一种金耳菌种纯度的检测方法及应用技术

本申请公开了一种金耳菌种纯度的检测方法，其包括：提取金耳菌种样品的DNA；合成所述DNA的特异性引物；预实验；制备标准品；构建标准曲线；取所述DNA进行实时荧光定量PCR实验；根据所述标准曲线和所述待测金耳菌种样品的CT值计算待测金耳菌种样品的拷贝数，从而定量待测金耳菌种样品的纯度。该方法简单高效、结果稳定、重复性好、特异性好、所需检测时间短，适合金耳菌种纯度和栽培过程的检测要求。适合金耳菌种纯度和栽培过程的检测要求。

【技术实现步骤摘要】
一种金耳菌种纯度的检测方法及应用


[0001]本申请涉及食用菌检测的领域,尤其是涉及一种金耳菌种纯度的检测方法及应用。

技术介绍

[0002]金耳(Tremella aurantialba Bandoni et Zang)，也称脑型银耳、金银耳，隶属担子菌门(Basidiomycota)银耳科(Tremella)银耳属(Tremella)，是一类珍贵的食药同源真菌。野生金耳产地主要集中在云南和西藏高海拔地区。金耳子实体外观呈脑状，色泽金黄，富含胶质，食用口感爽滑，经临床研究发现金耳多糖具有降低血糖血脂，增强免疫力，抗凝血和抗肿瘤等优良作用，故而使得金耳在食用菌市场和保健品市场被视为珍品和美容佳品，有着广阔的发展前景。
[0003]上世纪80年代，刘正南等人成功实现了对野生金耳的引种驯化栽培，金耳人工栽培对金耳菌种的纯度和含量都有较高要求，金耳子实体的形成与金耳菌和毛韧革菌的比例有关，扩大菌种或培养基不适合将引起两种菌丝的比例失调，这是导致金耳子实体不能形成的重要原因。金耳自身特殊的生理特性和制种特性导致金耳菌种存在不稳定性，栽培后不能正本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种金耳菌种纯度的检测方法，其中，包括以下步骤：提取金耳菌种样品的DNA；合成所述DNA的特异性引物；取所述DNA、所述特异性引物配置体系进行实时荧光定量PCR实验，得到扩增目的产物；回收所述扩增目的产物，进行质粒载体TA克隆，克隆完成后提取质粒，得到标准样品；检测所述标准样品的浓度，以梯度稀释所述标准样品，得到若干个梯度样品，将所述梯度样品进行实时荧光定量PCR实验，进行数据分析并得到标准曲线；取待测金耳菌种样品的DNA进行实时荧光定量PCR实验，根据所述标准曲线和待测金耳菌种样品的CT值计算待测金耳菌种样品的拷贝数，从而定量待测金耳菌种样品的纯度。2.根据权利要求1所述的金耳菌种纯度的检测方法，其中，所述特异性引物包括：特异性上游引物：5'
‑
AATCCAGTCGGAAACCCGAG
‑
3'，和特异性下游引物：5'
‑
ATCGATGAAGAACGCAGCGA
‑3’
。3.根据权利要求1所述的金耳菌种纯度的检测方法，其中，所述取所述DNA、所述特异性引物配置体系进行实时荧光定量PCR实验，得到扩增目的产物包括：取所述DNA、所述特异性引物配置体系进行实时荧光定量PCR实验，得到溶解曲线，根据溶解曲线判断产物是否单一、所述特异性引物是否可用，若产物并非单一、引物不可用，则重复上述步骤直至符合要求，最终得到扩增目的产物。4.根据权利要求1所述的金耳菌种纯度的检测方法，其中，所述回收所述扩增目的产物，进行质粒载体TA克隆，克隆完成后提取质粒，得到标准样品包括：回收所述扩增目的产物，进行质粒载体TA克隆，采用PCR筛选阳性克隆，筛选出的克隆进行测序确认，克隆完成后提取质粒，得到标准样品。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：汪威，田霄，田云霞，任建青，迟静娣，
申请(专利权)人：昆明市农业科学研究院昆明市农业技术推广站昆明市农业技术培训服务中心昆明市土壤肥料工作站，
类型：发明
国别省市：