具有靶向葡萄糖激酶显著降血糖和降血脂功效的长双歧杆菌070103及其应用制造技术

本发明专利技术公开了具有靶向葡萄糖激酶显著降血糖和降血脂功效的长双歧杆菌070103及其应用。长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）070103，保藏编号为GDMCC NO：62526。本发明专利技术所述的长双歧杆菌070103分离于健康人的肠道菌群，用于发酵乳的时候，在体外能对人源肝脏葡萄糖激酶具有激活作用，此外，所述菌株来源于健康人类粪便，对人体无毒副作用，同时全基因组测序分析发现，该菌株无毒力基因，相对于用于治疗糖脂代谢紊乱类的如肥胖、2型糖尿病代谢疾病的传统药物具有一定的优势。该菌株可用于制作益生菌发酵乳，具有广阔的市场前景。具有广阔的市场前景。具有广阔的市场前景。

Bifidobacterium longum 070103 with the effect of targeting glucokinase to significantly reduce blood glucose and blood lipids and its application

【技术实现步骤摘要】
具有靶向葡萄糖激酶显著降血糖和降血脂功效的长双歧杆菌070103及其应用


[0001]本专利技术涉及发酵乳制品领域，具体涉及具有靶向葡萄糖激酶显著降血糖和降血脂功效的长双歧杆菌070103及其应用。

技术介绍

[0002]代谢综合征是由一种聚集代谢危险因素的临床病症，具体表现为中心性肥胖、血脂异常、葡萄糖代谢受损、血压升高和低水平的高密度脂蛋白。同时存在三种及三种以上代谢异常指标及被认定为患有代谢综合征。但随着生活方式的改变，饮食的多元化，高脂高糖饮食引起的糖脂代谢异常及其它的代谢类疾病发生的越来越普遍。
[0003]而肠道菌群与宿主饮食、代谢参数密切相关，糖脂的过度摄入对多种组织和器官功能障碍都相关，增加了肠道的通透性，引起肠道菌群失调。益生菌是调节肠道菌群和改善宿主，免疫状态的重要工具，因此针对预防和治疗代谢综合征的具体方法可能也包括益生菌。益生菌被定义为“活的微生物，当摄入足够量，能给宿主带来健康益处”。在这之中，乳酸杆菌和双歧杆菌是被引用最多的属，它们对体重、脂肪、肝脂肪变性和葡萄糖代谢有益。
[0004]葡萄糖激酶是糖酵解的第一步限速酶，能在肝脏糖代谢和胰岛素分泌之间进行双向调节血糖水平。有研究表明，葡萄糖激酶能介导胰岛素受体底物2（insulin receptor substrate 2，IRS2）的表达改善内质网应激引起的胰岛β细胞凋亡。它作为一个新的药物靶点，少有与益生菌相关的报道。最新的研究表明代谢综合征的发病率可通过改变生活方式尤其是饮食习惯得到预防。发酵乳作为益生菌的一个合适的载体，含有菌株和发酵过程中产生的生物活性化合物。而且可能含有具有潜在抗肥胖、抗代谢综合征的作用长双歧杆菌是双歧杆菌科、长双歧杆菌属，一般被认为安全的菌种，目前已经被国家相关部门纳入可食用菌种目录。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种能显著降血糖和降血脂功效的长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）070103，其于2022年6月9日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编510070，保藏编号为GDMCC NO：62526。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供长双歧杆菌070103在制备发酵乳制品中的应用。
[0007]本专利技术的一些实施方式中，所述发酵乳制品为用于改善糖脂代谢紊乱的保健食品，优选的所述发酵乳制品为用于改善高脂高糖饮食相关的糖脂代谢紊乱的保健食品。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供一种长双歧杆菌发酵乳制品，由上述的长双歧杆菌070103发酵制备获得。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供一种长双歧杆菌发酵乳制品的制备方法，是将长双歧杆菌070103接种到脱脂乳进行发酵处理。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述的脱脂乳是将脱脂乳粉按12%（v/v）与水混匀，然后105℃杀菌处理15min。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，是将长双歧杆菌070103菌液按体积比5%的比例接种到脱脂乳中，37℃发酵48h，制的发酵乳制品。
[0012]上述发酵处理为厌氧发酵处理。
[0013]本专利技术的第五个目的是提供一种特异识别长双歧杆菌070103的靶标核苷酸序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0014]本专利技术的第六个目的是提供针对上述靶标核苷酸序列设计的特异性扩增引物，包括正向引物5
