全人源抗新冠病毒受体结合域单链抗体No4及其应用制造技术

本发明专利技术提供全人源抗新冠病毒受体结合域单链抗体No4及其应用。本发明专利技术的全人源单链抗体No4结构简单，是抗体重链可变区V

Human anti covid-19 receptor binding domain scFv No4 and its application

【技术实现步骤摘要】
全人源抗新冠病毒受体结合域单链抗体No4及其应用


[0001]本专利技术属于基因与抗体工程，涉及人源抗新冠病毒受体结合域单链抗体No4及其应用。全人源抗新型冠状病毒SARS
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2受体结合域(receptor binding domain,RBD)单链抗体No4的筛选，鉴定和原核表达、亲和力测定以及细胞结合活性分析，奠定了其在新型冠状病毒SARS
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2靶向治疗药物及检测试剂开发中的应用。

技术介绍

[0002]美国密苏里大学的George P.Smith于1985年首次成功地在丝状噬菌体(Filamentousbacteriophage)的基因组中插入了外源目的基因，并且在噬菌体的表面融合表达了目的基因编码的多肽，这就是噬菌体展示技术的起源。噬菌体展示技术自被专利技术以来，在生命科学领域中取得重要突破。例如作为噬菌体展示技术成功的案例之一的全人源化的抗肿瘤坏死因子单克隆抗体——阿达木单抗(Adalimumab)目前已广泛应用于治疗类风湿性关节炎和炎症性肠病等自身免疫性疾病。鉴于噬菌体展示技术在生物制药领域的重要作用及意义，2018年的诺贝尔化学奖被授予了George P.Smith、美国加州理工学院的Frances H.Arnold以及英国剑桥 MRC分子生物学实验室的Gregory P.Winter，以表彰他们在“肽类和抗体的噬菌体展示技术”作出的杰出贡献。
[0003]噬菌体抗体库筛选技术的原理是通过噬菌体展示技术将抗体可变区基因片段插入在噬菌粒质粒的信号肽与衣壳蛋白基因间，从而可以实现将抗体可变区片段与噬菌体衣壳蛋白以融合蛋白的形式呈现在噬菌体的表面，进而构建出噬菌体单链抗体库，然后使用目标抗原在此库中进行几轮亲和淘筛便可以得到特异性结合抗原并表达有高亲和力抗体片段的噬菌体。利用目的抗原为靶标在以从人源的免疫细胞中获得的人抗体可变区基因片段建立噬菌体抗体库中经过几轮筛选便可获得针对该抗原的抗体片段及其基因序列，最后通过哺乳动物表达系统可获得靶向目标抗原的特异性全人源抗体。该技术模拟了自然选择的过程，可在短时间内实现对靶分子特异性受体的高通量筛选，极大地提高了筛选的效率。
[0004]单链抗体scFv可在多个表达系统中进行表达，目前比较常用的，是大肠杆菌表达系统和哺乳动物表达系统。单链抗体具有结构简单、相对分子量小、穿透性强、免疫源性低等优点，在疾病临床诊断、治疗、预防等方面具有重要作用和广阔的应用前景。构建全人源抗体库的目的是寻找一种能与新型冠状病毒结构蛋白
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受体结合域RBD特异性结合的单链抗体 scFv，这类特异识别新型冠状病毒SARS
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2受体结合域RBD的单链抗体本身或者其可变区序列，经过基因工程改造成其它的抗体形式后，可以作为临床前研究或者临床中新型冠状病毒患者治疗药物的研究；其次可以作为新型冠状病毒相关检测试剂的开发。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一是提供一种全人源抗新冠病毒受体结合域单链抗体No4，是一种基因重组的全人源抗新型冠状病毒SARS
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2受体结合域RBD单链抗体No4，是从已构建的全人源白血病噬菌体单链抗体库中筛选出能够特异结合于新型冠状病毒SARS
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2受
体结合域RBD的单链抗体。
[0006]所述全人源抗RBD单链抗体No4的DNA序列如SEQ ID No.1所示： AGGTCCAGCTGCAGGAATCCGGGGGGAGCTTTAGTTCAGCCTGGGGGGTCCCTAAGAC TCTCCTGTGAAACCTCTGGATTCACCTTCAGTAGGTACTGGATGAACTGGTTCCGCCAA GCTCCAGGGAAGGGGCTGGTGTGGGTCTCGCACATTAGTAATAATGGCAGAGTCACAGG GTACGCGGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACATTT TGTATCTGCAGATGAGCGGTCTGAGAGCCGAGGACACGTCTCTATATTACTGTGCAAGA GTTCATAATGCGTTTTGTAATAGCGTCAGCTGCGTGGATGCTTTTGATGTGTGGGGCCAG GGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGGAGGAGGAGGTTCTGGCGGCGGCGGCTCCGGTG GTGGTGGATCCGATATTGTGATGACCCAGACTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAG ACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGGATTAACAGCCTTTTAAATTGGTAT CAGCACAAACCAGGGAAACCCCCTAAGCTCCTTATCTATGGTGCATCCACTTTGCAAAG TGGGGTCCCATCAAGATTCAGCGGCAGTGAATCTGGGGCAGATTTCACTCTCACCATCA GCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGGAACTTATTACTGTCAAAAGTATAATAGTGCCCCTC ACACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAA。
[0007]所述全人源抗RBD单链抗体No4的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示： RSSCRNPGGALVQPGGSLRLSCETSGFTFSRYWMNWFRQAPGKGLVWVSHISNNGRVTGY ADSVKGRFTISRDNAKNILYLQMSGLRAEDTSLYYCARVHNAFCNSVSCVDAFDVWGQGT TVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPSSLSASVGDRVTITCRASQRINSLLNWYQHKP GKPPKLLIYGASTLQSGVPSRFSGSESGADFTLTISSLQPEDVGTYYCQKYNSAPHTFGQGT RLEIK。
[0008]该全人源抗新型冠状病毒SARS
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2受体结合域(RBD)单链抗体No4含有完整的抗体重链可变区VH和轻链可变区VL，其重链可变区VH CDR1的氨基酸序列为： GFTFSRYW，重链可变区VH CDR2的氨基酸序列为：ISNNGRVT，重链可变区VH CDR3 的氨基酸序列为：ARVHNAFCNSVSCVDAFDV；其轻链可变区VL CDR1的氨基酸序列为： QRINSL，轻链可变区VL CDR2的氨基酸序列为：GAS，轻链可变区VL CDR3的氨基酸序列为：QKYNSAPHT。
[0009]本专利技术的另一个目的是提供所述的全人源抗新冠病毒受体结合域单链抗体No4在制备新型冠状病毒SARS
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2靶向治疗药物或检测试剂中的应用。所述药物或检测试剂包括单链抗体No4本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种全人源抗新冠病毒受体结合域单链抗体No4，其特征在于，所述全人源抗新型冠状病毒单链抗体No4的DNA序列如SEQ ID No.1所示。2.权利要求1所述的全人源抗新冠病毒受体结合域单链抗体No4，其特征在于，所述全人源抗新型冠状病毒单链抗体No4的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。3.根据权利要求1或2所述的一种全人源抗新冠病毒受体结合域单链抗体No4，其特征在于，所述单链抗体No4含有完整的抗体重链可变区VH和轻链可变区VL，其重链可变区VH CDR1的氨基酸序列为：GFTFSRYW，重链可变区VH CDR2的氨基酸序列为：ISNNGRVT，重链可变区VH CDR3的氨基酸序列为：ARV...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹金彪，高向征，彭珊珊，梅圣圣，梁可莹，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：