一种火麻籽粕高F值寡肽及其制备方法和在提高纳豆激酶产量中的应用技术

本发明专利技术公开了一种火麻籽粕高F值寡肽及其制备方法和在提高纳豆激酶产量中的应用。本发明专利技术以火麻籽粕作为原料，通过碱提酸沉的方法得到火麻籽分离蛋白，经过碱性蛋白酶和木瓜蛋白的两步酶解，通过活性炭的吸附得到高F值火麻籽粕寡肽。将制备出来的高F值火麻籽粕寡肽加入到枯草芽孢杆菌的发酵液中，可显著提高其纳豆激酶的产量。该发明专利技术实现了火麻油加工副产物的高效利用，为火麻籽粕的利用提供了新方向，且制备方法简单可控，适用于工厂量产。适用于工厂量产。

A high f-value oligopeptide from hemp seed meal and its preparation method and application in improving the yield of Nattokinase

【技术实现步骤摘要】
一种火麻籽粕高F值寡肽及其制备方法和在提高纳豆激酶产量中的应用


[0001]本专利技术涉及火麻油加工废弃物的综合利用
，具体涉及一种火麻籽粕高F值寡肽及其制备方法、在提高枯草芽孢杆菌纳豆激酶产量中的应用。

技术介绍

[0002]火麻籽粕是火麻子经压榨或浸提脱油后的碎片状或粗粉状的副产品,其粗蛋白含量高，富含必需氨基酸，是一种优良的植物蛋白来源，而工业上却主要被当做动物饲料，缺乏附加值高的产品，没有对火麻蛋白的深度加工开发与利用，造成了蛋白资源的严重浪费，极大地浪费了蛋白资源。火麻蛋白作为火麻中的具有生理活性成分之一，理应成为科学研究与应用的一部分，从而推进火麻产业的发展，提高火麻产品的附加值。
[0003]F值寡肽是指支链氨基酸(BCAA，包括亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)和缬氨酸(Val))与芳香族氨基酸(AAA，包括酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Trp))物质的量比值F大于20，且由2～9个氨基酸组成的蛋白质前体物或水解物。高F值寡肽具有良好的抗疲劳和解醉酒功能特性；可辅助治疗肝病、促进肝病患者体内F值回到正常范围；可调节体内苯丙氨酸代谢。火麻蛋白为富含铁、锌等金属的一类蛋白质；且具有高含量的支链氨基酸；球蛋白与清蛋白的生物利用率比大豆蛋白要高。是制备高F值寡肽的优良原料。
[0004]纳豆激酶是一种能高效溶解人体血栓的碱性丝氨酸蛋白酶，这种酶主要由芽孢杆菌(Bacillus)和在发酵时产生。研究证实，纳豆激酶具有溶栓作用，相较于治疗血栓的药物而言，纳豆激酶没有明显的毒副作用，更加安全有效。此外纳豆激酶还有抗高血压、降血脂、抗血小板、改善血液循环等作用。但目前纳豆激酶的产量较低，限制了其的大范围应用。专利《一种纳豆激酶液态发酵培养基及生产纳豆激酶的发酵方法》中记载,获得的纳豆激酶酶活最高达5690IU/mL。本专利技术制备出来的高F值火麻籽寡肽可以代替传统的枯草芽孢杆菌发酵培养基中的氮源，有效提高了纳豆激酶的产量，实现了火麻籽粕的高效利用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种火麻籽粕高F值寡肽及其制备方法和在提高枯草芽孢杆菌纳豆激酶产量中的应用，通过寻找高质量氮源，实现了枯草芽孢杆菌高产纳豆激酶。另一方面，实现了火麻油加工副产品的高效利用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采取了以下步骤，
[0007]一种火麻籽粕高F值寡肽的制备方法，包括以下步骤：
[0008]S1，将火麻籽粕进行干燥粉碎，过筛后得到火麻籽粉，加入蒸馏水，配置成火麻籽浊悬液A；
[0009]S2，利用碱提酸沉法提取火麻子蛋白，将火麻籽浊悬液A的pH调为碱性，离心收集上清，再将pH调为酸性，静置后，沉淀水洗过后加入蒸馏水，配置成火麻籽分离蛋白浊悬液B；
[0010]S3，将火麻籽分离蛋白浊悬液B的pH调节至碱性，预热后加入一定量的碱性蛋白酶，反应一段时间后沸水浴灭活，得到酶解液C1；
[0011]S4，将酶解液C1的pH调节至中性，预热后加入一定量的木瓜蛋白酶，反应一段时间后沸水浴灭活，得到酶解液C2；
[0012]S5，将酶解液C2进行超滤，收集不同的组分，冷冻干燥后得到火麻籽多肽粉D；
[0013]S6，将火麻籽多肽粉D溶解于蒸馏水中，调节pH，加入一定量的活性炭，吸附一段时间后，进行抽滤并冷冻干燥得到火麻籽高F值寡肽粉E。
[0014]所述S1中，火麻籽粕过80
‑
100目筛，用蒸馏水配置成5％
‑
10％的火麻子浊悬液A。
[0015]所述S2中，先将火麻子浊悬液A调节pH至8.0
‑
10.0，离心收集上清后，将pH调节至4.0
‑
6.0，沉淀水洗过后，用蒸馏水配置成5％
‑
10％的火麻籽分离蛋白浊悬液B。
[0016]所述S3中，将火麻籽分离蛋白浊悬液B的pH调节至9.0
‑
12.0，在40
‑
60℃下预热10
‑
20min，加入相对于火麻子分离蛋白含量的3％
‑
5％的碱性蛋白酶，在40
‑
60℃，100
‑
200r/min的摇床中反应3
‑
5h。
[0017]所述S4中，将酶解液C1的pH调节至6.0
‑
8.0，在30
‑
40℃下预热10
‑
20min，加入相对于火麻子分离蛋白含量的3％
