一种利用解脂耶氏酵母发酵合成麦角硫因的方法技术

本发明专利技术为一种利用解脂耶氏酵母发酵合成麦角硫因的方法，应用基因克隆表达技术，改造解脂耶氏酵母，在生物反应器中发酵合成麦角硫因。采用该方法制备麦角硫因成本低，制得率高，质量稳定，可以用于大规模生产制备；且能避免大量提取废渣产生和有毒试剂的使用，有益于环境保护。境保护。境保护。

A method of fermentation synthesis of ergotriene by Yersinia lipolytica

【技术实现步骤摘要】
一种利用解脂耶氏酵母发酵合成麦角硫因的方法


[0001]本专利技术属于化合物生物合成
，具体涉及一种利用解脂耶氏酵母发酵合成麦角硫因的方法。

技术介绍

[0002]麦角硫因和它的前体组氨酸三甲基内盐(hercynine)在真菌、黏菌和放线菌中可以生物合成。然而,酵母作为一种真菌和所有类酵母物子囊菌(Ascomycetes)、原酵母(少数除外)一样都不能合成麦角硫因和它的前体。
[0003]解脂耶氏酵母是一种产油酵母，能够积累大量的储存脂质。在一些野生型菌株中，脂质含量可以达到干重的20
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40％，而在工程菌株中，脂质含量可以超过90％。脂质生产需要胞质乙酰辅酶A、丙二酰辅酶A和NADPH。由于这些前体也需要类异戊二烯，聚酮化合物，以及其它代谢物，解脂耶氏酵母也是用于生产这样的代谢物的一个发酵菌种，我们将可以产生麦角硫因的粗糙脉孢菌的生物合成酶EGT1基因和来自麦角菌的EGT2基因表达在解脂耶氏酵母上，利用解脂耶氏酵母发酵、合成获得麦角硫因。解脂耶氏酵母在糖过量的情况下仍可控，因此更容易大规模发酵合成。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用解脂耶氏酵母发酵合成麦角硫因的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、敲除粗糙脉孢菌的生物合成酶EGT1基因和麦角菌的EGT2基因；S2、构建同时过表达EGT1基因和EGT2基因的高效解脂耶氏酵母菌株；S3、通过菌落PCR检查S2中菌株的正确遗传修饰；S4、配置预培养基；S5、将通过正确遗传修饰的菌株在预培养基上培养；S6、将培养物离心，倒出上清液，将沉淀物重新悬浮在无菌超纯水中；S7、配置矿物培养基；S8、将预培养的细胞接种于液体培养基质中；S9、配置补料培养液；S10、分批补料培养，每隔一段时间添加一次上述培养液；S11、于S10中培养的物质中提取麦角硫因。2.根据权利要求1所述一种利用解脂耶氏酵母发酵合成麦角硫因的方法，其特征在于，所述S4中配置预培养基，10～25g/L葡萄糖+4～10g/L(NH4)2SO4+10～20g/LKH2PO4+0.1～0.8g/LMgSO4，使用NaOH调节至pH5～6之间。3.根据权利要求1所述一种利用解脂耶氏酵母发酵合成麦角硫因的方法，其特征在于，所述S5中将通过正确遗传修饰的菌落在预培养基上培养，在30℃和250rpm下孵育48h。4.根据权利要求1所述一种利用解脂耶氏酵母发酵合成麦角硫因的方法，其特征在于，所述S6中培养物以3000rpm离心5分钟后，倒出上清液，将沉淀物重新悬浮在50mL无菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁瑞，耿菲菲，刘胜茂，陈旭红，杨金凤，
申请(专利权)人：云南西草资源开发有限公司，
类型：发明
国别省市：