血浆外泌体对AAAD伴肺损伤药物研制中应用制造技术

本发明专利技术公开了血浆外泌体对AAAD伴肺损伤药物研制中应用，具体为血浆外泌体hsa

Application of plasma exosomes in the development of drugs for Aaad with lung injury

【技术实现步骤摘要】
血浆外泌体对AAAD伴肺损伤药物研制中应用


[0001]本专利技术属于急性A型主动脉夹层合并急性肺损伤防治研究
，具体涉及血浆外泌体hsa
‑
miR
‑
206和hsa
‑
miR
‑
485
‑
5p对急性A型主动脉夹层合并急性肺损伤药物研制中的应用。

技术介绍

[0002]急性A型主动脉夹层(TypeA acute aortic dissection,AAAD)是致命的心血管疾病，该病起病急、进展快、死亡率高，需要紧急手术治疗，而AAAD术前急性肺损伤(Acute Lung Injury,ALI)是严重影响手术结果的并发症之一。近年来，国内外研究显示，约50％的AAAD患者术前并发肺损伤和低氧血症，不仅延长患者术后机械通气、ICU停留时间以及住院时间，亦增加围手术期死亡率，严重影响患者预后。因此，探究AAAD术前ALI的发病机制、寻找防治ALI的干预措施、控制AAAD围手术期的高死亡率仍是全球心血管领域面临的重大临床热点与前沿问题。
[0003]目前认为，AAAD术前发生ALI的主要原因是主动脉内膜撕裂后，血管壁中层组织的细胞与细胞外基质广泛暴露于血液，导致炎症细胞聚集，释放大量的炎症因子和活性氧家族，形成瀑布式级联反应，通过循环直接和间接地破坏肺血管内皮细胞间连接，导致肺血管屏障功能障碍，渗透性增高，大量液体渗入间质和肺泡内，形成水肿，使肺泡上皮进一步受损，呼吸膜结构改变，最终形成ALI。然而，国内外关于AAAD合并ALI的研究多数仍停留在生物学标志物、危险因素等临床分析，缺乏对其发病机制的深入探讨，尤其是针对AAAD患者如何通过全身循环损伤肺组织、是否存在有效靶点进行干预等问题均未曾阐明。
[0004]近年来，外泌体(Exosomes，Exos)的发现结合其独特的细胞通讯方式，为许多疾病的诊断和治疗提供了新型机制和重要价值。外泌体是一类大小约30
‑
100nm，具有脂质双层膜的囊状结构，它是细胞在生理或病理条件下，细胞膜向内凹陷释放的细胞外囊泡，可携带大量功能性的microRNA(miRNAs)，少量的mRNA、lncRNA以及特异性蛋白质等生物活性物质，通过精确的“打包”机制被释放到细胞外并选择性的与其他细胞质膜融合，实现细胞之间的物质交换和信号传导，参与机体多种生理、病理过程。其中，miRNAs作为外泌体中的重要内含物，约占外泌体内所有RNAs的41.72％。它是一类短链非编码RNAs，在外泌体的保护下可免受血液循环中酶的降解，形成相对较长和稳定的表达时间。miRNAs可通过外泌体靶向进入受体细胞，调控转录后水平的基因表达，参与细胞分化、生长等生命活动。最新研究发现，巨噬细胞来源的外泌体与腹主动脉瘤的形成有关；血管平滑肌细胞来源的外泌体可通过miRNAs参与胸主动脉瘤的发生发展；还有研究报道，循环中miR
‑
15与miR
‑
23在主动脉夹层患者中显著升高，可能是其潜在诊断靶点。然而，目前有关AAAD患者循环中外泌体的分泌和功能如何，其携带的功能性miRNAs是否在AAAD合并术前ALI中起作用等问题均不清楚。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一组干预AAAD合并ALI的潜在药
物靶点，为AAAD合并ALI的防治提供参考数据。本专利技术发现AAAD合并ALI患者与AAAD不合并ALI患者血浆外泌体内hsa
‑
miR
‑
206和hsa
‑
miR
‑
485
‑
