一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针及其应用,泌尿生殖道感染病原体包括沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和生殖支原体，DNA探针包括探针H1和探针H2，DNA探针与目标序列混合进行催化发夹自组装反应，探针H1的5

【技术实现步骤摘要】
一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针及其应用


[0001]本专利技术涉及核酸检测
，具体的是一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针及其应用。

技术介绍

[0002]沙眼衣原体(Chlamydia Trachomatis，CT)感染是目前诊断发病数最高的一种性传播疾病，据统计，该疾病全球每年约有1.3亿新发病例，其中青少年是受影响较大的群体。女性感染后会出现盆腔炎、尿道炎、宫外孕、输卵管阻塞、异位妊娠等症状，还会增加宫颈癌的发病风险。对于男性，则会出现尿道炎、附睾炎、结膜炎等症状。此外，沙眼衣原体感染还会引发反应性关节炎以及新生儿眼炎和肺炎。
[0003]目前临床上检测沙眼衣原体的方法主要有培养法、免疫法和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)法。培养法检测沙眼衣原体是传统的病原学检测方法，但由于检测耗时，并且易受标本取材多少，送检时间等因素影响导致假阴性。免疫法操作简单，耗时较短，但是特异性和敏感性却不够理想。PCR法灵敏度高，特异性强，但是需要专门的技术人员，对仪器也有特定的要求，在基层单位和偏远地区不能普及开来。
[0004]淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae，NG)是淋病的病原菌，淋病不及时诊断和治疗会引起严重的并发症，早期诊断和治疗是控制淋病传播的关键。实验室诊断技术在淋病的诊断和治疗中具有十分重要的作用。目前，常用的实验室诊断方法有涂片镜检、分离培养、免疫学方法、分子生物学检查和快速检查等。分泌物直接涂片染色镜检大多常用革兰染色，但是有其局限性，细菌培养是诊断淋病的金标准，也是目前诊断淋病最可靠的方法，但淋病奈瑟菌培养困难，仅做细菌学培养检查，诊断意义有限。
[0005]生殖支原体(Mycoplasma genitalium，MG)是一种性传播感染病原体，可引起宫颈炎、盆腔炎、前列腺炎、附翠炎、直肠炎、尿道炎、关节炎、输卵管不孕等症状或并发症。据文献汇报，在男性有症状非淋菌性尿道炎患者中，生殖支原体阳性率为15％～25％，我国南京性病门诊有尿道炎症状男性患者中生殖支原体阳性率19.7％，在非衣原体性非淋球菌性尿道炎中生殖支原体阳性率达41.4％。
[0006]生殖支原体的临床表现缺乏特异性，其诊断依赖于实验室的病原学诊断。生殖支原体缺乏细胞壁，革兰染色镜检不可见。并且体外培养极其困难且耗时长达数月，使得分离培养不能在临床上常规开展。生殖支原体的基因组与肺炎支原体十分相似，由于有交叉反应性，所以血清学试验的特异性较差，且缺乏标准诊断试剂，血清学试验仅在评价生殖支原体与盆腔炎和不孕症的相关性研究中有应用。

