山莨菪碱的反式异构体及其分离和检测方法技术

本发明专利技术属于药物分离和分析领域，具体的涉及山莨菪碱的反式异构体及其分离和检测方法。通过HPLC和超临界色谱的结合，能够将消旋山莨菪碱的反式异构体进行有效的分离，接着通过HPLC和超临界色谱中具有创造性的色谱参数选择，提升了分离度，使最后得到的山莨菪碱的两种反式异构体单体的纯度高，为大规模工业化应用奠定了基础。用奠定了基础。用奠定了基础。

Trans isomer of anisodamine and its separation and detection method

【技术实现步骤摘要】
山莨菪碱的反式异构体及其分离和检测方法


[0001]本专利技术属于药物分离和分析领域，具体的涉及山莨菪碱的反式异构体及其分离和检测方法。

技术介绍

[0002]山莨菪碱可与乙酰胆碱竞争拮抗M受体，用于治疗平滑肌痉挛、神经痛、暴发型脑膜炎、球菌性脑膜炎、中毒性痢疾及血管痉挛引起的循环障碍等。消旋山莨菪碱为山莨菪碱的合成品(654
‑
2)，包含四种光学异构体，分别为6R,2'S、6S,2'R、6R,2'R、6S,2'S构型。已有相关动物实验证明，对于离体大鼠气管的舒张效应强弱上，6S,2'S异构体表现出最强的药理活性。而在离体大鼠小肠平滑肌舒张效应上，6R,2'S异构体表现出最强的药理活性。因此，通过手性拆分的方法将消旋山莨菪碱分离为四种光学异构体，以单一光学异构体进行用药，可以极大地提高药物的安全性和有效性。
[0003]现有的拆分方法有采用毛细管电泳法或者HPLC实现山莨菪碱四种光学异构体的拆分。
[0004]但由于现有的分离方法存在分离后的光学异构体纯度低等缺陷，无法适用于工业化规模生产和上市的要求。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了解决上述
技术介绍
中现有的分离方法存在分离后的光学异构体纯度低等缺陷的技术问题，提供山莨菪碱的反式异构体及其分离和检测方法。
[0006]本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]消旋山莨菪碱为山莨菪碱的合成品(654
‑
2)，包含四种光学异构体，分别为6R,2'S、6S,2'R、6R,2'R、6S,2'S构型。本专利技术将6R,2
’
R和6S,2
’
S构型定义为反式山莨菪碱，将6R,2
’
S和6S,2
’
R构型定义为顺式山莨菪碱。
[0008]本专利技术一方面提供了一种山莨菪碱的反式异构体的分离方法，包括以下步骤：
[0009]S1、取消旋山莨菪碱，采用动态制备型HPLC进行分离，得到含有6R,2
’
S和6S,2
’
R的顺式山莨菪碱以及含有6R,2
’
R和6S,2
’
S的反式山莨菪碱；
[0010]S2、将步骤S1得到的所述顺式山莨菪碱和所述反式山莨菪碱的pH调至8.5～10后，用氯仿等比例萃取至少1次，合并萃取液旋干，得到纯化后的顺式山莨菪碱和反式山莨菪碱；
[0011]S3、将步骤S2中得到的反式山莨菪碱用溶剂溶解后采用超临界色谱法进行拆分，接着旋干后分别得到6R,2
’
R的山莨菪碱和6S,2
’
S的山莨菪碱，所述超临界色谱法的具体参数如下：
[0012]色谱柱：30*250mm 10μm；
[0013]流动相：超临界CO2、N20和NH3中的一种；
[0014]助溶剂：甲醇和0.2％的7mol的NH3，助溶剂的质量为流动相的15～30％；
[0015]循环时间：10～20min；
[0016]运行时间：20～30min；
[0017]波长：200～240nm；
[0018]背压：90～110bar；
[0019]柱温：30～40℃；
[0020]流动相流速：30～40ml/min；
[0021]总流速：40～50ml/min。
[0022]本专利技术的有益效果是：通过HPLC和超临界色谱法的结合，能够顺利的实现山莨菪碱中反式异构体的拆分和提取，提取后的反式异构体的单体的纯度均高于99％，成盐后得到的氢溴酸山莨菪碱的纯度依旧高于99％，能够达到并且远远高于《中国药典》的纯度要求，相比于市面上消旋山莨菪碱的异构分离后得到的反式异构体的单体的纯度有了极大的提升，直接提高了产品的质量和安全性，解决了
技术介绍
中的技术问题。以单一光学异构体进行用药，可以极大地提高药物的安全性和有效性。
[0023]在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。
[0024]进一步，在步骤S3中，所述流动相为超临界CO2。
[0025]采用上述进一步方案的有益效果是，CO2的超临界流动相条件能够让消旋山莨菪碱中反式异构体的分离效果更好，实现有效的分离。
