一种嗜热型7α-羟基类固醇脱氢酶及制备方法技术

本发明专利技术涉及生物化学技术领域，具体涉及一种嗜热型7α

【技术实现步骤摘要】
一种嗜热型7
α
‑
羟基类固醇脱氢酶及制备方法


[0001]本专利技术涉及生物化学
，尤其涉及一种嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶及制备方法。

技术介绍

[0002]7α
‑
、7β
‑
羟基类固醇脱氢酶(Hydroxysteroid dehydrogenase，HSDH)可以偶联催化游离态或结合态甾体类底物C7位羟基的差向异构，是生物转化制备牛磺熊去氧胆酸(Tauroursodeoxycholic acid，TUDCA)的关键生物催化剂。
[0003]目前，现有技术公开的7α
‑
羟基类固醇脱氢酶均为嗜温酶，特征是对温度敏感，热稳定性差。因此，发现嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶迫在眉睫。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶及制备方法，旨在解决现有的7α
‑
羟基类固醇脱氢酶的热稳定性差的问题。
[0005]为实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了一种嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶，所述嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢的酶蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。
[0006]其中，所述7α
‑
羟基类固醇脱氢酶的编码基因如SEQ ID NO.2所示。
[0007]第二方面，本专利技术提供了一种表达盒，包含第一方面所述的嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶。
[0008]第三方面，本专利技术提供了一种表达载体，包含第一方面所述的嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶。
[0009]第四方面，本专利技术提供了一种重组细胞，包含第三方面所述的表达盒。
[0010]第五方面，本专利技术提供了一种嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶的制备方法，能够成功诱导蛋白表达条件下培养第四方面所述的重组细胞并分离得到7α
‑
羟基类固醇脱氢酶。
[0011]第六方面，本专利技术提供了一种催化剂，包含第一方面所述的嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶。
[0012]第七方面，本专利技术提供了一种实现化学物质生物转化的方法，包含第一方面所述的嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶，或包含第七方面所述的催化剂与底物反应的酶促反应。
[0013]本专利技术的一种嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶及制备方法，通过嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢的酶蛋白序列如SEQ ID NO.1所示，本专利技术的首个嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶的最适催化温度为75℃，显著高于目前已报道的嗜温型酶，解决了现有的7α
‑
羟基类固醇脱氢酶的热稳定性差的问题。
附图说明
[0014]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本
专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0015]图1是本专利技术提供的一种嗜热型7α
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羟基类固醇脱氢酶的SDS
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PAGE分析图。
[0016]图2是本专利技术提供的一种嗜热型7α
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羟基类固醇脱氢酶的最适温度测定结果图。
[0017]图3是本专利技术提供的一种嗜热型7α
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羟基类固醇脱氢酶的制备方法的流程图。
[0018]图4是本专利技术提供的一种嗜热型7α
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羟基类固醇脱氢酶的应用的流程图。
具体实施方式
[0019]下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。
[0020]请参阅图1至图2，第一方面，本专利技术提供了一种嗜热型7α
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羟基类固醇脱氢酶，所述嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢的酶蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。
[0021]其中，所述7α
‑
羟基类固醇脱氢酶的编码基因如SEQ ID NO.2所示。
[0022]第二方面，本专利技术提供了一种表达盒，包含第一方面所述的嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶。
[0023]第三方面，本专利技术提供了一种表达载体，包含第一方面所述的嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶。
[0024]第四方面，本专利技术提供了一种重组细胞，包含第三方面所述的表达盒。
[0025]第五方面，本专利技术提供了一种嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶的制备方法，能够成功诱导蛋白表达条件下培养第四方面所述的重组细胞并分离得到7α
‑
羟基类固醇脱氢酶。
[0026]第六方面，本专利技术提供了一种催化剂，包含第一方面所述的嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶。
[0027]第七方面，本专利技术提供了一种实现化学物质生物转化的方法，包含第一方面所述的嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶，或包含第七方面所述的催化剂与底物反应的酶促反应。
[0028]请参阅图3至图4，本专利技术提供一种嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶的制备方法，包括以下步骤：
[0029]S1对7α
‑
羟基类固醇脱氢酶的编码基因进行全合成，得到表达盒；
[0030]具体的，将7α
‑
羟基类固醇脱氢酶的酶蛋白序列交由上海生工生物科技有限公司进行全基因合成，得到表达盒。
[0031]S2使用所述表达盒制作重组质粒；
[0032]具体的，将所述表达盒克隆入pEGX
‑
6p
‑
1载体，以酶切位点为BamH I/Xho I进行重组，得到重组质粒。
[0033]S3使用所述重组质粒转化大肠杆菌BL21，得到重组菌种；
[0034]具体方式为：
[0035]S31在
‑
80℃中取出大肠杆菌BL21感受态细胞后放置在冰上；
[0036]S32在所述大肠杆菌BL21感受态细胞中加入所述重组质粒，30min后将所述大肠杆菌BL21感受态细胞和所述重组质粒从冰上取下进行热休克42℃90s，得到休克细胞；
[0037]S33将所述热休克处理的细胞冰上放置2min进行冷处理，得到重组菌种。
[0038]具体的，在步骤将所述休克细胞冰上放置2min，得到重组菌种之后还要进行复苏，方法为：将所述重组菌种加入600μL LB培养基，并以37℃，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一个嗜热型7α
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羟基类固醇脱氢酶，其特征在于，所述嗜热型7α
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羟基类固醇脱氢的酶蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的嗜热型7α
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羟基类固醇脱氢酶，其特征在于，所述7α
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羟基类固醇脱氢酶的编码基因如SEQ ID NO.2所示。3.一种表达盒，其特征在于，包含权利要求1所述的嗜热型7α
‑
羟基类固醇脱氢酶。4.一种表达载体，其特征在于，包含权利要求1所述的嗜热型7α
‑
羟基类...

【专利技术属性】
技术研发人员：娄德帅，曹阳阳，李强，谭君，刘曦，
申请(专利权)人：重庆第二师范学院，
类型：发明
国别省市：