一种基于植物代谢组学和谱效关系的决明子质量评价方法技术

本发明专利技术公开了一种基于植物代谢组学和谱效关系的决明子质量评价方法，本发明专利技术采用UHPLC

A quality evaluation method of cassia seed based on plant metabonomics and spectral effect relationship

【技术实现步骤摘要】
一种基于植物代谢组学和谱效关系的决明子质量评价方法


[0001]本专利技术涉及一种结合植物代谢组学和谱效关系评价决明子质量的方法。

技术介绍

[0002]决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子，是我国传统的中药，也是药食两用的品种之一。因其具有降血脂、降血糖、降血压等多种药理作用，在临床上已经被广泛应用。临床上用药主要包括生品和炒制品两种使用形式。生决明子长于清肝热、润肠燥；而炒决明子长于平肝养肾。若混用，无法保证其安全有效。目前虽收载决明子的质量标准，但对于生品和炒制品的质量鉴定专属性不强。因此，决明子的生品和炮制品的质量评价有待进一步提高，以保障临床使用的有效性和安全性。同时，开发一种能有效评价生决明子和炒决明子质量的方法迫在眉睫。
[0003]目前，国内外报道了决明子的定量和/或定量分析区分生品和炒制品均属于靶向性分析，对于全面评价研究决明子生品和炒制品的差异成分存在一定的局限性。代谢组学技术由于从整体上研究的特点引起了越来越多的关注，该技术在研究中药及其药效机制方面得到广泛的应用。植物代谢组学是代谢组学的一个重要的分支，有助于评价中药的质量和发现药效物质。因此，通过非靶向植物代谢组学能够客观的反映机体整体的变化，有助于从整体上寻找区分生决明子和炒决明子差异代谢物。
[0004]决明子生品和炒制品化学成分的差异决定了其药理活性及临床功效上的差异。作为减肥瘦身的决明子保健茶饮，其降血脂活性受到了研究者的广泛关注。相比之下，降血糖活性报道很少，发挥降糖作用的成分及作用机制尚不明确。α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂可以通过抑制小肠黏膜上的α
‑
葡萄糖苷酶，通过延缓碳水化合物的消化，减缓小肠对葡萄糖的吸收，从而起到降低血糖的作用；氧化应激是机体在遭受各种有害刺激时，自由基的产生和抗氧化防御之间严重失衡，从而阻止组织损伤，应用抗氧化治疗可逆转氧化应激对组织的损伤，从而阻止或延缓高血糖的发生。因此，寻找α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂和抗氧化剂可能是对降糖实行有效干预的途径，本研究在区分决明子生品和炒制品的基础上，进一步探究了其药效相关的活性成分。
[0005]中药指纹图谱作为一种多指标的质量控制模式，可以全面评价中药或天然药物的质量。然而单纯用指纹图谱评价中药的质量存在一定的局限性，有必要将中药的化学指纹图谱和药效进行结合，通过一定的数学模型方法如灰色关联度分析、双变量分析、偏最小二乘回归分析等来构建谱效关系，确定相应的药效物质基础，从根本反映中药的内在质量，从而揭示中药复方作用物质基础。