技术实现思路

[0007]为解决上述
技术介绍
中提到的不足，本专利技术的目的在于提供一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针及其应用，可快速、廉价、高灵敏度地检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和生殖支原体。
[0008]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0009]一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针，泌尿生殖道感染病原体包括沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和生殖支原体，DNA探针包括探针H1和探针H2，DNA探针与目标序列混合进行催化发夹自组装反应，探针H1的5
’
端由地高辛修饰，探针H2的5
’
端由生物素修饰。
[0010]泌尿生殖道感染病原体为沙眼衣原体，DNA探针以SEQ ID NO.1所示的基因作为检测靶标，探针H1为序列如SEQ ID NO.2所示的CT
‑
H1，探针H2为序列如SEQ ID NO.3所示的CT
‑
H2。
[0011]泌尿生殖道感染病原体为淋病奈瑟菌，DNA探针以SEQ ID NO.4所示的基因作为检测靶标，探针H1为序列如SEQ ID NO.5所示的NG
‑
H1，探针H2为序列如SEQ ID NO.6所示的NG
‑
H2。
[0012]泌尿生殖道感染病原体为生殖支原体，DNA探针以SEQ ID NO.7所示的基因作为检测靶标，探针H1为序列如SEQ ID NO.8所示的MG
‑
H1，探针H2为序列如SEQ ID NO.9所示的MG
‑
H2。
[0013]一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针在制备检测沙眼衣原体产品中的应用。
[0014]一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针在制备检测淋病奈瑟菌产品中的应用。
[0015]一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针在制备检测生殖支原体产品中的应用。
[0016]一种泌尿生殖道感染病原体核酸的检测方法，包括以下检测步骤：
[0017](1)取阴道分泌物，并将拭子头浸入含细胞保存液的取样管中；
[0018](2)取250μL上述的待测标本，加入到含有H1和H2冻干粉的试管中，充分混匀后，至于35℃水浴锅中，水浴反应15分钟；
[0019](3)水浴后，取80μL上述反应液分别滴加在免疫分析试纸条的加样孔中，5
‑
10分钟后，将分析试纸条插入荧光检测仪，读取检测线和质控线的荧光值。
[0020]本专利技术的有益效果：
[0021]本专利技术利用等温无酶信号放大系统联合免疫分析试纸条检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和生殖支原体核酸的检测，可快速、廉价、高灵敏度地检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和生殖支原体。该方法不需要繁杂的检测前准备，也不需要PCR检测的仪器，因此可实现沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和生殖支原体的即时检验。与PCR不同，由于本专利技术是无酶信号扩增系统，故无需用到成本较高的DNA聚合酶，故能明显降低检测成本，可适用于大规模的筛查和即时检测，可满足未配备PCR仪器的基层医院进行快速检测。
附图说明
[0022]下面结合附图对本专利技术作进一步的说明。
[0023]图1是本专利技术催化发夹型DNA自组装反应的具体步骤；
[0024]图2是本专利技术免疫分析试纸条检测Dig和Bio双修饰的H1
‑
H2杂交双链的原理；
[0025]图3是本专利技术非还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳验证催化发夹型DNA自组装反应用于检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和生殖支原体的可行性分析结果；
[0026]图4是本专利技术等温无酶信号放大系统联合免疫分析试纸条的沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和生殖支原体核酸检测方法的灵敏度分析结果；
[0027]图5是本专利技术等温无酶信号放大系统联合免疫分析试纸条的沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和生殖支原体核酸检测方法的特异性分析结果。
具体实施方式
[0028]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0029]实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针，其特征在于，所述泌尿生殖道感染病原体包括沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和生殖支原体，所述DNA探针包括探针H1和探针H2，DNA探针与目标序列混合进行催化发夹自组装反应，探针H1的5
’
端由地高辛修饰，探针H2的5
’
端由生物素修饰。2.根据权利要求1所述的检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针，其特征在于，所述泌尿生殖道感染病原体为沙眼衣原体，所述DNA探针以SEQ ID NO.1所示的基因作为检测靶标，所述探针H1为序列如SEQ ID NO.2所示的CT
‑
H1，所述探针H2为序列如SEQ ID NO.3所示的CT
‑
H2。3.根据权利要求1所述的检测泌尿生殖道感染病原体核酸的DNA探针，其特征在于，所述泌尿生殖道感染病原体为淋病奈瑟菌，所述DNA探针以SEQ ID NO.4所示的基因作为检测靶标，所述探针H1为序列如SEQ ID NO.5所示的NG
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H1，所述探针H2为序列如SEQ ID NO.6所示的NG
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H2。4.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴国球，范小波，肖枫，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：