5p表达存在显著差异，这两种miRNAs可成为AAAD继发ALI的潜在临床生物学标志物，对AAAD合并ALI的防治及药物研制有重要的临床应用价值；
[0006]为了达到上述技术目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0007]血浆外泌体hsa
‑
miR
‑
206和hsa
‑
miR
‑
485
‑
5p在防治AAAD合并ALI的药物研制中的应用；
[0008]优选的，所述AAAD合并ALI的防治是通过上调AAAD患者血浆外泌体内hsa
‑
miR
‑
206，并下调其hsa
‑
miR
‑
485
‑
5p；
[0009]优选的，所述AAAD患者血浆外泌体内hsa
‑
miR
‑
206上调，达到抑制CX43蛋白的表达作用，降低内皮细胞通透性，从而改善肺血管内皮屏障功能障碍；
[0010]优选的，所述AAAD患者血浆外泌体内hsa
‑
miR
‑
485
‑
5p下调，从而抑制炎症因子表达，达到改善肺血管内皮炎症反应的作用；
[0011]优选的，所述炎症因子包括：IL
‑
1β、TNF
‑
α、IL
‑
6、IL
‑
8、MPO。
[0012]本专利技术的有益效果是：
[0013]本专利技术通过血浆外泌体miRNAs的高通量测序和RT
‑
qPCR技术，联合筛选出具有临床生物标志物性质的血浆外泌体hsa
‑
miR
‑
206和hsa
‑
miR
‑
485
‑
5p，以及上述miRNAs对AAAD合并ALI的作用机制，可将其应用于AAAD合并ALI防治的药物研制，为降低AAAD患者术前ALI的发生、增加患者手术机会及改善预后提供有力依据，具有重要临床转化价值。
附图说明
[0014]图1是血浆外泌体电镜(1A)、粒径分析(1B)和Western blot(WB)(1C)鉴定结果示意图；
[0015]图2是AAAD合并ALI患者与AAAD不合并ALI患者血浆外泌体差异表达的miRNAs。2A是miRNAs测序的表达量火山图；红色：上调，绿色：下调，Q(较正的P值)<0.05；2B是根据差异倍数、平均表达量选取Top 10的上、下调miRNAs的表达量聚类热图；红色：上调，蓝色：下调；Q<0.05；Non
‑
ALI：AAAD不合并ALI患者；ALI：AAAD合并ALI患者；
[0016]图3是Top 10的上、下调miRNAs的靶基因功能与通路富集分析；图3A
‑
C是miRNAs靶基因的Gene Ontology(GO)功能富集分析，p<0.05；3D是miRNAs靶基因的Kyoto Encyclopedia ofGenes and Genomes(KEGG)通路富集分析；p<0.05；
[0017]图4是结合测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.血浆外泌体hsa
‑
miR
‑
206和hsa
‑
miR
‑
485
‑
5p在防治AAAD合并ALI的药物研制中的应用。2.根据权利要求1所述血浆外泌体hsa
‑
miR
‑
206和hsa
‑
miR
‑
485
‑
5p在防治AAAD合并ALI的药物研制中的应用，其特征在于，所述AAAD合并ALI的防治是通过上调AAAD患者血浆外泌体内hsa
‑
miR
‑
206，并下调其hsa
‑
miR
‑
485
‑
5p。3.根据权利要求1所述血浆外泌体hsa
‑
miR
‑
206和hsa
‑
miR
‑
485
‑
5p在防治AAAD合并ALI的药物研制中的应用，其特征在于，所述AAAD患者血浆外泌体内hsa

【专利技术属性】
技术研发人员：张驰原，胥茜，林国强，石瑞正，张磊，白慧，张艳峰，陈旭良，付祖丽，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：