一种PSGL-1人源化非人类动物模型的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种PSGL

Construction method and application of a PSGL-1 humanized non-human animal model

【技术实现步骤摘要】
一种PSGL
‑
1人源化非人类动物模型的构建方法及应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体而言，本专利技术涉及一种PSGL
‑
1人源化非人 类动物模型的构建方法及应用。

技术介绍

[0002]白细胞束缚和滚动是炎症反应发生的起始步骤，体内发炎血管的束缚和滚 动主要是由选择素(selectin)介导的。而P
‑
选择蛋白糖蛋白配体
‑
1(PSGL
‑
1) 是一种持续表达在所有白细胞(包括单核细胞，粒细胞，淋巴细胞某些CD34+ 干细胞)表面的，能够和选择素结合的二聚体型，粘蛋白型糖蛋白配体。选择 素有三个亚型，包括P
‑
selectin,E
‑
selectin和L
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selectin,其中P
‑
selectin表达于激 活的血小板和血管内皮细胞表面，E
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selectin表达于激活的内皮细胞表面，L
‑ꢀ
selectin表达于大部分白细胞表面。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR/Cas9技术构建的非人类动物模型，其特征在于，该模型为人源PSGL
‑
1敲入非人类动物模型；优选的，所述非人类动物模型敲入位点为Rosa26位点；优选的，PSGL
‑
1的序列如SEQ ID NO.1所示；优选的，所述动物是啮齿动物；优选的，所述啮齿动物是小鼠；优选的，所述小鼠是C57BL/6J小鼠。2.一种用于编辑PSGL
‑
1的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的序列如SEQ ID NO.3
‑
13所示；优选的，sgRNA序列如SEQ ID NO.3
‑
4，SEQ ID NO.10
‑
13所示；优选的，sgRNA序列如SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.10所示。3.一种表达人源PSGL
‑
1基因的打靶载体，其特征在于，所述打靶载体包括5
’
同源臂、人源PSGL
‑
1基因、终止密码子、WPRE元件、Poly A和3
’
同源臂；优选的，所述PSGL
‑
1的序列如SEQ ID NO.1所示。4.一种用于在Rosa26位点定点敲入人源PSGL
‑
1基因的CRISPR/Cas9系统，其特征在于，所述CRISPR/Cas9系统包含权利要求3所述的打靶载体。5.构建人源PSGL
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1非人类动物模型的方法，其特征在于，所述方法通过将PSGL
‑
1引入非人类动物的单细胞胚胎或胚胎干细胞的基因组来修饰非人类动物的基因组；优选的，所述方法包括以下步骤：(1)构建打靶载体；(2)制备sgRNA和Cas9 mRNA；(3)将所述打靶载体、Cas9和sgRNA混合，注射入受精卵细胞，并移植到假孕动物的输卵管中，获得敲入人源PSGL
‑
1的F0代阳性动物；(4)将F0代阳性动物与野生型动物杂交，获得F1代阳性杂合动物；(5)将F1代阳性杂合动物自交获得稳定遗传的人源PSGL
‑
1非人类动物...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨志伟，吴献贤，刘星，王智慧，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学实验动物研究所，
类型：发明
国别省市：