针对CEACAM5和CD3的双特异性抗体制造技术

本发明专利技术涉及与人癌胚抗原CEACAM5(CEA)和人CD3ε结合的双特异性抗体。此外，本发明专利技术涉及编码此类双特异性抗体的多核苷酸和包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明专利技术还涉及选择和产生此类抗体的方法以及使用此类抗体治疗疾病的方法。疾病的方法。疾病的方法。

Bispecific antibodies against ceacam5 and CD3

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】Clinical Oncology 35,no.15_suppl(2017年5月20日)2549
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2549)。暴露的损失使实际治疗难以控制，并显著降低成功的可能性。为了尽量减少ADA的形成，赛必妥单抗和赛必妥单抗和阿特珠单抗的组合分别在用抗CD20抗体奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)预处理后进行组合临床测试(参见ClinicalTrials.gov试验NCT03866239)。给予预处理以消耗转移性结直肠癌患者的B细胞。B细胞的消耗导致患者免疫球蛋白的下降，从而导致潜在的ADA的下降，但同时其导致免疫系统的削弱。
[0006]MEDI
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565(AMG211)(另一种双特异性CEAxCD3抗体，一种单链抗体)已进入临床开发，结果已发表(参见例如M.Pishvaian等人Clin Colorectal Cancer.2016DEC；15(4)345
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351)。据报道，NCT01284231(ClinicalTrials.gov)研究已完成，过去几年没有开始新的试验。这种单链双特异性抗体(通过aa接头连接的两个scFv)具有在2.2和6.5小时之间的极低的消除半衰期(Pishvaian等人；Clin.Colorectal Cancer,2016DEC；15(4)345
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351)(在此通过引用并入)。
[0007]本专利技术提供了一种免疫原性较低且具有高功效的CEAxCD3双特异性抗体。这种抗体包含共同重链和在一个实施方案中在CEA结合部分中的κ轻链和在CD3结合部分中的λ轻链。
[0008]Fischer等人,Nature Communications 6(2015):6113.https://doi.org/10.1038/ncomms7113和Magistrelli G.等人,MABS 9(2017)231
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239中提到了使用共同重链用于获得双特异性抗体的概念。κλ双特异性抗体描述于例如WO2014087248(通过引用整体并入本文)。它们的结构与天然IgG的结构几乎没有区别，其结果是没有或极少形成ADA，并因此暴露损失低或极少。专利技术的共同重链可变区VH的序列和序列huCD3 VL 1A4描述于WO2019175658(US2019/0284297)(通过引用整体并入本文)。
[0009]如上所述，WO2017055389描述了具有2+1形式但结合与赛必妥单抗不同的结构域的双特异性CEAxCD3抗体。其中一种抗体(RO7172508或RG 6123)已在局部晚期和/或转移性CEA阳性实体瘤患者的临床试验中进行了测试(ClinicalTrials.gov；搜索RO7172508)，还与奥滨尤妥珠单抗预处理和联合使用阿特珠单抗进行了测试。根据ClinicalTrials.gov中的对一些队列的临床试验的描述，在待治疗的患者中需要低于某个阈值的血清CEA(脱落的可溶性CEACAM5，sCEA)水平以使他们有资格接受治疗，这提示更高水平的脱落的可溶性CEACAM5可降低这种CEAxCD3双特异性抗体的功效。本专利技术的抗体显示脱落的可溶性CEA对其肿瘤细胞杀伤效力的最小影响。
[0010]脱落的可溶性CEACAM5是一种已建立的肿瘤标志物。癌症患者血浆中的sCEA水平可超过1000ng/ml，而健康个体的血浆浓度低于10ng/ml(例如Sandler B.等人Anticancer Res 1999,19(5B),4229