[0026]进一步，在步骤S3中，所述流动相的流速为33.75ml/min,助溶剂的质量为流动相的25％。
[0027]采用上述进一步方案的有益效果是，适当的流速和助溶剂的质量配比能够缩短出峰时间和让消旋山莨菪碱能够顺利实现异构体的分离。
[0028]进一步，在步骤S3中，所述溶剂为甲醇，所述波长为215nm。
[0029]采用上述进一步方案的有益效果是，采用甲醇为溶剂能够有效提升分离度，有利于消旋山莨菪碱拆分。
[0030]进一步，在步骤S3中，所述柱温为35℃，所述色谱柱为CHIRALCEL OX(30*250mm 10μm)(Daicel)，所述循环时间为13.5min,所述运行时间为25min,所述背压为100bar，所述总流速为45ml/min。
[0031]采用上述进一步方案的有益效果是，上述最佳参数的实施，能够保证消旋山莨菪碱中的反式异构体顺利进行拆分，拆分效果好，直接提升了后续以两个反式异构体单体作为原料进行药物合成后得到产品的质量。
[0032]进一步，在步骤S1中，所述制备型HPLC进行分离的色谱参数如下：
[0033]色谱柱：DAC80动态制备分离柱；
[0034]色谱柱填料：华谱LD
‑2‑
C18；
[0035]流速：150～220ml/min；
[0036]波长：200～220nm；
[0037]洗脱时间在0～45min时，流动相为0.1％甲酸和甲醇按照95:5的质量比例混合的混合物，洗脱时间在45～60min时，流动相为0.1％甲酸和甲醇按照30:70的质量比例混合的混合物。
[0038]采用上述进一步方案的有益效果是，能够对拆分过程更好的进行质量控制，提升
了拆分后得到产品的质量。
[0039]进一步，在步骤S1中，流速为200ml/min，波长为210nm。
[0040]本专利技术的有益效果是，通过HPLC和超临界色谱的结合，能够将消旋山莨菪碱的反式异构体进行有效的分离，接着通过HPLC和超临界色谱中具有创造性的色谱参数选择，提升了分离度，使得最后得到的山莨菪碱的两种反式异构体单体的纯度高，为大规模工业化应用奠定了基础。
[0041]另一方面，本专利技术还提供了一种山莨菪碱的一对反式异构体的检测方法，包括以下步骤：
[0042]取6R,2
’
R的山莨菪碱或6S,2
’
S的山莨菪碱，采用LCMS进行检测，LCMS的参数如下：
[0043]色谱柱：Waters X Bridge C18柱(50mm*4.6mm*3.5um)；
[0044]流动相：流动相A为0.01mol/L本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种山莨菪碱的反式异构体的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取消旋山莨菪碱，采用动态制备型HPLC进行分离，得到含有6R,2
’
S和6S,2
’
R的顺式山莨菪碱以及含有6R,2
’
R和6S,2
’
S的反式山莨菪碱；S2、将步骤S1得到的所述顺式山莨菪碱和所述反式山莨菪碱的pH调至8.5～10后，用氯仿等比例萃取至少1次，合并萃取液旋干，得到纯化后的顺式山莨菪碱和反式山莨菪碱；S3、将步骤S2中得到的反式山莨菪碱用溶剂溶解后采用超临界色谱法进行拆分，接着旋干后分别得到6R,2
’
R的山莨菪碱和6S,2
’
S的山莨菪碱，所述超临界色谱法的具体参数如下：色谱柱：30*250mm 10μm；流动相：超临界CO2、N20和NH3中的一种；助溶剂：甲醇和0.2％的7mol的NH3，助溶剂的质量为流动相的15～30％；循环时间：10～20min；运行时间：20～30min；波长：200～240nm；背压：90～110bar；柱温：30～40℃；流动相流速：30～40ml/min；总流速：40～50ml/min。2.根据权利要求1所述的山莨菪碱的反式异构体的分离方法，其特征在于，在步骤S3中，所述流动相为超临界CO2。3.根据权利要求1所述的山莨菪碱的反式异构体的分离方法，其特征在于，在步骤S3中，所述流动相的流速为33.75ml/min,助溶剂的质量为流动相的25％。4.根据权利要求1至3任一项所述的山莨菪碱的反式异构体的分离方法，其特征在于，在步骤S3中，所述溶剂为甲醇，所述波长为215nm。5.根据权利要求4所述的山莨菪碱的反式异构体的分离方法，其特征在于，在步骤S3中，所述柱温为35℃，所述色谱柱为CH...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘昭华，刘武，杨美，何杰，罗斌，王恒，
申请(专利权)人：成都第一制药有限公司，
类型：发明
国别省市：