’‑
AGCCCTGAAAGAAACAACCAC
‑3’
和反向引物5
’‑
CCTGGTTCGACCAGATGAATA
‑3’
。
[0015]本专利技术的有益效果：本专利技术所述的长双歧杆菌070103分离于健康人的肠道菌群，用于发酵乳的时候，在体外能对人源肝脏葡萄糖激酶具有激活作用，此外，所述菌株来源于健康人类粪便，对人体无毒副作用，同时全基因组测序分析发现，该菌株无毒力基因，相对于用于治疗糖脂代谢紊乱类的如肥胖、2型糖尿病代谢疾病的传统药物具有一定的优势。该菌株可用于制作益生菌发酵乳，具有广阔的市场前景。
[0016]专利技术所述的长双歧杆菌070103发酵乳能显著降低高脂高糖饮食诱导的糖脂代谢紊乱小鼠的血糖，血脂，与模型组相比，070103发酵乳干预组小鼠的空腹血糖与胰岛素含量显著降低，血清中低密度脂蛋白胆固醇（Low
‑
Density Lipoprotein Cholesterol，LDL
‑
C）、总胆固醇（Total Cholesterol，TC）、谷草转氨酶（Aspartate Aminotransferase，AST）、谷丙转氨酶（Alanine Aminotransferase，ALT）等含量显著降低，结肠组织中紧密连接蛋白ZO
‑
1和Claudin
‑
1的含量显著高于模型组。病理切片的观察结果也表明，长双歧杆菌070103发酵乳干预组小鼠的糖脂代谢紊乱和结肠组织得到显著改善。
[0017]Bifidobacterium longum 070103于2022年6月9日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（GDMCC），保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编510070，保藏编号为GDMCC NO：62526。
附图说明
[0018]图1：葡萄糖激酶（G6PDH）和6
‑
磷酸葡萄糖脱氢酶（GK）SDS
‑
PAGE电泳图；图2：各组小鼠体重的变化；图3：各组小鼠空腹血糖（FBG）、口服葡萄糖耐量（OGTT）、血清中胰岛素（INS）、胰岛素抵抗指数（HOMA
‑
IR）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL
‑
C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL
‑
C）、总甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）的变化；图4：各组小鼠的肝脏、附睾脂肪、棕色脂肪、结肠的病理切片和肝功能指标（ALT和AST）、瘦素（LEP）与结肠紧密连接蛋白ZO
‑
1和Claudin
‑
1的含量；图5：长双歧杆菌070103特异分子靶标验证图；图6：为使用本专利技术长双歧杆菌070103实时荧光定量PCR标准曲线；图7：长双歧杆菌070103实时荧光定量PCR溶解曲线。
具体实施方式
[0019]为更清楚地表述本专利技术的技术方案，下面结合具体实施例进一步说明，但不能用于限制本专利技术，此仅是本专利技术的部分实施例。
[0020]实施例1 乳酸菌的培养、鉴定、保藏及乳酸菌发酵乳的制备从健康人的食物和粪便中共分离出87株乳酸菌。人类粪便菌株来自课题组前期的分离。在MRS肉汤中接种3% (v/v)的乳酸菌和在添加1
‰
的无菌的0.1%浓度的维生素K1和5 mg/mL氯化血红素的TPY肉汤中接种3% (v/v)的双歧杆菌，37℃恒温厌氧培养至菌的对数期（乳酸菌约16 h，双歧杆菌约40 h）本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）070103，保藏编号为GDMCC NO：62526。2.权利要求1所述的长双歧杆菌070103在制备发酵乳制品中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述发酵乳制品为用于改善糖脂代谢紊乱的保健食品或用于改善高脂高糖饮食相关的糖脂代谢紊乱的保健食品。4.一种长双歧杆菌发酵乳制品，其特征在于，由权利要求1所述的长双歧杆菌070103发酵制备获得。5.一种长双歧杆菌发酵乳制品的制备方法，其特征在于，是将权利要求1所述的长双歧杆菌070103接种到脱脂乳进行发酵处理。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的脱脂乳是将脱脂乳粉与水混匀，灭菌制得。7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴清平，蒋同，代京莎，谢新强，李滢，丁郁，王涓，陈谋通，薛亮，叶青华，吴诗，古其会，张菊梅，庞锐，张友雄，
申请(专利权)人：广东环凯生物科技有限公司广东科环生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：