一种黄鳝生长催乳素抗血清及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种黄鳝生长催乳素抗血清及其制备方法与应用，该抗血清通过构建含有SEQ ID NO:4所示核酸分子的表达质粒，转染细菌获得重组菌，使用异丙基

【技术实现步骤摘要】
一种黄鳝生长催乳素抗血清及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种黄鳝生长催乳素抗血清及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]鱼类垂体是重要的内分泌器官，分泌多种蛋白激素，调控生长发育过程。生长催乳素(Sml)是垂体分泌的一种蛋白激素，在鱼类代谢、生长和繁殖过程中都发挥重要作用。黄鳝是中国重要的特色淡水养殖鱼类之一，年产量可达30多万吨，具有极高的经济价值，但相关技术中，对于黄鳝生长调控的相关试剂却极为稀少。
[0003]相关技术中，对于鱼类Sml抗血清制备相关的报道极少。传统的方法主要是通过分离纯化垂体中Sml蛋白，然后作为抗原，免疫兔子等获得Sml抗血清。但是，从垂体匀浆中分离Sml蛋白步骤繁琐，难度较大，获取率低，而且不同鱼类之间存在同源性差异较大的问题，尤其是对于黄鳝，其与鲑鱼等常规鱼种的同源性不足80％，序列上存在较大的差异，理化性质也有所不同，因此，不能将制备得到的抗血清有效的沿用至特定鱼种的使用上。
[0004]因此，开发一种能够用于检测黄鳝生长催乳素合成和分泌的方法，从而进一步黄鳝生长的控制技术，其对于黄鳝养殖产业具有极为重要的意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种黄鳝生长催乳素抗血清及其制备方法与应用，该抗血清具有极好的特异性，能够特异性与黄鳝生长催乳素结合，而不受到其他垂体蛋白激素的干扰，而且效价可达1：4096000以上。
[0006]本专利技术的第一个方面，提供黄鳝生长催乳素的抗原多肽。
[0007]根据本专利技术的第一个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述抗原多肽的氨基酸序列为：
[0008]IPLVCKEEQGSLTRCPSISQEKLLDRVIQHAELIYRVSEESCSLFEEMFVPFPMRLQRNQAGYACITKELPIPSSKSEIQQMSDKWLLHSVLMLVRSWIEPLVYLQTTLDLYDDASEVLLNKTKWVSEKLLSLEQGVMVLIKKMLDEGMLPTTYSEQGLLHNDGQPEMLESVMRDYTLLSCFKKDAHKMETFLKLLKCRQTDIYNCA(SEQ ID NO.1)。
[0009]垂体生长催乳素是分泌性蛋白，新生肽含有信号肽，信号肽切除后变为成熟肽。新生肽和成熟肽两者理化性质和分子量接近，难以分离。因此，如果利用常规方法从垂体分离纯化的生长催乳素会是成熟肽和新生肽的混合物，制备的抗血清中也可能存在针对信号肽的抗体，从而降低抗血清的特异性。
[0010]本专利技术的第二个方面，提供编码本专利技术第一个方面所述抗原多肽的核酸分子。
[0011]根据本专利技术的第二个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0012]所述核酸分子片段大小为621bp，经测序鉴定为黄鳝sml基因的第73bp～693bp片
段(序列编号XM_020600369.1)。
[0013]本专利技术的第三个方面，提供本专利技术第二个方面所述核酸分子的制备方法，包括：使用引物对扩增黄鳝生长催乳素基因。
[0014]根据本专利技术的第三个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述引物对的核苷酸序列为：
[0015]上游引物F：上游引物F：
[0016]下游引物R：下游引物R：
[0017]在上游引物F中标记有下划线且加粗部分为Nco I的酶切位点，而在下游引物R中标记有下划线且加粗部分为BamH I酶切位点。
[0018]当然，本领域技术人员也可以根据所述核酸分子的具体核苷酸序列采用其他方法合成或制备得到。
[0019]根据本专利技术的第三个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述扩增包括但不限于使用高保真PCR扩增。
[0020]在本专利技术的一些优选实施方式中，所述高保真PCR扩增体系为：