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33)。因此，脱落的可溶性CEACAM5可以与肿瘤细胞上存在的膜结合CEA竞争结合治疗性抗CEA抗体和抗CEA双特异性抗体，可能导致抗CEA抗体或CEAxCD3抗体的功效降低。TCB2017和TCB2014(见上文)已由专利技术人在体外在可溶性CEA的存在下在针对T细胞介导的CEA阳性肿瘤细胞裂解的测试中进行了测试。发现向测试中添加sCEA使裂解曲线移动，因此TCB2014和TCB2017的EC50值移动到更高的浓度，这表明TCB2014和TCB2017都与sCEA显著结合。
[0011]人类CEA家族包含29个基因，其中18个被表达：7个属于CEA亚组，11个属于妊娠特异性糖蛋白亚组。几个CEA亚组成员被认为具有细胞粘附特性。CEACAM5不仅在结直肠癌细
胞中表达，在胰腺癌、胃癌、肺癌和其他癌症类型中也有表达。CEACAM5被认为在先天免疫中起作用(S.,Semin.Cancer Biol.9(2):67
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81(1999))。癌胚抗原5(CEA、CEACAM5或CD66e；UniProtKB
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P06731)是癌胚抗原相关细胞粘附分子(CEACAM家族)的成员并且是肿瘤相关抗原(Gold和Freedman,J Exp.Med.,121:439
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462,1965；Berinstein N.L.,J Clin Oncol.,20:2197
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2207,2002)。出于研究目的(作为诊断工具)和出于治疗目的，已经产生了针对CEACAM5的多种单克隆抗体(参见例如WO2012117002)。癌胚抗原家族(CEACAM)的成员广泛表达，并且取决于组织，能够调节多种功能，包括肿瘤促进、肿瘤抑制、血管生成和中性粒细胞活化。该家族的四个成员CEACAM1、CEACAM3、CEACAM6和CEACAM8在人类中性粒细胞上表达和富集(http：//www.proteinatlas.org)。鉴于CEAxCD3双特异性抗体的作用机制，与其他CEACAM的交叉反应可能导致重要的循环健康细胞群的消耗。例如，与由中性粒细胞或造血干细胞表达的CEACAM8的交叉反应可能导致此类细胞群的消耗。本专利技术提供与CEACAM家族成员CEACAM1、CEACAM3、CEACAM4、CEACAM6、CEACAM7、CEACAM8、CEACAM16、CEACAM18、CEACAM19、CEACAM20和CEACAM21中的一个或多个成员具有低交叉反应性的CEAxCD3双特异性抗体。
[0012]通过将NS1(P3/NS1/I
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Ag
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1)骨髓瘤细胞与来自用正常结直肠上皮免疫的小鼠的脾细胞融合来产生小鼠单克隆抗CEACAM5抗体PR1A3。Richman P.I.和Bodmer W.F.,Int.J.Cancer,39:317
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328,1987描述了小鼠单克隆抗体PR1A3。PR1 A3的表位作图显示抗体靶向CEA分子的B3结构域和GPI锚(Durbin H.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,91:4313
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4317,1994)。PR1 A3结合的表位是构象表位，而不是线性表位(Stewart等人,Cancer Immunol.Immunother.,47(1999)299