技术实现思路

[0006]针对决明子现有质量评价方法的不足，本专利技术提供了一种基于植物代谢组学和谱效关系来全面、系统的评价生、炒决明子的质量差异，并进一步筛选决明子中降糖活性成分的方法，本专利技术为决明子的药效物质基础研究和质量控制提供科学有效的办法。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种基于植物代谢组学和谱效关系的决明子质量评价方法，包括如下步骤：
[0009](1)样品的分析
[0010]将待测样品粉末与甲醇混合，超声提取，过滤取续滤液，挥干得粗提物；所得粗提物用甲醇复溶后，进行超高效液相色谱
‑
质谱(UHPLC
‑
QTOF
‑
MS/MS)分析，得到样品色谱图；
[0011]待测样品为生决明子或炒决明子；
[0012]超高效液相色谱的条件为：色谱柱，H$E SP ODS
‑
A柱，5μm，250mm
×
4.6mm；流动相，乙腈(A)
‑
0.1％甲酸水(B)；流速，0.8
‑
1.2mL/min，优选1.0mL/min；柱温，30℃；紫外检测波长，285nm；
[0013]质谱的条件为：在负离子模式下扫描；毛细管电压，3.5kV；气体温度，350℃；干燥气(N2)流速，5L/min；雾化气压(N2)，35psi；破碎电压，1kV；使用自动采集模式，采集范围为m/z 100～1100；
[0014](2)植物代谢组学的分析
[0015]精密称取生、炒决明子的粗提物，用甲醇配制成粗提物溶液；将粗提物溶液分别在步骤(1)中的超高效液相色谱
‑
质谱条件下进行分析；采用组学数据处理软件对原始数据匹配非靶向匹配小分子数据库，使用批量递归特征提取的方式提取化合物；数据再导到软件可识别的模式后进行分析，将样品分为生、炒决明子两组，设置化合物的最低响应值、最低离子数、禁止带多电荷化合物，将数据进行归一化处理，完成数据的导入；设置化合物出现的频率、百分比参数、T
‑
Test最大P值、最小倍数变化值，结果显示对分组有重要贡献并被选作为潜在的有显著性差异的化合物；通过多元统计分析两组样品代谢的总体差异，筛选差异代谢物；
[0016]粗提物溶液的浓度为100μg/mL，进样量为5μL；
[0017]组学数据处理软件依次为Profinder、Mass Profiler Professional Verion 15.0(MPP)；
[0018]设置的条件如下：化合物的最低响应值为5000counts，最低离子数为2，禁止带多电荷化合物；化合物出现的频率为30，百分比参数为80％，T
‑
Test最大P值为P<0.05、最小倍数变化值为FC>2.0；
[0019]多元统计分析为主成分分析、偏最小二乘判别分析、聚类分析；
[0020](3)UHPLC指纹图谱的构建
[0021]精密称取生、炒决明子的粗提物，用甲醇配制成粗提物溶液；将粗提物溶液分别在步骤(1)中的超高效液相色谱
‑
质谱条件下进行分析，得到相应的样品色谱图；采用中药指纹图谱相似度计算软件分析处理不同批次样品的色谱图，并分别建立生、炒决明子的指纹图谱；
[0022]粗提物溶液的浓度为100μg/mL，进样量为5μL；
[0023](4)体外降糖活性的测定
[0024]通过α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性实验测定不同批次的生、炒决明子对α
‑
葡萄糖苷酶的抑制作用，并用软件作样品的浓度与抑制率的曲线，得到α
‑
葡萄糖苷酶的IC
50
值；通过ABTS自由基清除实验测定不同批次的生、炒决明子的抗氧化活性，并用软件作样品的浓度与清除率的曲线，得到ABTS的IC
50
值；
[0025]所用软件为SPSS 26.0；
[0026](5)决明子降糖谱效关系的构建
[0027]结合不同批次的生、炒决明子两组样品的化学指纹图谱与其体外降糖活性的研究，通过相关统计分析方法构建样品的降糖谱效关系，得到潜在的降糖活性成分；
[0028]选取α本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于植物代谢组学和谱效关系的决明子质量评价方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)样品的分析将待测样品粉末与甲醇混合，超声提取，过滤取续滤液，挥干得粗提物；所得粗提物用甲醇复溶后，进行超高效液相色谱
‑
质谱分析，得到样品色谱图；待测样品为生决明子或炒决明子；超高效液相色谱的条件为：色谱柱，H$E SP ODS
‑
A柱，5μm，250mm
×
4.6mm；流动相，乙腈(A)
‑
0.1％甲酸水(B)；流速，0.8
‑
1.2mL/min；柱温，30℃；紫外检测波长，285nm；质谱的条件为：在负离子模式下扫描；毛细管电压，3.5kV；气体温度，350℃；干燥气(N2)流速，5L/min；雾化气压(N2)，35psi；破碎电压，1kV；使用自动采集模式，采集范围为m/z 100～1100；(2)植物代谢组学的分析精密称取生、炒决明子的粗提物，用甲醇配制成粗提物溶液；将粗提物溶液分别在步骤(1)中的超高效液相色谱
‑
质谱条件下进行分析；采用组学数据处理软件对原始数据匹配非靶向匹配小分子数据库，使用批量递归特征提取的方式提取化合物；数据再导到软件可识别的模式后进行分析，将样品分为生、炒决明子两组，设置化合物的最低响应值、最低离子数、禁止带多电荷化合物，将数据进行归一化处理，完成数据的导入；设置化合物出现的频率、百分比参数、T
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Test最大P值、最小倍数变化值，结果显示对分组有重要贡献并被选作为潜在的有显著性差异的化合物；通过多元统计分析两组样品代谢的总体差异，筛选差异代谢物；组学数据处理软件依次为Profinder、Mass Profiler Professional Verion 15.0(MPP)；设置的条件如下：化合物的最低响应值为5000counts，最低离子数为2，禁止带多电荷化合物；化合物出现的频率为30，百分比参数为80％，T
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Test最大P值为P<0.05、最小倍数变化值为FC>2.0；多元统计分析为主成分分析、偏最小二乘判别分析、聚类分析；(3)UHPLC指纹图谱的构建精密称取生、炒决明子的粗提物，用甲醇配制成粗提物溶液；将粗提物溶液分别在步骤(1)中的超高效液相色谱
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质谱条件下进行分析，得到相应的样品色谱图；采用中药指纹图谱相似度计算软件分析处理不同批次样品的色谱图，并分别建立生、炒决明子的指纹图谱；(4...

【专利技术属性】
技术研发人员：楚楚，杨斐，李家旭，邹艳芳，臧雅萍，李陈玥，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：