调节髓源性抑制细胞的炎性小体活化用于治疗GvHD或肿瘤制造技术

在一方面，本发明专利技术提供了治疗患有移植物抗宿主病(GvHD)的或有罹患移植物抗宿主病风险的受试者的方法，通常包括向受试者施用与合适的对照受试者相比有效改善移植物抗宿主病的至少一种症状或临床体征的多个髓源性抑制细胞(MDSC)。在另一方面，本发明专利技术提供了治疗受试者中肿瘤的方法，通常包括向受试者施用抗肿瘤疗法，并向受试者共同施用炎性小体引发剂，其量有效地充分增加MDSC的炎性小体活化从而降低MDSC的抑制功能。低MDSC的抑制功能。低MDSC的抑制功能。

【技术实现步骤摘要】
调节髓源性抑制细胞的炎性小体活化用于治疗GvHD或肿瘤
[0001]本申请是申请号为201680046264.8，申请日为2016年8月5日，专利技术名称为“调节髓源性抑制细胞的炎性小体活化用于治疗GvHD或肿瘤”的专利申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求于2015年8月6日提交的美国临时专利申请No.62/201,990的优先权，其通过援引并入本文。
[0004]政府基金
[0005]本专利技术是在国立卫生研究院授予的R01 HL56067、AI 34495、HL1181879、R01CA156330和U19
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AI067798的政府支持下完成的。政府对本专利技术享有一定的权利。

