白藜芦醇三酚c在制备抗SARS-CoV-2感染药物中的应用制造技术

本申请公开了白藜芦醇三酚c作为一种抑制剂在制备抗SARS

【技术实现步骤摘要】
白藜芦醇三酚c在制备抗SARS
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CoV
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2感染药物中的应用


[0001]本专利技术属于制药领域，涉及白藜芦醇三酚c作为一种抑制剂在制备抗SARS
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CoV
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2感染的药物中的应用。
技术背景
[0002]天然白藜芦醇存在于豆科的落花生属，决明属，槐属，百合科的藜芦属，姚金娘科的桉属，寥科的寥属等。许多常见的药用植物中也存在白藜芦醇，如决明、藜芦、虎杖等，甚至是葡萄叶中也含有
[1]。白藜芦醇三酚c是一种多酚类天然小分子化合物，分子式为C
42
H
32
O9，分子量为680.71g/mol，其化学结构式如下：
[0003][0004]有研究表明，白藜芦醇三酚c可从小叶葡萄茎叶中分离得到，可显著降低AD(阿尔兹海默症)Aβ和sAPPβ水平，主要影响β分泌酶活性和β淀粉样蛋白的生成
[2]。该化合物的来源与制备方法已在CN 102846591 A的专利文献中公开。
[0005]新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)为单股正链RNA病毒，由29891个碱基对组成，共编码9860个氨基酸。SARS
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CoV
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2与SARS
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CoV同属β
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冠状病毒属，核苷酸序列同源性达82％
[3,4]。SARS
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CoV
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2因其强大的感染力肆虐全球。本世纪已经产生了三次冠状病毒的流行，但目前尚无特异性抗冠状病毒药物，因此开发抗病毒药物成为当务之急。在此次新型冠状病毒肺炎的预防和救治中，我国传统中药发挥了功不可没的作用
[5,6]。深入探索中药抗冠状病毒有效成分及其分子机制将为抗SARS
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CoV
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2新药的研发及中药抗病毒机制的阐明提供重要依据。
[0006]申请人在科学实验中发现，白藜芦醇三酚c对SARS
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CoV
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2以及绝大多数S蛋白单突变的SARS
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CoV
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2假病毒感染具有显著的抑制作用，且在作用浓度范围内不具有细胞毒性。本研究发现将为SARS
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CoV
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2的药物开发及临床治疗提供新的方案。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供白藜芦醇三酚c作为一种抑制剂在制备抗SARS
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CoV
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2感染药物中的应用。
[0008]本专利技术采用不同浓度的白藜芦醇三酚c作用于人血管紧张素转换酶2(hACE2)稳转
的HEK293T细胞系(HEK293/hACE2)，然后利用SARS
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CoV
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2假病毒感染细胞，发现病毒颗粒的感染率随白藜芦醇三酚c浓度的增加而下降。白藜芦醇三酚c作用于SARS
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CoV
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2假病毒的EC50为6.98μΜ。另外，CCK8结果显示白藜芦醇三酚c的CC50为>50μM。通过不同时间点给药和VSV
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G假病毒实验确认了白藜芦醇三酚c作用于SARS
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CoV
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2侵染细胞阶段。
[0009]以上结果表明白藜芦醇三酚c能够抑制SARS
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CoV
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2病毒，具有制备抗SARS
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CoV
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2感染药物的潜力，从而为开发抑制SARS
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CoV
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2感染的药物提供新来源。
[0010]更详尽的技术方案参见具体实施例。
附图说明
[0011]图1：白藜芦醇三酚c对SARS
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CoV
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2假病毒感染的抑制效果。
[0012]图2：白藜芦醇三酚c对VSV
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G和SARS
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CoV
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2假病毒感染的抑制效果。
[0013]图3：白藜芦醇三酚c对假病毒侵染的半数有效浓度(EC50)。
[0014]图4：白藜芦醇三酚c对HEK293/hACE2细胞的半数毒性浓度(CC50)。
[0015]图5：白藜芦醇三酚c不同时间点给药对SARS
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CoV
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2假病毒的抑制效果。
[0016]图6：白藜芦醇三酚c对SARS
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COV
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2S蛋白单突变假病毒的抑制效果。
具体实施方式
[0017]以下结合具体实施例对本专利技术作进一步阐述。需要说明的是，本专利技术的实施例对于本专利技术只有说明作用，而没有限制作用，本专利技术中所涉及的各种实验操作，均为本领域的常规技术，文中没有特别说明的部分，本领域的普通技术人员可以参照本专利技术申请日之前的各种常用工具书、科技文献或相关的说明书、手册等予以实施。
[0018]试验方法：
[0019]1、构建SARS
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CoV
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2、VSV
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G假病毒系统
[0020]用慢病毒二质粒包装系统构建SARS
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COV
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2S蛋白、S单突变体蛋白以及VSV G蛋白假病毒系统
[8,9]。该假病毒系统以SARS
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CoV
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2spike蛋白、spike蛋白单突变或VSV G蛋白为表面膜蛋白，以萤火虫荧光素酶为报告基因。利用Neofect转染试剂将spike包膜质粒，单突变spike包膜质粒或G蛋白包膜质粒、包装质粒pNL4
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3.Luc.R
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E
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共转染到HEK293T细胞中，6h后更换新鲜培养液。在转染48h后收集上清培养液，并将其在800
×
g下离心5min，然后经过0.45μm PVDF针头过滤器过滤，除去细胞碎片，得到的假病毒分装保存于
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80℃。
[0021]2、白藜芦醇三酚c全程给药以研究其对SARS
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CoV
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2、S单突变体蛋白假病毒以及VSV
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G假病毒感染HEK293T/hACE2细胞的抑制作用
[0022]将生长于含10％胎牛血清的DMEM培养液的对数生长期HEK293/hACE2细胞按照1
×
104个/孔的密度均匀接种于96孔板中，过夜贴壁后，将细胞，假病毒与不同浓度的白藜芦醇三酚c在37℃孵育48h，然后弃去培养基，加入荧光底物，检测荧光素酶活性，通过荧光强度(Fluorescenceintensity，FI)计算抑制率。(Fluorescenceintensity，FI)计算抑制率。
[0023]3、CC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.白藜芦醇三酚c在制备抗SARS
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CoV
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【专利技术属性】
技术研发人员：乔嘉璐，陈海峰，孙宾莲，舒细记，叶贤胜，王承海，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：