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06)。人源化PR1A3(hPR1A3)抗体描述于例如Conaghhan P本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双特异性抗体，其包含特异性结合人CEACAM5的第一结合部分和特异性结合人CD3ε的第二结合部分，其中：a)第一结合部分包含重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO：2的CDRH1、SEQ ID NO：3的CDRH2和SEQ ID NO：4的CDRH3，b)第一结合部分包含轻链可变区(VL)，其包含选自以下的CDRL组：b1)SEQ ID NO：32的CDRL1、SEQ ID NO：33的CDRL2和SEQ ID NO：34的CDRL3，b2)SEQ ID NO：81的CDRL1、SEQ ID NO：82的CDRL2和SEQ ID NO：83的CDRL3，b3)SEQ ID NO：84的CDRL1、SEQ ID NO：85的CDRL2和SEQ ID NO：86的CDRL3，b4)SEQ ID NO：87的CDRL1、SEQ ID NO：88的CDRL2和SEQ ID NO：89的CDRL3，b5)SEQ ID NO：90的CDRL1、SEQ ID NO：91的CDRL2和SEQ ID NO：92的CDRL3，b6)SEQ ID NO：93的CDRL1、SEQ ID NO：94的CDRL2和SEQ ID NO：95的CDRL3，b7)SEQ ID NO：96的CDRL1、SEQ ID NO：97的CDRL2和SEQ ID NO：98的CDRL3，b8)SEQ ID NO：99的CDRL1、SEQ ID NO：100的CDRL2和SEQ ID NO：101的CDRL3，b9)SEQ ID NO：102的CDRL1、SEQ ID NO：103的CDRL2和SEQ ID NO：104的CDRL3，b10)SEQ ID NO：105的CDRL1、SEQ ID NO：106的CDRL2和SEQ ID NO：107的CDRL3，b11)SEQ ID NO：108的CDRL1、SEQ ID NO：109的CDRL2和SEQ ID NO：110的CDRL3，和b12)SEQ ID NO：111的CDRL1、SEQ ID NO：112的CDRL2和SEQ ID NO：113的CDRL3，c)第二结合部分包含VH，其包含SEQ ID NO：2的CDRH1、SEQ ID NO：3的CDRH2和SEQ ID NO：4的CDRH3，和d)第二结合部分包含VL，其包含SEQ ID NO：18的CDRL1、SEQ ID NO：19的CDRL2和SEQ ID NO：20的CDRL3。2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一结合部分包含轻链可变区，所述轻链可变区包含选自以下的CDRL组：a1)SEQ ID NO：90的CDRL1、SEQ ID NO：91的CDRL2和SEQ ID NO：92的CDRL3，a2)SEQ ID NO：96的CDRL1、SEQ ID NO：97的CDRL2和SEQ ID NO：98的CDRL3，a3)SEQ ID NO：99的CDRL1、SEQ ID NO：100的CDRL2和SEQ ID NO：101的CDRL3，a4)SEQ ID NO：102的CDRL1、SEQ ID NO：103的CDRL2和SEQ ID NO：104的CDRL3，a5)SEQ ID NO：105的CDRL1、SEQ ID NO：106的CDRL2和SEQ ID NO：107的CDRL3，和a6)SEQ ID NO：111的CDRL1、SEQ ID NO：112的CDRL2和SEQ ID NO：113的CDRL3。3.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中所述第一结合部分包含轻链可变区，所述轻链可变区包含选自以下的CDRL组：a1)SEQ ID NO：90的CDRL1、SEQ ID NO：91的CDRL2和SEQ ID NO：92的CDRL3，a2)SEQ ID NO：105的CDRL1、SEQ ID NO：106的CDRL2和SEQ ID NO：107的CDRL3，和a3)SEQ ID NO：111的CDRL1、SEQ ID NO：112的CDRL2和SEQ ID NO：113的CDRL3。4.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其包含a)在第一结合部分中的SEQ ID NO：1的重链可变区VH，b)在第一结合部分中的轻链可变区VL，其选自：b1)SEQ ID NO：31的轻链可变区VL，b2)SEQ ID NO：114的轻链可变区VL，
