一株深绿木霉菌菌株及其在防治三七根腐病中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株深绿木霉菌菌株及其在防治三七根腐病中的应用。本发明专利技术的深绿木霉菌菌株，所述的深绿木霉菌菌株为PRWS21，保藏名称为深绿木霉菌Trichoderma atroviride，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏单位地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2021年4月6日；保藏编号：CGMCC No.21478。本发明专利技术的深绿木霉菌从滇重楼根际土壤中分离得到，能够同时对三七根腐病菌(尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、恶疫霉菌)具有良好的抑制作用。有良好的抑制作用。有良好的抑制作用。

A strain of Trichoderma viride and its application in controlling root rot of Panax notoginseng

【技术实现步骤摘要】
一株深绿木霉菌菌株及其在防治三七根腐病中的应用


[0001]本专利技术涉及微生物应用
，具体涉及一株深绿木霉菌菌株及其在防治三七根腐病中的应用。

技术介绍

[0002]近年来，随着中药资源需求量的急剧增长，中药野生资源破坏严重，野生转为栽培成为满足市场需求的必由之路。野生中药材很少发生病害，即使有也不会形成灾害，从野生变为人工栽培后，其生长环境发生变化，在农业生态系统中，种类单一，密度增加，且高水高肥、人为远程调种等管理措施创造了病害发生流行的条件，病害易于在种群内部、田块之间、地区之间蔓延传播，导致栽培药材病害加重。
[0003]三七(Panax notoginseng)为五加科人参属多年生草本植物，是我国名贵中药材。三七是多年生宿根植物，喜温暖阴湿的环境，由于生产上连年大面积单一种植，为病害的发生提供了有利条件。三七主要病害为根腐病，其病原菌主要有：链格孢菌(Alternaria alternaria)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、茎点霉(Phomaherbarum)、立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)、假单胞菌(Pseudomonas sp.)、根结线虫(Meloidogyne sp.)等。其中又以腐皮镰刀菌、尖孢镰刀菌、链格孢菌、恶疫霉菌为云南文山发生流行的主要三七根腐病原菌。根腐病可导致三七产量降低5
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20％，严重时可达到70％以上，占三七各种病害的70
‑
85％，目前已造成三七种植业的重要制约因素之一。
[0004]目前对三七根部病害的防治主要以化学防治为主，包括：(1)土壤熏蒸消毒处理。其原理为利用化学熏蒸剂对土壤进行熏蒸处理，以达到消杀土壤病原菌的目的。虽然土壤熏蒸消毒处理能显著降低三七根腐病的发病率，但因化学熏蒸剂的毒性，易对周围环境造成污染，并破坏土壤的微生态群落。(2)化学杀菌剂。主要包括多菌灵、甲基硫菌灵、甲霜灵、腐霉利等化学农药。化学农药长期使用会造成环境污染、生态系统破坏、病原菌抗药性产生，甚至给中药材带来农药残留和重金属污染等危害，因此合理降低农药使用，找到绿色、环境友好型的防控方式，对防治中药材病害有重要的意义。

