一种用于新冠抗原检测的单抗阻断剂制造技术

本发明专利技术了一种针对新冠病毒S蛋白RBD蛋白的特异性单抗阻断剂。所得单抗阻断剂具有高亲和力，可以有效竞争抑制新冠病毒S蛋白RBD与ACE2的结合。假病毒中和实验显示了抗体对新冠假病毒及其突变株(Detla)假病毒均具有良好的中和活性。所述单抗阻断剂的检测下限为3.9ng/mL，线性范围为1000ng/mL～7.8ng/mL，且与新冠病毒N蛋白、流感病毒、肺炎支原体抗原及BSA、Vero细胞等均不发生交叉反应，可以极大降低试剂的假阳性，从而提高检测试剂的准确度。从而提高检测试剂的准确度。从而提高检测试剂的准确度。

【技术实现步骤摘要】
一种用于新冠抗原检测的单抗阻断剂


[0001]本专利技术涉及新冠病毒检测
，更具体地，涉及一种新冠病毒检测用单抗阻断剂。

技术介绍

[0002]为了控制疫情的进一步发展，急需快速有效针对新冠病毒的检测手段。目前针对新冠病毒感染的诊断方法主要以对呼吸道标本进行RT
‑
PCR，即核酸检测为金标准，另外还有基于抗体的血清学检测、流行病学诊断和假病毒中和试验检测等。
[0003]然而，核酸检测需要相应设备，并配有专业的操作人员，且样本从采集到送检耗时长，这极大地限制了检测效率。流行病学诊断检测通量高，但需要核酸检测进行辅助检测，且检测通量低，设备要求高。假病毒中和试验检测成本高昂，且操作难度大，不适于在大流行疾病检测中推广应用。
[0004]因此，开发一种特异性强、检测灵敏的新的检测方法对该疾病预防和治疗具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]针对现有技术所存在的技术问题，本专利技术提供了一种用于新冠抗原检测的单抗阻断剂。
[0006]具体而言，本专利技术首先是分离纯化了新冠病毒检测用单抗阻断剂，所述单抗阻断剂的重链可变区序列如SEQIDNO.1所示，轻链可变区序列如SEQIDNO.2所示；
[0007]优选地，重链可变区包括CDR1、CDR2和CDR3，其序列分别对应于SEQIDNO.3
‑
5所示，轻链可变区包括CDR4、CDR5和CDR6，其序列分别对应于SEQIDNO.6
‑
8；
[0008]优选地，所述重链可变区的编码序列如SEQIDNO.9所示，轻链可变区的编码序列如SEQIDNO.10所示；
[0009]进一步地，本专利技术还提供了上述单抗阻断剂在制备检测新冠病毒试剂盒中的应用；优选地，所述单抗阻断剂是在间接ELISA方法中使用。
[0010]进一步地，本专利技术还提供了一种新冠病毒检测试剂盒，其特征在于，其所述试剂盒包括上述的单抗阻断剂；优选地，所述单抗阻断剂是在间接ELISA方法中使用。
[0011]本专利技术的优点如下：本专利技术提供的新冠病毒单抗阻断剂是针对S蛋白RBD蛋白的特异性抗体，所得单抗阻断剂具有高亲和力，可以有效竞争抑制新冠病毒S蛋白RBD与ACE2的结合，同时，假病毒中和实验显示了抗体对新冠假病毒及其突变株(Detla)假病毒均具有良好的中和活性。所述单抗阻断剂的检测下限为3.9ng/mL，线性范围为1000ng/mL～7.8ng/mL，且与新冠病毒N蛋白、流感病毒、肺炎支原体抗原及BSA、Vero细胞等均不发生交叉反应，可以极大降低试剂的假阳性，从而提高检测试剂的准确度。
附图说明
[0012]图1为单抗阻断剂A3
‑
4对新冠假病毒检测灵敏度分析。
具体实施方式
[0013]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本专利技术。
[0014]以下各实施例，仅用于说明本专利技术，并不用来限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本专利技术的保护范围。
[0015]在本专利技术实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本专利技术实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0016]实施例1新冠病毒检测用单抗阻断剂的制备
[0017]采用购买自武汉华美生物工程有限公司的新冠病毒S蛋白RBD蛋白(货号CSB
‑
