熊果酸及其衍生物在制备防治二氢睾酮相关毛囊疾病制剂中的应用制造技术

类固醇5α

【技术实现步骤摘要】
30.0，size_z = 30.0，exhaustiveness = 8，num_modes = 8，energy_range = 3)，对输出结果中结合自由能(ΔGbinding)最高的300种物质进行检索注释，并通过细胞学实验筛选，发现熊果酸比较适合用于制备防治二氢睾酮相关毛囊问题的日化产品。
[0007]目前的研究发现熊果酸及其衍生物具有抗菌、抗炎、抗氧化和抗癌等多种功效，但目前尚无其抗雄激素代谢，防治二氢睾酮相关毛囊问题的任何报道。专利技术人利用AutoDock Vina软件进行精细对接(精细对接参数：center_x =
ꢀ‑
20.32，center_y = 21.93，center_z = 44.74，size_x = 30.0，size_y = 30.0，size_z = 30.0，exhaustiveness = 1024，num_modes = 32，energy_range = 5)，精细对接得出的结合自由能为
‑
11.0 kcal/mol，对应的半抑制浓度(IC50)为8.3nM，对接产物的结构如图2所示。在网站“https://projects.biotec.tu
‑
dresden.de/plip
‑
web/plip”利用Protein
‑
Ligand Interaction Profiler (PLIP)计算作用键，结果如图2所示。
[0008]既然已知熊果酸能够抑制SRD5A1酶活，专利技术人在Zinc数据库（“http://zinc.docking.org/”）检索了熊果酸(ZINC000003978827，Zinc数据库小分子化合物编号，下同)的相关衍生物，分别与SRD5A1对接(对接参数：center_x =
ꢀ‑
20.32，center_y = 21.93，center_z = 44.74，size_x = 30.0，size_y = 30.0，size_z = 30.0，exhaustiveness = 32，num_modes = 9，energy_range = 3)，得出多种熊果酸衍生物的结合自由能如图3所示，说明多种熊果酸衍生物均有SRD5A1抑制能力。
[0009]与现有技术相比，本专利技术有以下优势。
[0010]1.专利技术创新性强，本专利是专利技术人在长期从事生殖毒理和小分子活性筛选研究的基础上，通过大规模虚拟筛选获得的全新知识，并通过了后续的细胞实验验证。之前有报道熊果酸类五环三萜有抗癌、抗氧化、抗炎等多种功效，经过仔细检索，并未发现任何熊果酸及其衍生物能直接抑制SRD5A1的报道，因此可以说本专利技术是基于全新知识的原创性技术应用。
[0011]2.从毛囊细胞实验数据看，本专利技术配方效果明显（详见细胞实验）。
[0012]3.在安全性上，本方案的熊果酸来自温和的植物次生代谢产物，并且在多种水果中可检测到，且为可以合法添加的食品乳化剂，而本专利仅为外用，因此安全性良好。
[0013]具体实施方式
[0014]为检测熊果酸及其衍生物制剂的毛囊干细胞生理效果，我们首先分离和培养毛囊干细胞。基于文献检索和专利技术人之前的实验研究基础，拔取正常成人头发，显微剪取位于毛囊峡部和毛球上部之间的隆突区组织，在10ng/ml 中性蛋白酶37℃下消化1小时后接种于Matrigel包被的培养板中，在37℃、5% 二氧化碳饱和湿度的培养箱中培养。待细胞迁出后融合达到50%~80%时，以0.25%胰酶37℃下振荡消化10min，收集细胞以1: 2比例传代培养数次后备用。
[0015]利用分析纯二甲基亚砜在室温下分别溶解配待测小分子化合物，以二甲亚砜（空白溶剂对照）为阴性对照、以传统的SRD5A1抑制剂非那雄胺为阳性对照，建立高通量的标准化细胞实验评估上述筛选的几种抑制剂的有效性和安全性。
[0016]具体而言，基于前期筛选工作确定的每个衍生物的结合自由能，我们能计算出相应的半抑制浓度IC50。我们分别取每个衍生物IC50的浓度梯度，加入睾酮处理的毛囊细胞96孔板中，培养48小时后利用吸光度法测定细胞活力(图4)，利用曲线拟合求出抑制率为
95%的浓度作为最适浓度，非那雄胺、熊果酸、ZINC000021146803和ZINC000003881985的最适浓度分别为1.2 μM、0.15 μM、0.35 μM、和0.76 μM。
[0017]本专利文本中的细胞实验验证和志愿者试用仅为本专利技术较佳的具体实施方式，本专利技术的保护范围不限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术披露的配方范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换，也应视为本专利技术的保护范围。
[0018]另外，本专利涉及的Zinc数据库和AutoDock Vina软件等均为学术和商业都可免费使用的共享软件，因此不存在知识产权纠纷。
[0019]附图说明
[0020]图1是熊果酸及其衍生物的结构式。
[0021]图2是熊果酸与SRD5A1分子对接的结构和化学键图示。
[0022]图3是熊果酸衍生物与SRD5A1分子对接的结合自由能。
[0023]图4是熊果酸及其衍生物能够废除睾酮诱导的毛囊细胞活力抑制。
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.本发明提供了一种利用熊果酸及其衍生物制备防治二氢睾酮相关毛囊问题制剂的生物技术方案。2.权利要求1所述的熊果酸衍生物是指具有有类似熊果酸型的五环三萜结构、或者说是在熊果烷型五环三萜（又叫乌苏烷型或α
‑
香树脂烷型）骨架上修饰得到的一系列化合物。3.权利要求1所述二氢睾酮相关毛囊问题，特指痤疮、雄激素脱发、女性多...

【专利技术属性】
技术研发人员：‑，
申请(专利权)人：陕西哲联生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：