技术实现思路

[0005]针对目前三七根腐病害发生严重，且化学农药防治易带来环境污染、农药残留、抗药性等问题，提供一株高效防治三七根腐病的深绿木霉菌(Trichoderma harzianum)菌株及其应用。
[0006]为达到上述目的，本专利技术采用了下列技术方案：本专利技术的一株深绿木霉菌菌株，所述的深绿木霉菌菌株为PRWS21，保藏名称为深绿木霉菌Trichoderma atroviride，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏单位地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2021年4月6日；保藏编号：CGMCC No.21478。
[0007]进一步地，所述的深绿木霉菌菌株的ITS基因序列为SEQ ID No.1所示的核苷酸序
列。
[0008]本专利技术所述的深绿木霉菌菌株制备的深绿木霉菌菌剂。
[0009]进一步地，其活性成分为如下(a)(b)(c)中的至少一种：
[0010](a)所述的深绿木霉菌的发酵培养物；
[0011](b)所得深绿木霉菌的孢子悬液；
[0012](c)所得深绿木霉菌细胞的超声裂解沉淀。
[0013]本专利技术所述的深绿木霉菌的发酵液的制备方法，包括如下步骤：在100mL PDA液体培养基中接入5个直径6mm的木霉菌PRWS21菌饼，28℃、180r/min条件下恒温摇床上培养7d后，用滤纸过滤菌液，之后用直径0.22μm的无菌过滤器过滤除菌，获得无菌发酵滤液。
[0014]进一步地，所述的PDA液体培养基由如下组分组成：土豆为100g～200g，葡萄糖为5～20g，定容至1L蒸馏水中，pH为6～8，121℃灭菌20min。
[0015]本专利技术所述的深绿木霉菌的孢子悬液的制备方法，包括如下步骤：将深绿木霉菌菌株PRWS21接种于PDA固体培养基平板上，28℃倒置培养7天，使用蒸馏水将活化好的菌株制备成孢子悬浮液，显微镜下计数孢子浓度，使所述的孢子悬液的浓度为1.0
×
105cfu/mL。
[0016]进一步地，所述的PDA固体培养基由如下组分组成：土豆为100g～200g，葡萄糖为5g～20g，琼脂为10g～20g，定容至1L蒸馏水中，pH为6～8，121℃灭菌20min。
[0017]本专利技术所述的深绿木霉菌菌株或深绿木霉菌菌剂在生产用于防治三七根腐病产品中的应用。
[0018]进一步地，使用深绿木霉菌孢子悬液或发酵液对三七进行灌根处理。
[0019]有益效果：本专利技术的滇重楼根际土壤中分离得到，能够同时对三七根腐病菌(尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、恶疫霉菌)具有良好的抑制作用。因此，该菌的菌株发酵液能够有效防治三七根腐病。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有如下优点:
[0021]本专利技术的菌株PRWS21具有广谱抗性，可以同时拮抗多种三七根腐病菌，可以开发为高效的生防菌剂，有效降低化学农药的使用。
附图说明
[0022]下面将结合附图进一步说明，附图中：
[0023]图1为本专利技术的深绿木霉菌(Trichoderma harzianum)PRWS21菌落形态。
[0024]图2为本专利技术的深绿木霉菌(Trichoderma harzianum)PRWS21 NJ系统进化树。
[0025]图3为本专利技术的深绿木霉菌(Trichoderma harzianum)PRWS21平板对峙效果。
具体实施方式
[0026]通过以下实施例进一步详细说明本专利技术，但应注意本专利技术的范围并不受这些实施例的任何限制。
[0027]实施例1
[0028]本专利技术的一株深绿木霉菌菌株，所述的深绿木霉菌菌株为PRWS21，保藏名称为深绿木霉菌Trichoderma atroviride，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏单位地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2021年4月6日；保藏
编号：CGMCC No.21478。
[0029]所述的深绿木霉菌菌株的ITS基因序列为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。
[0030]本专利技术所述的深绿木霉菌菌株制备的深绿木霉菌菌剂。
[0031]其活性成分为如下(a)(b)(c)中的至少一种：
[0032](a)所述的深绿木霉菌的发酵培养物；
[0033](b)所得深绿木霉菌的孢子悬液；
[0034](c)所得深绿木霉菌细胞的超声裂解沉淀。
[0035]本专利技术所述的深绿木霉菌的发酵液的制备方法，包括如下步骤：在100mL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株深绿木霉菌菌株，其特征在于：所述的深绿木霉菌菌株为PRWS21，保藏名称为深绿木霉菌Trichoderma atroviride，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏单位地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2021年4月6日；保藏编号：CGMCC No.21478。2.根据权利要求1所述的深绿木霉菌菌株，其特征在于：所述的深绿木霉菌菌株的ITS基因序列为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。3.权利要求1所述的深绿木霉菌菌株制备的深绿木霉菌菌剂。4.根据权利要求1所述的深绿木霉菌菌剂，其活性成分为如下(a)(b)(c)中的至少一种：(a)权利要求1所述的深绿木霉菌的发酵培养物；(b)权利要求1所得深绿木霉菌的孢子悬液；(c)权利要求1所得深绿木霉菌细胞的超声裂解沉淀。5.权利要求4所述的深绿木霉菌的发酵液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：在100mLPDA液体培养基中接入5个直径6mm的木霉菌PRWS21菌饼，28℃、180r/min条件下恒温摇床上培养7d后，用滤纸过滤菌液，之后用直径0.22μm的无菌过滤器...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑宽瑜，魏治镭，张仲凯，苏晓霞，郑雪，周凤，陈永对，吴阔，
申请(专利权)人：云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所，
类型：发明
国别省市：