研发。
附图说明
[0026]图1为本专利技术的α肽、融合肽1、融合肽1R、融合肽2和融合肽2R的免疫血清滴度图。
具体实施方式
[0027]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0028]参见图1，一种口腔癌标志物的完全抗原，包括α肽、融合肽1、融合肽1R、融合肽2、融合肽2R和Biotin
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α肽；
[0029]所述α肽的核苷酸序列为：
[0030]DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV；
[0031]所述融合肽1的核苷酸序列为：
[0032]SKDQIKKLTSLKNKLERRQNDEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV；
[0033]所述融合肽1R的核苷酸序列为：
[0034]DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPVSKDQIKKLTSLKNKLERRQN；
[0035]所述融合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种口腔癌标志物的完全抗原，其特征在于，包括α肽、融合肽1、融合肽1R、融合肽2、融合肽2R和Biotin
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α肽；所述α肽的核苷酸序列为：DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV；所述融合肽1的核苷酸序列为：SKDQIKKLTSLKNKLERRQNDEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV；所述融合肽1R的核苷酸序列为：DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPVSKDQIKKLTSLKNKLERRQN；所述融合肽2的核苷酸序列为：LEYYLREKAKMAGTLIIPESDEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV；所述融合肽2R的核苷酸序列为：DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPVLEYYLREKAKMAGTLIIPES；所述Biotin
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α肽的核苷酸序列为：biotin
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DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRPV。2.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：李多，屠嫩斐，穆锦全，
申请(专利权)人：宁波市健康口腔医学研究院，
类型：发明
国别省市：