一种肌源性细胞血糖响应型表达SIA的启动子、重组载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种肌源性细胞血糖响应型表达SIA的启动子、重组载体及其构建方法和应用，属于生物医药技术领域，本发明专利技术使用血糖响应型肌肉特异性启动子pGREMS调控SIA的表达，实现了高活性单链胰岛素类似物SIA3，SIA4，SIA7在骨骼肌部位特异性高效表达并分泌至血液中，可以达到有效降血糖的效果。同时由于设计筛选的启动子具有血糖响应性功能可以在血糖较低时关闭胰岛素表达，避免因胰岛素过量表达产生的低血糖副作用。本发明专利技术提供的重组表达载体可应用于制备治疗糖尿病药物中，尤其适用于I型糖尿病，且提供的重组表达载体构建方法简单、操作方便，适用于工业化大规模生产。适用于工业化大规模生产。适用于工业化大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种肌源性细胞血糖响应型表达SIA的启动子、重组载体及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种肌源性细胞血糖响应型表达SIA的启动子、重组载体及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]胰岛素分泌不足是糖尿病的核心发病原因，Ⅰ型糖尿病(T1D)的治疗需要终生使用外源性胰岛素。在过去的100年中，胰岛素治疗的发展取得了很大进展，开发了新的胰岛素制剂与递送方法包括新的胰岛素和胰岛素类似物、不带和带传感器的连续皮下胰岛素输注、预测低血糖悬浮功能以及根据患者连续血糖监测读数持续自动调节的闭环系统。这些技术的发展扩大了产品范围，给临床医生以实现严格的血糖控制的可能。
[0003]T1D的治疗主要是每日多次注射短效或者长效的胰岛素，或使用胰岛素泵持续皮下胰岛素输注。然而，即使每天频繁的血糖自我监控与胰岛素注射仍旧难以精准将血糖水平维持在正常范围内。急性的高血糖可能引起糖尿病酮症酸中毒或高渗性非酮症昏迷，严重时会危及生命；长期的高血糖会导致大血管、微血管和神经病变等一系列并发症。而胰岛素过量可引起低血糖，甚至会导致休本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肌源性细胞血糖响应型表达SIA的启动子，其特征在于，所述肌源性细胞血糖响应型表达SIA的启动子为pGREMS，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.制备如权利要求1所述肌源性细胞血糖响应型表达SIA的启动子的引物，其特征在于，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。3.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求1所述的肌源性细胞血糖响应型表达SIA的启动子。4.一种重组载体的构建方法，其特征在于，它包括以下步骤：S1. 扩增CRE片段：从质粒pCRE
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SEAP上扩增CRE片段，质粒pCRE
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SEAP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；S2. 扩增CRE
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EMS片段：以pEMS
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SIA3
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his为模板扩增CRE
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EMS片段，质粒pEMS
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SIA
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his的核苷酸序列如SEQ ID NO.5；S3. 扩增pGREMS片段：以CRE片段与CRE
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EMS片段为模板，扩增pGREMS片段；S4. 构建载体：将质粒pSC
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SIA
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his进行MluI和BamHI双酶切，去除sv40 enhancer
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CMV片段的部分与扩增后的pGREMS片段进行连接，构建pGREMS
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SIA
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his载体。5.根据权利要求4所述的一种重组载体的构建方法，其特征在于，所述质粒pSC
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SIA
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his为pSC
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SIA3
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his、质粒pSC
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SIA4
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his和质粒pSC
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【专利技术属性】
技术研发人员：王刚，谢丽芳，卢宛翎，邓璐，张嫣菡，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：