b3)SEQ ID NO：115的轻链可变区VL，b4)SEQ ID NO：116的轻链可变区VL，b5)SEQ ID NO：117的轻链可变区VL，b6)SEQ ID NO：118的轻链可变区VL，b7)SEQ ID NO：119的轻链可变区VL，b8)SEQ ID NO：120的轻链可变区VL，b9)SEQ ID NO：121的轻链可变区VL，b10)SEQ ID NO：122的轻链可变区VL，b11)SEQ ID NO：123的轻链可变区VL，和b12)SEQ ID NO：124的轻链可变区VL，和c)在第二结合部分中的SEQ ID NO：1的重链可变区VH和SEQ ID NO：17的轻链可变区VL。5.根据权利要求2所述的双特异性抗体，其包含a)在第一结合部分中的SEQ ID NO：1的重链可变区VH，b)在第一结合部分中的轻链可变区VL，其选自：b1)SEQ ID NO：117的轻链可变区VL，b2)SEQ ID NO：119的轻链可变区VL，b3)SEQ ID NO：120的轻链可变区VL，b4)SEQ ID NO：121的轻链可变区VL，b5)SEQ ID NO：122的轻链可变区VL，和b6)SEQ ID NO：124的轻链可变区VL，和c)在第二结合部分中的SEQ ID NO：1的重链可变区VH和SEQ ID NO：17的轻链可变区VL。6.根据权利要求3所述的双特异性抗体，其包含a)在第一结合部分中的SEQ ID NO：1的重链可变区VH，b)在第一结合部分中的轻链可变区VL，其选自：b1)SEQ ID NO：117的轻链可变区VL，b1)SEQ ID NO：122的轻链可变区VL，和b4)SEQ ID NO：124的轻链可变区VL，和c)在第二结合部分中的SEQ ID NO：1的重链可变区VH和SEQ ID NO：17的轻链可变区VL。7.一种双特异性抗体，其包含特异性结合人CEACAM5的第一结合部分和特异性结合人CD3ε的第二结合部分，所述抗体包含a)在第一结合部分中的SEQ ID NO：1的重链可变区VH，b)在第一结合部分中的轻链，其选自：b1)SEQ ID NO：40的轻链，b2)SEQ ID NO：125的轻链，b3)SEQ ID NO：126的轻链，b4)SEQ ID NO：127的轻链，
b5)SEQ ID NO：128的轻链，b6)SEQ ID NO：129的轻链，b7)SEQ ID NO：130的轻链，b8)SEQ ID NO：131的轻链b9)SEQ ID NO：132的轻链，b10)SEQ ID NO：133的轻链，b11)SEQ ID NO：134的轻链，和b12)SEQ ID NO：135的轻链，和c)在第二结合部分中的SEQ ID NO：1的重链可变区VH和SEQ ID NO：28的轻链。8.根据权利要求1至7中任一项所述的双特异性抗体，其特征在于包含共同重链，其选自：a)SEQ ID NO：43的重链，b)SEQ ID NO：44的重链，和c)SEQ ID NO：45的重链。9.一种双特异性抗体，其包含特异性结合人CEACAM5的第一结合部分和特异性结合人CD3ε的第二结合部分，所述抗体包含SEQ ID NO：45的共同重链和在第二结合部分中的SEQ ID NO：28的轻链和在第一结合部分中的SEQ ID NO：128的轻链。10.一种双特异性抗体，其包含特异性结合人CEACAM5的第一结合部分和特异性结合人CD3ε的第二结合部分，所述抗体包含SEQ ID NO：45的共同重链和在第二结合部分中的SEQ ID NO：28的轻链和在第一结合部分中的SEQ ID NO：133的轻链。11.一种双特异性抗体，其包含特异性结合人CEACAM5的第一结合部分和特异性结合人CD3ε的第二结合部分，所述抗体包含SEQ ID NO：45的共同重链和在第二结合部分中的SEQ ID NO：28的轻链和在第一结合部分中的SEQ ID NO：135的轻链。12.一种用于治疗癌症的双特异性抗体，其特征在于包含特异性结合人CEACAM5的第一结合部分和特异性结合人CD3ε的第二结合部分，并且其特征在于a)与MKN
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45细胞结合，EC50值为0.5nM至50nM，b)在含有人PBMC的测定中以浓度依赖性方式杀伤MKN
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45、HPAF
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II或LS174T细胞，EC50值为0.01至10nM，c)与表达CEACAM5的PEAK细胞结合，但不与表达CEACAM8的PEAK细胞交叉反应，d)在使用LS174T肿...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：拉姆卡普生物阿尔法股份公司，
类型：发明
国别省市：