一种哈茨木霉QT20724及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种哈茨木霉QT20724及其应用，属于微生物的技术领域。该哈茨木霉Trichoderma harzianum保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.21034，保藏日期为2020年12月08日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明专利技术的哈茨木霉QT20724能够高效地降解香草酸，有效缓解香草酸对植物的自毒作用。该菌株48h即可将浓度为400mg/L的香草酸完全降解；对土壤中的香草酸降解迅速，8天后完全降解。同时本发明专利技术的哈茨木霉QT20724对西洋参锈腐病有很好的防治效果，防效达到81.80%，明显好于生物农药青枯立克。好于生物农药青枯立克。好于生物农药青枯立克。

【技术实现步骤摘要】
一种哈茨木霉QT20724及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物的
，具体涉及一种哈茨木霉QT20724及其应用。

技术介绍

[0002]连作障碍是制约经济作物产量的主要因素，而自毒物质是引起连作障碍的主要因素之一。研究表明，香草酸类物质是植物根系分泌的主要自毒性物质，能破坏细胞膜功能，影响光合和呼吸作用，使根系微生物区系失衡，抑制作物生长，刺激病原微生物生长，大幅度提高作物发病率，导致严重经济损失。
[0003]香草酸是地黄、三七、西洋参、花生等多种经济作物根际的主要酚酸类物质，随种植年限增加而累积，对作物的出苗率，幼苗生长，生长期病害等都有一定的影响。据报道，目前已经采取土壤消毒，轮作，种植抗性品种，合理施肥，接种微生物等方法缓解香草酸类物质造成的连作障碍。在众多措施中，利用微生物分解土壤中的香草酸类物质，从而降低香草酸含量，缓解其对作物的自毒作用，是一种有效途径。且微生物降解廉价高效，绿色环保，具有广阔的应用前景。因此，筛选一种高效降解香草酸菌株并应用于连作障碍土壤修复，具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术存在的上述不足，本专利技术提供一种降解香草酸的哈茨木霉及其应用。本专利技术的哈茨木霉QT20724能够高效地降解香草酸，有效缓解香草酸类物质对植物的自毒作用。
[0005]一种哈茨木霉（Trichoderma harzianum）QT20724，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC NO.21034，保藏日期为2020年12月08日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0006]一种含哈茨木霉QT20724的孢子悬液的制备方法，所述方法包括将哈茨木霉QT20724菌株接种到PDA平板上，放置于25℃培养箱中生长4
‑
5天，刮取一个平板的孢子，加入无菌水中后，过4层无菌镜头纸，所得滤液即为孢子悬液。
[0007]一种哈茨木霉QT20724的筛选方法，具体筛选方法如下：配置香草酸液体培养基，将液体培养基分装入试管中，高压灭菌，将活化的待测菌株制备成孢子悬液，血球计数板计数后，取1
×
105个孢子接入到香草酸液体培养基中，设不接菌的培养液为对照，置于25℃、150rpm摇床中培养3d；培养结束后，取1mL 培养液，10000g 离心2min，再取上清200 mL加入10 mL 0.1%的溴甲酚绿进行显色，根据溶液颜色的深浅，筛选降解率高的菌株，其中菌株QT20724显色最深，为深蓝色。
[0008]优选的，所述香草酸液体培养基的制备方法如下：取土豆200g，蒸馏水煮沸30min，纱布过滤后冷却定容至1L，得到土豆水；取土豆水50mL、蒸馏水950mL、香草酸400mg，混合均匀，配制成香草酸液体培养基。
[0009]一种哈茨木霉QT20724的应用，所述哈茨木霉QT20724用于降解香草酸。
[0010]一种含哈茨木霉QT20724的制剂在缓解香草酸对植物的自毒作用中的应用。
[0011]优选的，所述应用还包括在播种时，使用含哈茨木霉QT20724的孢子悬液对种子进行拌种或浸种处理。
[0012]一种含哈茨木霉QT20724的孢子悬液在修复香草酸引起的连作障碍土壤中的应用。