[0021]组分用量上游引物F(10μM)1μL下游引物R(10μM)1μL黄鳝垂体组织cDNA1μLAccuPrime Taq DNA聚合酶(5U/μL)0.1μLTaq DNA聚合酶反应缓冲液(10
×
)2.5μLH2O19.4μL总计25μL
[0022]扩增程序为：94℃预变性1min后PCR扩增30循环，循环参数为94℃,30s；56℃,30s；68℃,1min。
[0023]本专利技术的第四个方面，提供本专利技术第一个方面所述抗原多肽在下述(1)～(4)任一项中的应用；
[0024](1)制备黄鳝生长催乳素抗血清；
[0025](2)制备黄鳝生长催乳素抗体；
[0026](3)黄鳝生长催乳素定性或定量检测；
[0027](4)制备黄鳝生长催乳素定性或定量检测试剂。
[0028]根据本专利技术的第四个方面，在本专利技术的一些实施方式中，(2)中所述抗体包括单克隆抗体和多克隆抗体。
[0029]本专利技术的第五个方面，提供本专利技术第二个方面所述核酸分子在下述(1)～(6)任一项中的应用；
[0030](1)制备黄鳝生长催乳素抗原；
[0031](2)制备含有本专利技术第二个方面所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组菌；
[0032](3)制备黄鳝生长催乳素抗血清；
[0033](4)制备黄鳝生长催乳素抗体；
[0034](5)黄鳝生长催乳素定性或定量检测；
[0035](6)制备黄鳝生长催乳素定性或定量检测试剂。
[0036]根据本专利技术的第五个方面，在本专利技术的一些实施方式中，(1)中所述抗原包括使用蛋白载体偶联后得到的抗原。
[0037]根据本专利技术的第五个方面，在本专利技术的一些实施方式中，(2)中所述表达盒、重组载体或重组菌具体包括：
[0038](1)含有本专利技术第二个方面所述核酸分子的表达盒；
[0039](2)含有本专利技术第二个方面所述核酸分子的重组载体；
[0040](3)含有(1)的重组载体；
[0041](4)含有(1)的重组菌；
[0042](5)含有(2)的重组菌；
[0043](6)含有(3)的重组菌。
[0044]根据本专利技术的第五个方面，在本专利技术的一些实施方式中，(4)中所述抗体包括单克隆抗体和多克隆抗体。
[0045]本专利技术的第六个方面，提供含有本专利技术第二个方面所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组菌。
[0046]根据本专利技术的第六个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述表达盒、重组载体或重组菌具体包括：
[0047](1)含有本专利技术第二个方面所述核酸分子的表达盒；
[0048](2)含有本专利技术第二个方面所述核酸分子的重组载体；
[0049](3)含有(1)的重组载体；
[0050](4)含有(1)的重组菌；
[0051](5)含有(2)的重组菌；
[0052](6)含有(3)的重组菌。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.黄鳝生长催乳素的抗原多肽，其特征在于，所述抗原多肽的氨基酸序列为：IPLVCKEEQGSLTRCPSISQEKLLDRVIQHAELIYRVSEESCSLFEEMFVPFPMRLQRNQAGYACITKELPIPSSKSEIQQMSDKWLLHSVLMLVRSWIEPLVYLQTTLDLYDDASEVLLNKTKWVSEKLLSLEQGVMVLIKKMLDEGMLPTTYSEQGLLHNDGQPEMLESVMRDYTLLSCFKKDAHKMETFLKLLKCRQTDIYNCA。2.编码权利要求1所述抗原多肽的核酸分子。3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ IDNO:4所示。4.权利要求2或3所述核酸分子的制备方法，其特征在于，使用引物对扩增黄鳝生长催乳素基因；所述引物对的核苷酸序列优选为：上游引物F：5
’‑
GAGACCATGGGCATCCCATTAGTCTGTAAGGAGGAGC
‑3’
；下游引物R：5
’‑
GAGAGGATCCCTATGCACAGTTATATA...

【专利技术属性】
技术研发人员：张利红，陈栋，时博阳，张为民，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：