小鼠肥胖的实验方法及发酵柠檬汁对小鼠肥胖的抑制作用技术

本发明专利技术提供小鼠肥胖的实验方法，属于肥胖治疗领域，该小鼠肥胖的实验方法具体步骤为材料与仪器，柠檬汁发酵，动物实验，小鼠血清和肝脏指标测定，小鼠粪便中TC、TG和TP水平测定，小鼠肝脏和附睾脂肪组织病理学观察，小鼠肝组织中mRNA表达的测定，小鼠粪便中微生物mRNA表达的测定以及数据处理。本发明专利技术通过动物实验确定发酵柠檬汁对小鼠具有减脂作用；实验结果显示，植物乳杆菌KFY02发酵柠檬汁能够有效的调控肥胖小鼠的体质，器官指数、肝功能和血脂相关指标，还能够调控肥胖相关的基因表达，从而发挥发酵柠檬汁的减脂作用。发挥发酵柠檬汁的减脂作用。发挥发酵柠檬汁的减脂作用。

【技术实现步骤摘要】
小鼠肥胖的实验方法及发酵柠檬汁对小鼠肥胖的抑制作用


[0001]本专利技术属于肥胖治疗
，尤其涉及小鼠肥胖的实验方法及发酵柠檬汁对小鼠肥胖的抑制作用。

技术介绍

[0002]肥胖是机体内脂肪大量堆积造成的一种身体不良状态。肥胖可造成机体内的包括代谢系统和免疫系统等生理系统异常，增加患心血管疾病和癌症的风险，还可能直接导致包括心脏病、糖尿病、脂肪肝等多种疾病。肥胖还可能因为影响个体形象，有可造成肥胖者产生心理障碍。肥胖人群多采用运动和控制饮食进行减肥，其中健康食品和科学的饮食都是有效减肥的手段。
[0003]现有技术显示有益微生物可以通过在肠道定殖起到改善肠道微生态的作用，从而减少食物进入肠道后的吸收时间，促使多余的脂肪和能量排出体外，减少机体吸收过量的能量物质，起到提升代谢率，控制体重的作用。研究也显示果蔬发酵汁能够起到减肥作用。
[0004]但是，现有的肥胖抑制方法存在着国内的发酵饮品多采用进口发酵菌株，抑制作用不稳定以及抑制肥胖效果差的问题。
[0005]因此，专利技术小鼠肥胖的实验方法及发酵柠檬汁对小鼠肥胖的抑制作用显得非常必要。