DP703I)作为抗原制备单抗阻断剂。具体的实验方法：使用50μg新冠病毒S蛋白RBD蛋白对6周龄雌性BALB/c小鼠进行免疫；首次免疫后第14天采用同样方法加强免疫一次；二免后第14天进行第三次免疫注射，方法与与剂量同二免。三免后第10天对小鼠断尾采血，用间接ELISA方法监测血清抗体效价。当抗体水平达到要求后，于三免第14天后，选择效价最高的免疫小鼠，用纯的抗原液尾静脉加强免疫，3天后无菌采取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合制备得到杂交瘤细胞。取杂交瘤细胞株的培养上清，采用IsoStrip Mouse Monoclonal Antibody Isotyping试剂盒(Roche公司)测定抗体重链、轻链类型。
[0018]实验结果：经过三轮免疫后，最终获得了新冠病毒S蛋白RBD抗体高表达单克隆细胞株，命名为A3
‑
4。将单克隆细胞扩增后进行腹水制备纯化抗体，用于后续亲和力测定、竞争结合实验以及假病毒(Detla)中和实验。经验证，所得单抗阻断剂具有高亲和力，可以有效竞争抑制新冠病毒S蛋白 RBD与ACE2的结合，同时，假病毒中和实验显示了抗体对新冠假病毒及其突变株(Detla)假病毒均具有良好的中和活性。且经试剂盒鉴定，所述单抗阻断剂重链可变区序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区序列如SEQ IDNO.2所示。且，所述重链可变区包括CDR1、CDR2、CDR3，所述CDR1
‑
3 的序列如SEQ ID NO.3
‑
5所示，所述轻链可变区包括CDR4、CDR5、CDR6，所述CDR4
‑
6的序列如SEQ ID NO.6
‑
8所示。
[0019]实施例2单抗阻断剂A3
‑
4与新冠病毒S蛋白RBD及其突变体(T478K,P681R和L452R)的亲和动力学分析
[0020]采用GE Biacore T200检测单抗阻断剂A3
‑
4的亲和动力学常数，具体实验操作如仪器说明书所示。实验结果：根据检测结果，抗体亲和力数据如下表1：
[0021]表1.抗体亲和动力学分析
[0022][0023]实验结论：本专利技术获得的单抗阻断剂A3
‑
4与新冠病毒S蛋白RBD及其突变体(T478K,P681R,L452R)均具有高亲和力，尤其是其与 RBD(T478K,P681R,L452R)突变的平衡解离常数仅为4.614
×
10
‑
11
。
[0024]实施例3单抗阻断剂A3
‑
4对新冠病毒S蛋白RBD及其突变体 (T478K,P681R和L452R)与ACE2结合的竞争抑制作用
[0025]利用间接ELISA方法检测单抗阻断剂A3
‑
4对新冠病毒S蛋白RBD及其突变体(L452R，T478K)与ACE2结合的竞争抑制。检测结果如下表所示：
[0026]表2.抗体的竞争抑制作用
[0027][0028]实验结论：本专利技术获得的单抗阻断剂A3
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4对新冠病毒S蛋白RBD及其突变体(T478K,P681R,L452R)与ACE2结合具有明显的竞争抑制作用。
[0029]实施例4单抗阻断剂A3
‑
4对新冠假病毒检测效果
[0030]4.1灵本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种针对新冠病毒S蛋白RBD蛋白的特异性单抗阻断剂，其特征在于，所述单抗阻断剂的重链可变区包括CDR1、CDR2和CDR3，其序列分别对应于SEQ ID NO.3
‑
5所示，轻链可变区包括CDR4、CDR5和CDR6，其序列分别对应于SEQ ID NO.6
‑
8。2.如权利要求1所述的单抗阻断剂，其特征在于，所述单抗阻断剂的重链可变区序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO.2所示。3.如权利要求1或2所述的单抗阻断...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄建平，夏大卫，
申请(专利权)人：厦门博昂生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：