‑
5％的木瓜蛋白酶，在30
‑
40℃，100
‑
200r/min的摇床中反应3
‑
5h。
[0018]所述S5中，将酶解液C2根据需要选择通过5KD、3KD、1KD的超滤膜，冷冻干燥后得到的火麻籽多肽粉D分为四个组分：D1>5KD；D2为3～5KD；D3为1～3KD；D4<1KD，超滤的分离参数为：上样量2
‑
4L，温度4
‑
8℃，压力0.3
‑
0.7MPa。
[0019]所述S6中，将火麻籽寡肽粉D用蒸馏水中配置成5％
‑
10％的溶液，调节PH至3.0
‑
5.0，加入相对于火麻子多肽含量的3％
‑
5％的的活性炭，在室温、150
‑
200r/min的摇床中吸附过夜。
[0020]所述一种火麻籽粕高F值寡肽的制备方法，进一步优选地，
[0021]S1，将火麻籽粕进行干燥粉碎，过80目筛得到火麻籽粉，加入蒸馏水，配置成5％的火麻籽浊悬液A；
[0022]S2，调节火麻籽浊悬液A的pH至8.0，离心收集上清后，将pH调节至6.0，沉淀水洗过后，用蒸馏水配置成5％的火麻籽分离蛋白浊悬液B；
[0023]S3，将火麻籽分离蛋白浊悬液B的pH调节至9.0，在50℃下预热15min，加入相对于火麻子分离蛋白含量的4％的碱性蛋白酶，在50℃，100
‑
200r/min的摇床中反应3
‑
5h，反应结束后沸水浴灭活，得到酶解液C1；
[0024]S4，将酶解液C1的PH调节至6.0，在37℃下预热15min，加入相对于火麻子分离蛋白含量的3％
‑
5％的木瓜蛋白酶，在30
‑
40℃，100
‑
200r/min的摇床中反应3
‑
5h，反应结束后沸水浴灭活，得到酶解液C2；
[0025]S5，将酶解液C2分别通过5KD、3KD、1KD的超滤膜，设置参数：上样量2
‑
4L，温度4
‑
8℃，压力0.3
‑
0.7MPa收集不同的组分，冷冻干燥后得到的火麻籽多肽粉D分为四个组分：D1(>5KD)；D2(3～5KD)；D3(1～3KD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种火麻籽粕高F值寡肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，将火麻籽粕进行干燥粉碎，过筛后得到火麻籽粉，加入蒸馏水，配置成火麻籽浊悬液A；S2，利用碱提酸沉法提取火麻子蛋白，将火麻籽浊悬液A的pH调为碱性，离心收集上清，再将pH调为酸性，沉淀水洗过后加入蒸馏水，配置成火麻籽分离蛋白浊悬液B；S3，将火麻籽分离蛋白浊悬液B的pH调节至碱性，预热后加入碱性蛋白酶，反应后沸水浴灭活，得到酶解液C1；S4，将酶解液C1的pH调节至中性，预热后加入木瓜蛋白酶，反应后沸水浴灭活，得到酶解液C2；S5，将酶解液C2进行超滤，收集不同的组分，冷冻干燥后得到火麻籽多肽粉D；S6，将火麻籽多肽粉D溶解于蒸馏水中，调节pH，加入活性炭，吸附后，进行抽滤并冷冻干燥得到火麻籽高F值寡肽粉E。2.根据权利要求1所述的火麻籽粕高F值寡肽的制备方法，其特征在于，所述S1中，火麻籽粕过80
‑
100目筛，用蒸馏水配置成5%
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10%的火麻子浊悬液A。3.根据权利要求1所述的火麻籽粕高F值寡肽的制备方法，其特征在于，所述S2中，先将火麻子浊悬液A调节pH至8.0
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10.0，离心收集上清后，将pH调节至4.0
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6.0，沉淀水洗过后，用蒸馏水配置成5%
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10%的火麻籽分离蛋白浊悬液B。4.根据权利要求1所述的一种火麻籽粕高F值寡肽的制备方法，其特征在于，所述S3中，将火麻籽分离蛋白浊悬液B的pH调节至9.0
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12.0，在40
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60℃下预热10
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20min，加入相对于火麻子分离蛋白含量的3%
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5%的碱性蛋白酶，在40
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60℃，100
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200r/min的摇床中反应3...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝宁，张敏，郭格格，李涛，刘兆星，庞靖瀛，郭炼霞，王宇洋，王艺，高刘宇，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：