[0013]一种含哈茨木霉QT20724的孢子悬液在防治西洋参锈腐病防治方面的应用。
[0014]优选的，所述应用还包括使用以哈茨木霉QT20724为有效成分的制剂对植物移栽时进行蘸根处理。
[0015]本专利技术的有益效果为：本专利技术的哈茨木霉QT20724能够高效地降解香草酸，有效缓解香草酸对植物的自毒作用。该菌株在PDB培养基中，48h即可将浓度为400mg/L的香草酸完全降解；对土壤中的香草酸降解迅速，4天降解率达到52.94%，6天时降解率为94.23%，8天后完全降解。同时本专利技术的哈茨木霉QT20724对西洋参锈腐病有很好的防治效果，防效达到81.80%，明显好于生物农药青枯立克。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0017]图1是本专利技术的哈茨木霉QT20724对PDB培养基中香草酸的降解趋势图。
[0018]图2是本专利技术的哈茨木霉QT20724对土壤中香草酸的降解趋势图。
[0019]图3是本专利技术实施例3中使用清水作为培养液对生菜发芽的生长图。
[0020]图4是本专利技术实施例3中使用哈茨木霉QT20724浸种后使用100mg/L的香草酸作为培养液，对生菜发芽的生长图。
[0021]图5是本专利技术实施例3中使用100mg/L的香草酸作为培养液对生菜发芽的生长图。
[0022]图6是本专利技术实施例4中哈茨木霉QT20724对毁灭柱孢菌的平板对峙结果图。
具体实施方式
[0023]为了使本
的人员更好地理解本专利技术中的技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0024]实施例1哈茨木霉QT20724的筛选哈茨木霉（Trichoderma harzianum）QT20724，已于2020年12月08日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO. 21034。该哈茨木霉的具体筛选方法如下：配置香草酸液体培养基，取土豆200g，蒸馏水煮沸30min，纱布过滤后冷却定容至
1L，得到土豆水；取土豆水50mL、蒸馏水950mL、香草酸400mg，混合均匀，配制成香草酸液体培养基。将液体培养基分装入试管中，高压灭菌，将活化的待测菌株制备成孢子悬液，血球计数板计数后，取1
×
105个孢子接入到香草酸液体培养基中，设不接菌的培养液为对照，置于25℃、150rpm摇床中培养3d；培养结束后，取1mL培养液，10000g离心2min，再取上清200mL加入10mL0.1%的溴甲酚绿进行显色，根据溶液颜色的深浅，筛选降解率高的菌株，其中菌株QT20724显色最深，为深蓝色。
[0025]实施例2哈茨木霉QT20724对香草酸的降解1.哈茨木霉QT20724对培养基中香草酸的降解1.1标准溶液的配制和标准曲线制作：用50%的甲醇做溶剂准确配制香草酸标准品，浓度分别为200、100、50、25、12.5、6.25、3.125mg/L，过0.22μm滤膜后用高效液相色谱仪进行测定，得香草酸浓度X与峰面积Y的线性回归方程；1.2培养液中香草酸类物质含量的测定：制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种哈茨木霉QT20724，其特征在于，该哈茨木霉Trichoderma harzianum保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.21034，保藏日期为2020年12月08日，保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.一种含如权利要求1所述的哈茨木霉QT20724的孢子悬液的制备方法，其特征在于，包括将哈茨木霉QT20724菌株接种到PDA平板上，放置于25℃培养箱中生长4
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5天，刮取一个平板的孢子，加入无菌水中后，过4层无菌镜头纸，所得滤液即为孢子悬液。3.一种如权利要求1所述的哈茨木霉QT20724的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：李纪顺，李红梅，杨凯，魏艳丽，扈进冬，刘峰，潘明，
申请(专利权)人：山东五福生生态工程有限公司，
类型：发明
国别省市：