技术实现思路

[0006]本公开在一方面描述了治疗患有移植物抗宿主病(graft
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versus
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host disease,GvHD)的或有罹患移植物抗宿主病风险的受试者的方法。通常，所述方法包括向受试者施用与合适的对照受试者相比有效改善移植物抗宿主病的至少一种症状或临床体征的多个髓源性抑制细胞(myeloid
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derived suppressor cell,MDSC)。
[0007]在一些实施方式中，所述方法包括当先前施用的MDSC受到炎性小体活化时多次连续施用MDSC。
[0008]在一些实施方式中，所述多个MDSC中的至少一部分包含引起MDSC抵抗炎性小体活化的遗传修饰。
[0009]在一些实施方式中，所述方法包括向受试者共同施用抑制炎性小体活化的试剂。
[0010]在另一方面，本专利技术描述了治疗受试者中肿瘤的方法。通常，所述方法包括向受试者施用抗肿瘤疗法并向受试者共同施用炎性小体引发剂(inciting agent)，其量有效地充分增加MDSC的炎性小体活化从而降低MDSC的抑制功能(suppressor function)。
[0011]本专利技术的以上概述并非意图描述本专利技术的每个公开的实施方式或每个实现方法(implementation)。以下的描述更具体的举例说明了实施方式。在整个申请的不同位置，通过实例列表提供指导，这些实例可以以各种组合使用。在每种情况下，所记载的列表仅用作代表性群组，不应被解释为排他性列表。
[0012]附图简要说明
[0013]图1、来源于骨髓(bone marrow)的MDSC
‑
IL 13提高GvHD存活率，但在体内五天后抑制作用受损(compromised)。(A)如所示，给予经致死照射的BALB/c受体以1
×
107个C57Bl/6骨髓(仅BM)，或骨髓加2
×
106个耗尽CD25的T细胞(GvHD)，或骨髓、T细胞和6
×
106个MDSC
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IL13(GvHD+MDSC
‑
IL13)。Kaplan
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Meier存活曲线代表四个合并(pooled)和独立实验(independent experiment)(n＝40只动物/组)。GvHD对比GvHD+MDSC，p<0.0001。(B
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C)在接受仅骨髓(无GvHD)或骨髓加T细胞(GvHD)转移5天后，从经照射的动物脾脏回收的同基因型的(congenic)(CD45.2
+
)MDSC
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IL13的表面表达。数据代表每组三次重复，对于所有显示的标记p<0.001。(D)由CFSE稀释度标注的显示响应性T细胞(responding T cell)增殖的示意性直方图。将移植后5天来自合并脾脏的纯化MDSC
‑
IL13以5
×
105/mL与相等数量的CFSE标
记的应答T细胞(responder T cell)、0.25μg/ml抗CD3εmAb和2.5
×
105/ml经照射的T细胞耗尽的脾细胞接种(plated)在特别配制的150μM L
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精氨酸RPMI培养基中。阴影直方图显示未受刺激的对照增殖。数据代表每组三个样品和总共三个独立实验。(E)回收的显示活性的MDSC和回收的总细胞数的总结数据，门控性(gated)CD11b
+
CD45.2
+
。数据代表每组三个样品，并代表三个独立的实验。(F)如上所述移植经致死照射的Balb/c受者，或如所示的在第0天、第3天和第6天给予MDSC
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IL13的三次连续输注。所有接受MDSC的小鼠表现出与GvHD相比增加的存活率，p<0.001。MDSC对比MDSC第0天、第3天和第6天p<0.0001。存活曲线代表来自两个独立实验的每组20只动物，并且代表在第0天、第7天和第14天给予多次输注的另外的实验。
[0014]图2、在回收的MDSC中明显的炎性小体活性。(A)以来自回收的野生型或ASC
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/
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MDSC
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IL13的细胞裂解物的免疫印迹探测活化的p10形式的半胱天冬酶
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1和β
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肌动蛋白。使用ImageJ软件转换成灰度的、经拉直和经裁剪的凝胶图像，根据大小高亮突出感兴趣的泳道(lane)。(B)相对于β
‑
肌动蛋白的半胱天冬酶
‑
1p10印迹定量，GvHD对所有其他组，p<0.05。通过来自ImageJ软件(NIH)的光密度分析(densitometric analysis)在扫描的印迹上进行定量。(C)将第5天后回收的上清液的IL
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1βELISA在完全RPMI培养基中接种过夜，GvHD对所有其他组，p<0.05。虚线表示ELISA检测的极限。所有数据代表两个独立的实验。
[0015]图3、在MDSC中的体外炎性小体诱导导致抑制功能的丧失。通过在新鲜培养的野生型和ASC
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/
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MDSC
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IL13中加入0.2μg/ml LPS 3小时，随后加入2mM ATP或0.8μg/ml聚(dT)转染来进行炎性小体诱导。(A)再过1小时后收获培养物上清液并通过ELISA测定IL
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1β的产生。数据代表三次独立的实验。(B)炎性小体诱导的MDSC
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IL13被充分洗涤，并以1:1的比例接种于CFSE抑制测定中，数据代表门控性CFSE
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标记的CD8
+
应答T细胞，n＝6个样品/组，来自两个独立实验。NLRP3表示LPS+ATP处理，AIM2表示LPS+聚(dT)处理，灰色直方图表示无MDSC增殖对照。图10中显示的门控性CD4
+
应答T细胞。(C)如上处理，使用炎性小体诱导的MDSC
‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种髓源性抑制细胞(MDSC)，其具有含CARD的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)缺陷。2.根据权利要求1所述的MDSC，其中，所述MDSC包含导致抵抗炎性小体活化的遗传修饰。3.根据权利要求2所述的MDSC，其中，所述遗传修饰是导致ASC缺陷的对ASC基因的修饰。4.根据权利要求2或3所述的MDSC，其中，所述MDSC是通过使用shRNA、siRNA和/或CRISPR而导致ASC缺陷。5.包括至少一个根据权利要求1至4中任一项所述的MDSC的多个髓源性抑制细胞(MDSCs)。6.根据权利要求5所述的多个MDSCs，其中，所述MDSC抵抗炎性小体活化，抑制或消除系统性免疫病状，阻止同种异型反应性T细胞的致敏和扩增，抑制炎症应答，禁止炎性小体活化，减少患移植物抗宿主病(GvHD)的风险，和/或改善GvHD的长期存活。7.根据权利要求5所述的多个MDSCs，其中，所述MDSC与没有ASC缺陷的MDSC相比，在足够长的时间内保持活力和功能。8.根据权利要求1至7中任一项所述的多个MDSCs用于治疗受试者的肿瘤的用途。9.根据权利要求1至7中任一项所述的多个MDSCs用于治疗受试者的移植物抗宿主病(GvHD)的用途。10.根据权利要求9所述的用途，其中，所述GvHD包括急性移植物抗宿主病。11.根据权利要求9所述的用途，其中，所述受试者需要进行淋巴造血紊乱的同种异型移植，调理方案，或MDSC疗法。12.根据权利要求8或9所述的用途，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：北卡罗来纳大学查珀尔希尔分校阿尔布莱希特路德维希弗莱堡大学圣祖德儿童研究医院，
类型：发明
国别省市：