技术实现思路

[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供小鼠肥胖的实验方法，本专利技术是通过以下技术方案得以实现的：
[0007]小鼠肥胖的实验方法具体包括以下步骤：
[0008]步骤一：材料与仪器，准备柠檬汁，小鼠，Biomate3S光分光光度仪，SepOnePlus定量PCR仪，正置光学显微镜，白洋BY
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160C 离心机，Bioprep
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24生物样品均质器；
[0009]步骤二：柠檬汁发酵，取新鲜的柠檬1kg，去皮后榨汁，过4 层纱布过滤得鲜柠檬汁；在过滤得到的柠檬汁中按10％(w/v)和 0.15％(w/v)加入葡萄糖和植物乳杆菌KFY02菌粉，置于36℃下发酵12h，发酵完成后置于4℃冰箱中待用；
[0010]步骤三：动物实验，50只6周龄雌雄各半的C57BL/6小鼠被置于恒温恒湿和每12h轮换照明的房间中饲养，同时小鼠被随机分为5 组，分别为正常组、模型组、植物乳杆菌KFY02灌胃组、未发酵柠檬汁灌胃组和发酵柠檬汁灌胃组，每组10只小鼠；对除正常组外其余各组小鼠采用高脂饲料喂养，正常组小鼠采用正常饲料喂养，所有小鼠不限制饮水和饮食，持续喂养8周；
[0011]步骤四：小鼠血清和肝脏指标测定，将取出的全血样本在4℃下以4000r/min的转速离心10min得到上层血清；同时精确称量0.1g 肝组织，再在肝组织中加入0.9mL生理盐水进行匀浆；
[0012]步骤五：小鼠粪便中TC、TG和TP水平测定，小鼠禁食前收集各组小鼠的粪便，精确
称量0.1g粪便，再在粪便中加入0.9mL生理盐水进行匀浆；将匀浆后组织在4000r/min的转速离心10min，收集上清液；采用TC、TG和TP检测试剂盒测定粪便匀浆上清液相关指标；
[0013]步骤六：小鼠肝脏和附睾脂肪组织病理学观察，解剖后收集小鼠的肝组织和附睾脂肪组织在10％的福尔马林中进行固定，在脱水 48h后，将组织样品分别进行石蜡包埋、切片、苏木精
‑
伊红(H&E) 染色后通过光学显微镜观察组织的病理学变化；
[0014]步骤七：小鼠肝组织中mRNA表达的测定，精确称量1g肝组织，在肝组织中加入9mL生理盐水进行匀浆，再加入1mL的RNAzol 提取小鼠肝组织中的RNA；使用超微分光光度法在260nm和280nm 处测定提取到RNA的吸光度值，计算RNA纯度和浓度；
[0015]步骤八：小鼠粪便中微生物mRNA表达的测定，精确称量1g 粪便，在粪便中加入9mL生理盐水进行匀浆；测定小鼠粪便中微生物mRNA表达，从而检测粪便中微生物的组成；
[0016]步骤九：数据处理，所有实验进行三次平行测定，测定得到的结果以平均值表示，并计算出标准偏差，实验结果表示为平均值
±
标准偏差；同时采用单因素方差分析计算各组数据之间是否具有显著差异(P<0.05)。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：由于本专利技术的小鼠肥胖的实验方法及发酵柠檬汁对小鼠肥胖的抑制作用广泛应用于肥胖治疗
本专利技术通过动物实验确定发酵柠檬汁对小鼠具有减脂作用；实验结果显示，植物乳杆菌KFY02发酵柠檬汁能够有效的调控肥胖小鼠的体质，器官指数、肝功能和血脂相关指标，还能够调控肥胖相关的基因表达，从而发挥发酵柠檬汁的减脂作用；同时，本专利技术进一步显示了植物乳杆菌KFY02发酵柠檬汁能够调节小鼠肠道，使肠道微生物组成更为健康，从而保持机体健康和发挥减肥作用；并且充分解决了现有的肥胖抑制方法存在着国内的发酵饮品多采用进口发酵菌株，抑制作用不稳定以及抑制肥胖效果差的问题。
附图说明
[0018]图1是小鼠肥胖的实验方法流程图。
[0019]图2是实验过程中小鼠的体重情况图。
[0020]图3是小鼠肝组织的H&E染色病理学切片观察图。
[0021]图4是小鼠附睾脂肪组织的H&E染色病理学切片观察图。
[0022]图5是小鼠肝组织C/EBPα、PPAR
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α、PPAR
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γ、CPT
