环状RNAcircLMBR1及其表达产物在制备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体公开了一种环状RNA circLMBR1及其表达产物在制备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用。所述环状RNA circLMBR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术通过检测环状RNA circLMBR1基因在膀胱癌样本中的表达差异，结果显示环状RNA circLMBR1基因在膀胱癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织中的表达水平。并且通过慢病毒介导的方法构建过表达circLMBR1基因的稳定细胞株，过表达环状RNA circLMBR1基因的膀胱癌细胞株与对照膀胱癌细胞株相比，其增殖速度显著降低。降低。降低。

Application of circular rnacirclmbr1 and its expression products in the preparation of drugs for the diagnosis and treatment of bladder cancer

【技术实现步骤摘要】
环状RNA circLMBR1及其表达产物在制备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其是涉及一种环状RNA circLMBR1及其表达产物在制备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用。

技术介绍

[0002]膀胱癌(Bladder Cancer，BC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一。根据对2018年全球新发癌症的病例统计，膀胱癌的发病率居人类所有恶性肿瘤发病率的第12位，死亡率居第14位。故深入研究膀胱癌发生和发展中的分子机制、开发新的诊断标志物和治疗靶点是当前膀胱癌研究的热点和重点。
[0003]目前对膀胱癌的发病原因和进展机制所知甚少，除了常见的流行病学和遗传学因素，许多错综复杂的分子事件是导致肿瘤细胞形成、进展和转移的深层次原因。环状RNA(circRNA)是一种新兴的内源性ncRNA，是继微小RNA(microRNA，miRNA)以及长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)后ncRNA家族中极具研究潜力的成员。最近的研究表明，circRNA在细胞的恶性转化过程中起到非常重要的作用。因此，circRNA在新型疾病诊断与治疗方法的开发应用上具有广阔的前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种环状RNA circLMBR1及其表达产物在制备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用。环状RNA circLMBR1及其表达产物在膀胱癌组织中表达显著下降，因此，环状RNA circLMBR1及其表达产物可作为膀胱癌的诊断标志物。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0006]第一目的，本专利技术提供了一种环状RNA circLMBR1及其表达产物在制备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用，所述环状RNA circLMBR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0007]LMBR1(limb development membrane protein 1)基因位于7号染色体的长臂上，其mRNA的大小约5kb，该基因编码LMBR1样膜蛋白家族的成员，其蛋白质家族的另一成员是脂质运载蛋白跨膜受体。CircLMBR1是来源于LMBR1的circRNA，由6个外显子剪切拼接而来，长度为578nt。
[0008]所述环状RNA circLMBR1的结构是由如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列转录后经剪接形成的首尾相连的环状RNA结构。
[0009]本专利技术通过采用荧光定量PCR的方法检测膀胱癌病人中circLMBR1基因表达情况，发现circLMBR1基因在膀胱癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织中的表达水平，因此，环状RNA circLMBR1及其表达产物可作为膀胱癌的诊断标志，故可制作检测该基因表达变化的试剂盒以用于诊断膀胱癌。
[0010]作为本专利技术所述应用的优选实施方式，所述环状RNA circLMBR1的成熟体序列如
SEQ ID NO:2所示。
[0011]第二目的，本专利技术提供了一种环状RNA circLMBR1及其表达产物在制备膀胱癌临床诊断的芯片、试剂或试剂盒中的应用，所述环状RNA circLMBR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0012]第三目的，本专利技术提供了一种检测环状RNA circLMBR1的试剂在制备膀胱癌临床诊断的芯片或试剂盒中的应用。
[0013]作为本专利技术所述应用的优选实施方式，所述试剂包括扩增环状RNA circLMBR1的特异性引物，所述特异性引物包括如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的DNA序列组成的引物对或如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的DNA序列组成的引物对。
[0014]本专利技术先通过设计针对环状RNA circLMBR1的特异性引物进行RT
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PCR、一代测序、RNA酶降解实验证实circLMBR1基因的客观存在。
[0015]第四目的，本专利技术提供了一种环状RNA circLMBR1基因激活剂在制备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用，所述环状RNA circLMBR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0016]第五目的，本专利技术提供了一种治疗膀胱癌的药物组合物，所述药物组合物包括环状RNA circLMBR1基因激活剂。
[0017]作为本专利技术所述药物组合物的优选实施方式，所述药物组合物还包括药物上可接受的载体。
[0018]在上述技术方案中，药物上可接受的载体包括任何和所有生理上相容的溶剂、分散介质、包衣料、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延缓剂等。药学上可接受的载体的实施例包括水、盐水、磷酸缓冲盐水、右旋糖酐、甘油、乙醇等中的一个或多个以及它们的组合。在很多情况下，优选的是将等渗剂例如糖、多元醇或氯化钠包括在组合物中。药学上可接受的载体还可包含少量的能提高抗体或抗体部分的货架期或有效性的辅助物质，如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲液。
[0019]第六目的，本专利技术提供了一种膀胱癌诊断的试剂盒，所述试剂盒包括扩增环状RNA circLMBR1的特异性引物，所述特异性引物包括如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的DNA序列组成的引物对或如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的DNA序列组成的引物对。
[0020]第七目的，本专利技术提供了一种稳定细胞系，所述稳定细胞系过表达环状RNA circLMBR1及其表达产物，所述环状RNA circLMBR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0021]本专利技术对circLMBR1基因进行了体外细胞功能学的研究，通过将circLMBR1基因构建到环状RNA专用的慢病毒载体上，以建立过表达该基因的稳定细胞株。过表达circLMBR1基因的膀胱癌细胞株与对照细胞株相比，其增殖速度显著减慢，因此，环状RNA circLMBR1及其表达产物可以应用在制备治疗膀胱癌的药物中。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0023]本专利技术提供了一种环状RNA circLMBR1及其表达产物在制备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用，可以将环状RNA circLMBR1及其表达产物作为诊断膀胱癌的标志物，使膀胱癌诊断更加准确、快速，作为制备治疗膀胱癌药物的靶基因为治疗膀胱癌提供了新的治疗靶点和治疗途径。
附图说明
[0024]图1为环状RNA circLMBR1基因表达产物的琼脂糖凝胶电泳图；
[0025]图2为实施例2中RNaseR实验对环状的circLMBR1和线性的LMBR1影响情况的柱状图；
[0026]图3为实施例2中QPCR检测膀胱癌组织中环状RNAcircLMBR1表达结果对比图；
[0027]图4为实施例3中构建好的稳定细胞株MCA
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SV
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HUC
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1和CdCl2
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SV...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.环状RNA circLMBR1及其表达产物在制备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用，所述环状RNA circLMBR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述环状RNA circLMBR1的成熟体序列如SEQID NO:2所示。3.环状RNA circLMBR1及其表达产物在制备膀胱癌临床诊断的芯片、试剂或试剂盒中的应用，所述环状RNA circLMBR1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。4.检测环状RNA circLMBR1的试剂在制备膀胱癌临床诊断的芯片或试剂盒中的应用。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂包括扩增环状RNA circLMBR1的特异性引物，所述特异性引物包括如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的DNA序列组成的引物对或如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的DNA序列组成的引物对。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：戚德峰，
申请(专利权)人：广州医科大学，
类型：发明
国别省市：