重组胱硫醚β-裂解酶的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，尤其涉及重组胱硫醚β

Recombinant cystathionide \u03b2- Preparation and application of lyase

【技术实现步骤摘要】
重组胱硫醚
β
‑
裂解酶的制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及重组胱硫醚β
‑
裂解酶的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]CBL(胱硫醚β
‑
裂解酶)是一种磷酸吡哆醛依赖的酶，是蛋氨酸生物合成途径中的关键酶，能够催化胱硫醚裂解产生同型半胱氨酸(Hcy)、丙酮酸和氨。血浆中Hcy的测定已经成为心脑血管等疾病的早期诊断常见方法。
[0003]目前，Hcy主要的检测方法之一是酶循环法，该法操作简便，检测速度快，准确度高。酶循环法的原理是通过胱硫醚β
‑
合成酶(Cystathioninβ
‑
synthetase， CBS)催化L
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丝氨酸(L
‑
Ser)和Hcy形成L
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胱硫醚(L
‑
Cystathionine，L
‑
Cth)，而L
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Cth又能在胱硫醚β
‑
裂解酶(Cystathio本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.胱硫醚β
‑
裂解酶的表达载体，其特征在于，以pET
‑
28a(+)为骨架载体，其中含有SEQ ID NO:1所示序列的核酸。2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，SEQ ID NO:1所示序列的核酸的插入位点为BamHI和NotI。3.重组大肠杆菌，其特征在于，为转化权利要求1或2所述的质粒载体的大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。4.胱硫醚β
‑
裂解酶的制备方法，其特征在于，包括：诱导培养权利要求3所述的重组大肠杆菌，收集菌体经纯化获得胱硫醚β
‑
裂解酶。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述诱导培养的培养基为TB培养基；所述诱导的诱导剂为IPTG，诱导剂的剂量为1mmol/L。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述纯化包括：超声破碎菌体后，离心取上清液；所述上清液过镍琼脂糖凝胶柱，以清洗缓冲液清洗然后用洗脱缓冲液洗脱；所述清洗缓冲液包括水和20mmol/L Tris
‑
HCl，250mmol/L NaCl，50mmol/L Imidazole，100μmol/L PLP；所述洗脱缓冲液包括水和20mmol/L Tris
‑
HCl，250mmol/...

【专利技术属性】
技术研发人员：李宗祥，张蕊，罗继全，
申请(专利权)人：三诺生物传感股份有限公司，
类型：发明
国别省市：