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一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法及其应用技术

技术编号:34372242 阅读:64 留言:0更新日期:2022-07-31 11:44
本发明专利技术属于基因工程领域,涉及一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法及其应用;步骤为:将重组质粒pET28a

Preparation and application of a halophilic archaea extracellular protease truncate

【技术实现步骤摘要】
一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程领域,具体涉及一种稳定性高的嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]蛋白酶是水解蛋白质肽链的一类酶的总称,广泛用于食品、生物医学、皮革、纺织和洗涤剂等工业领域,但在极端条件下应用受限。嗜盐古菌通常生活在盐湖、盐碱地、晒盐场、腌制食品等高盐环境,其来源的酶类通常具有耐盐碱、耐高温、耐有机溶剂等特征。因此,嗜盐古菌是广适性蛋白酶的良好来源,可应用于高盐、高温等特殊工业条件中。
[0003]目前,已发表的嗜盐古菌胞外蛋白酶均为丝氨酸蛋白酶,属于枯草杆菌蛋白酶类蛋白酶 (subtilase)S8A家族。已发现的蛋白酶均是以前体的形式在胞内形成,含有信号肽、前肽、催化结构域和C

端延伸区(C

terminal extension,CTE)。前体经过跨膜运输后切除信号肽和前肽形成成熟酶,成熟酶包括催化结构域和CTE。
[0004]嗜盐古菌产生的蛋白酶在低盐条件下会解聚或失活,故其分离纯化存在一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法,其特征在于,具体步骤如下:(1)首先基于重组质粒pET28a

hlyA,将其转化原核生物宿主,转化后的宿主细胞在添加诱导剂的LB培养基中进行诱导表达,随后在一定温度条件下离心收集菌体;(2)收集步骤(1)诱导表达后的菌体于细胞裂解液中进行重悬,超声破碎,离心收集上清液,使用镍柱亲和层析进行纯化,随后通过超滤置换复性得到成熟蛋白酶,记为HlyA;(3)将步骤(2)中得到成熟蛋白酶HlyA在水浴条件下进行孵育,即得到嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体,记为HlyA

CTE,其氨基酸序列为SEQ ID No.1。2.根据权利要求1所述的一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述原核生物宿主为E.coli BL21。3.根据权利要求1所述的一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述诱导表达中的诱导剂为IPTG,在LB培养基中的终浓度为0.5mM。4.根据权利要求1所述的一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述诱导表达的时间为4~5h,温度为37℃;所述一定温度条件为4℃。5.根据权利要求1所述的一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述细胞裂解液成分为8M尿素,10mM CaCl2,50mM...

【专利技术属性】
技术研发人员:侯靖厉思雅崔恒林
申请(专利权)人:江苏大学
类型:发明
国别省市:

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