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1、LPL 和CYP7A1的mRNA表达图。
[0023]图6是小鼠粪便中厚壁菌门、拟杆菌门、乳酸杆菌和双歧杆菌的mRNA表达图。
具体实施方式
[0024]以下结合附图对本专利技术做进一步描述：
[0025]图中：
[0026]如附图1所示
[0027]小鼠肥胖的实验方法具体包括以下步骤：
[0028]S101：材料与仪器，准备柠檬汁，小鼠，Biomate3S光分光光度仪，SepOnePlus定量PCR仪，正置光学显微镜，白洋BY
‑
160C离心机，Bioprep
‑
24生物样品均质器；
[0029]S102：柠檬汁发酵，取新鲜的柠檬1kg，去皮后榨汁，过4层纱布过滤得鲜柠檬汁；在过滤得到的柠檬汁中按10％(w/v)和0.15％ (w/v)加入葡萄糖和植物乳杆菌KFY02菌粉，置
于36℃下发酵12h，发酵完成后置于4℃冰箱中待用；
[0030]S103：动物实验，50只6周龄雌雄各半的C57BL/6小鼠被置于恒温恒湿和每12h轮换照明的房间中饲养，同时小鼠被随机分为5 组，分别为正常组、模型组、植物乳杆菌KFY02灌胃组、未发酵柠檬汁灌胃组和发酵柠檬汁灌胃组，每组10只小鼠；对除正常组外其余各组小鼠采用高脂饲料喂养，正常组小鼠采用正常饲料喂养，所有小鼠不限制饮水和饮食，持续喂养8周；
[0031]S104：小鼠血清和肝脏指标测定，将取出的全血样本在4℃下以4000r/min的转速离心10min得到上层血清；同时精确称量0.1g 肝组织，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.小鼠肥胖的实验方法，其特征在于，该种小鼠肥胖的实验方法具体包括以下步骤：步骤一：材料与仪器，准备柠檬汁，小鼠，Biomate3S光分光光度仪，SepOnePlus定量PCR仪，正置光学显微镜，白洋BY
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160C离心机，Bioprep
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24生物样品均质器；步骤二：柠檬汁发酵，取新鲜的柠檬1kg，去皮后榨汁，过4层纱布过滤得鲜柠檬汁；在过滤得到的柠檬汁中按10％(w/v)和0.15％(w/v)加入葡萄糖和植物乳杆菌KFY02菌粉，置于36℃下发酵12h，发酵完成后置于4℃冰箱中待用；步骤三：动物实验，50只6周龄雌雄各半的C57BL/6小鼠被置于恒温恒湿和每12h轮换照明的房间中饲养，同时小鼠被随机分为5组，分别为正常组、模型组、植物乳杆菌KFY02灌胃组、未发酵柠檬汁灌胃组和发酵柠檬汁灌胃组，每组10只小鼠；对除正常组外其余各组小鼠采用高脂饲料喂养，正常组小鼠采用正常饲料喂养，所有小鼠不限制饮水和饮食，持续喂养8周；步骤四：小鼠血清和肝脏指标测定，将取出的全血样本在4℃下以4000r/min的转速离心10min得到上层血清；同时精确称量0.1g肝组织，再在肝组织中加入0.9mL生理盐水进行匀浆；步骤五：小鼠粪便中TC、TG和TP水平测定，小鼠禁食前收集各组小鼠的粪便，精确称量0.1g粪便，再在粪便中加入0.9mL生理盐水进行匀浆；将匀浆后组织在4000r/min的转速离心10min，收集上清液；采用TC、TG和TP检测试剂盒测定粪便匀浆上清液相关指标；步骤六：小鼠肝脏和附睾脂肪组织病理学观察，解剖后收集小鼠的肝组织和附睾脂肪组织在10％的福尔马林中进行固定，在脱水48h后，将组织样品分别进行石蜡包埋、切片、苏木精
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伊红(H&E)染色后通过光学显微镜观察组织的病理学变化；步骤七：小鼠肝组织中mRNA表达的测定，精确称量1g肝组织，在肝组织中加入9mL生理盐水进行匀浆，再加入1mL的RNAzol提取小鼠肝组织中的RNA；使用超微分光光度法在260nm和280nm处测定提取到RNA的吸光度值，计算RNA纯度和浓度；步骤八：小鼠粪便中微生物mRNA表达的测定，精确称量1g粪便，在粪便中加入9mL生理盐水进行匀浆；测定小鼠粪便中微生物mRNA表达，从而检测粪便中微生物的组成；步骤九：数据处理，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵欣，
申请(专利权)人：重庆第二师范学院，
类型：发明
国别省市：