一种脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5及其应用。一种脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。多肽ADSCP5能够抑制人瘢痕真皮成纤维细胞中胶原COL3A1以及肌成纤维细胞主要标志物ACTA2的mRNA表达量，显著降低了人瘢痕真皮成纤维细胞中胶原COL1A2、COL3A1以及肌成纤维细胞主要标志物ACTA2的蛋白表达量。所述的人脂肪干细胞分泌多肽ADSCP5可用于制备降低瘢痕真皮成纤维胶原含量、降低肌成纤维细胞量的药物或试剂，为抑制瘢痕增生提供了新的靶点。为抑制瘢痕增生提供了新的靶点。为抑制瘢痕增生提供了新的靶点。

【技术实现步骤摘要】
一种脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5及其应用。

技术介绍

[0002]增生性瘢痕是常见的皮肤纤维化疾病，主要以胶原等细胞外基质局部过度沉积为特征。其不仅影响美观，还会引起瘙痒、疼痛、挛缩等症状甚至残疾，严重降低患者的生活质量，给患者的身体和心灵带来巨大的痛苦。皮肤损伤及外科手术后的患者，增生性瘢痕的发生率为39％
‑
68％，烧伤患者的发生率则高达91％。目前，多采用局部加压、激光干预、药物注射、手术切除等方法治疗增生性瘢痕，然而均存在局限性及不良并发症。因此，积极寻找有效的瘢痕防治手段，具有重要的临床意义。已知增生性瘢痕的形成机制与皮肤损伤后的组织修复过程密切相关，涉及炎症反应、血管生成、再上皮化、肉芽组织形成与重塑等。其中，瘢痕真皮成纤维细胞过度增殖、被激活并分化为肌成纤维细胞(ACTA2)、沉积过量的胶原蛋白(I、III型)等细胞外基质，是瘢痕增生的重要原因。
[0003]近年来临床与基础研究均发现脂肪来源干细胞(Adipose
‑
derived stem cells，ADSC，简称脂肪干细胞)可抑制瘢痕增生，而其作用机制未完全阐明，可能是通过抗炎、免疫调节、抗氧化以及抑制纤维化等，调控正常皮肤创伤的修复、发挥抑制瘢痕增生的功能。近期研究报道，其培养上清可降低成纤维细胞中的胶原合成量从而抑制瘢痕增生。因此从脂肪干细胞的分泌成分切入，探讨其对成纤维细胞生物学功能的影响，有可能找到瘢痕防治的新线索。
[0004]多肽是一类由3
‑
50个氨基酸残基组成的生物活性物质，具有分子量小、容易合成、高效低毒等特点，在多个领域的药物研发中受到重视。目前，全球上市的多肽药物有100多个，涵盖肥胖、糖尿病、抗肿瘤等多个领域，尚没有用于治疗增生性瘢痕的多肽药物。因此，从多肽角度探索脂肪干细胞分泌成分中调控成纤维细胞生物学功能的新成分，有可能为瘢痕的防治提供新手段。
[0005]Thymosin beta10是一类小的肌动蛋白结合因子，在不同物种不同组织中具有不同的功能，已知其参与细胞凋亡、细胞增殖、细胞迁移、血管再生、肿瘤发生以及早期器官发育等一系列过程。但尚未见Thymosin beta10或来源于Thymosin beta10的多肽具有降低瘢痕真皮成纤维细胞胶原含量或降低肌成纤维细胞量的相关报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5。
[0007]本专利技术的另一目的是提供该多肽的应用。
[0008]本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：
[0009]一种脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0010]所述多肽的获得可按照氨基酸序列通过固相合成方法获得；或者通过宿主微生物或细胞内克隆并表达携带编码所述多肽之一的核苷酸序列的DNA片段，通过现有的重组DNA技术制备获得。所使用的表达载体和宿主细胞均为重组技术为公众所知的。表达载体例如pET载体、pGEX载体；宿主细胞例如大肠杆菌(E.coli)，放线菌(Actinomycetes)，芽孢杠菌(Bacillus)，链霉菌(Streptomyces)，本专利技术所述的多肽可用常规的酶切方法将其从宿主细胞中分离，也可以通过常规的液相色谱法进行分离和纯化，上述的分离纯化方法都是本领域技术人员公知的技术。
[0011]编码所述的脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5的基因。
[0012]作为本专利技术的一种优选，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0013]本专利技术所述的脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5在制备降低瘢痕真皮成纤维细胞胶原含量的药物或试剂中的应用。
[0014]本专利技术所述的脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5在制备降低肌成纤维细胞量的药物或试剂中的应用。
[0015]含有所述的脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5的组合物。
[0016]作为本专利技术的一种优选，所述的脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5以治疗有效量存在于组合物中。
[0017]本专利技术所述的多肽可以单独应用，除此之外，本专利技术多肽还可以与其他多肽联合使用。多肽组合物中包含序列为SEQ ID NO.1的多肽。
[0018]所述的药用组合物的剂型选自胶囊、片剂、锭剂、丸剂、滴丸、栓剂、喷雾、乳膏、贴剂中的任意一种。
[0019]所述的药用组合物包含将权利要求1所述人脂肪干细胞分泌多肽ADSCP5制备成所述的剂型的药用辅料。
[0020]一种细胞培养液，含有所述的脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5。
[0021]含有本专利技术所述基因的重组表达载体。
[0022]本专利技术所述表达载体转染的宿主微生物细胞。
[0023]通过基因工程手段制备本专利技术多肽所使用的表达载体和宿主细胞均为重组技术为公众所知的。表达载体例如pET载体、pGEX载体；宿主细胞例如大肠杆菌(E.coli)，放线菌(Actinomycetes)，芽孢杠菌(Bacillus)，链霉菌(Streptomyces)，本专利技术所述的多肽可用常规的酶切方法将其从宿主细胞中分离，也可以通过常规的液相色谱法进行分离和纯化，上述的分离纯化方法都是本领域技术人员公知的技术。
[0024]有益效果：
[0025]脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5(ADKPDMGEIASFDKAKLKKTETQEKN)，为Thymosin beta
‑
10来源肽，由26个氨基酸组成，目前尚无其相关功能报道。生物信息学分析及实验结果显示：
①
ADSCP5来源于Thymosin beta
‑
10蛋白N端的2
‑
27位氨基酸；
②
ProtParam在线分析发现，ADSCP5的不稳定系数(Instability index)为8.66，属于稳定型多肽，可稳定存在；脂肪系数(Aliphatic index)为41.54，平均亲疏水性(Grand average of hydropathicity)为
‑
1.431；
③
细胞培养液中加入ADSCP5，定量PCR实验证实ADSCP5可降低瘢痕真皮成纤维细胞中胶原基因COL3A1及肌成纤维细胞主要标志物ACTA2的mRNA表达量；Western blot实验证实ADSCP5可降低胶原COL1A2、COL3A1以及肌成纤维细胞主要标志
物ACTA2的蛋白表达量。因此，ADSCP5可以在制备降低瘢痕真皮成纤维细胞胶原含量、降低肌成纤维细胞量的药物或试剂中应用。
附图说明
[0026]图1为试验例1中ADSCP5抑制瘢痕真皮成纤维细胞中胶原基因COL3A1以及肌成纤维细胞主要标志物ACT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.编码权利要求1所述的脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5的基因。3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.权利要求1所述的脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5在制备降低瘢痕真皮成纤维细胞胶原含量的药物或试剂中的应用。5.权利要求1所述的脂肪干细胞分泌型内源性多肽ADSCP5在制备降低肌...

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊，李景云，
申请(专利权)人：南京市妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：