具有N-酰化活性的修饰酶制造技术

本发明专利技术提供对优异的含N

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有N
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酰化活性的修饰酶


[0001]本专利技术涉及具有N
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酰化活性的修饰酶等。

技术介绍

[0002]含N
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酰基
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氨基的化合物(例如，Nα
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酰基氨基酸)作为化妆品原材料(例如，表面活性剂)等而使用。含N
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酰基
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氨基的化合物的化学合成(例如，Schotten
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Baumann反应)存在合成反应的副产物所引起的环境负担的问题。因此，需要含N
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酰基
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氨基的化合物的酶合成。关于含N
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酰基
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氨基的化合物的酶合成的现有技术有数个已被报道。
[0003]在专利文献1中，报道了利用Bacillus subtilis的表面活性素生物合成酶而从糖开始的Nα
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酰基氨基酸发酵。但是，Nα
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酰基谷氨酸的生成量为116.8mg/L，极为微量，因此该发酵不适于工业规模的制造。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种具有N
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酰化活性的修饰酶，其包含下述(A)、(B)或(C)，且相对于包含序列编号1的氨基酸序列的酶，下述(i)～(iii)中的任一项特性得到了提高：(A)一种修饰氨基酸序列，其包含：在序列编号1的氨基酸序列中含有选自N101、R117、T122、I123、Y134、L137、V140、S161、V174、Q200、V231、V311、C335、T336、M337、A339、S340、Y344、R350、G379、K388、L390、S455、E483、Q533和C576中的1种以上的氨基酸残基的变异的氨基酸序列；(B)一种氨基酸序列，其是在所述修饰氨基酸序列中包含1个或数个追加的氨基酸残基的置换、缺失、插入或添加的氨基酸序列；(C)一种氨基酸序列，其是在所述修饰氨基酸序列中包含1个以上的氨基酸残基的追加变异，并且相对于所述修饰氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，(i)针对L
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谷氨酸和/或L
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天冬氨酸的N
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酰化活性；(ii)针对L
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谷氨酸的基质特异性；(iii)针对L
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谷氨酸和/或L
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天冬氨酸的N
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酰化活性，以及针对L
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谷氨酸的基质特异性。2.根据权利要求1所述的修饰酶，其中，所述变异包含选自N101S、R117P、T122S、I123T、Y134F、Y134V、L137I、V140I、S161P、V174A、Q200E、V231A、V311A、C335S、T336S、M337G、M337A、A339G、S340A、Y344A、Y344G、Y344I、Y344V、R350T、G379D、K388N、L390P、S455T、E483D、Q533R和C576A中的1种以上的氨基酸残基的变异。3.根据权利要求1或2所述的修饰酶，其中，所述N
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酰化活性为针对氨基酸的N
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酰化活性。4.根据权利要求3所述的修饰酶，其中，所述针对氨基酸的N
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酰化活性为针对L
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谷氨酸或L
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天冬氨酸的N
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酰化活性。5.一种多聚核苷酸，其编码权利要求1～4中任一项所述的修饰酶。6.一种表达载体，其包含权利要求5所述的多聚核苷酸。7.一种宿主细胞，其包含编码权利要求1～4中任一项所述的修饰酶的多聚核苷酸的表达单元。8.根据权利要求7所述的宿主细胞，其中，前期宿主细胞为进行了选自下述(1)～(4)中的至少1种以上的基因修饰的微生物：(1)脂肪酸供给能力强化；(2)氨基酸供给能力强化；(3)ATP供给能力强化；(4)N
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酰基氨基酸分解酶缺损或弱化。9.根据权利要求8所述的宿主细胞，其中，所述脂肪酸供给能力强化的基因修饰为下述(a)和(b)中的任一种或下述(a)和(b)这两种：(a)酰基CoA合成酶缺损或弱化；(b)酰基
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ACP硫酯酶增强。10.根据权利要求7～9中任一项所述的宿主细胞，其中，
所述宿主细胞为属于肠杆菌科的细菌。11.根据权利要求10所述的宿主细胞，其中，属于肠杆菌科的细菌为埃希氏菌属细菌或泛菌属细菌。12.根据权利要求11所述的宿主细胞，其中，埃希氏菌属细菌为大肠杆菌，泛菌属细菌为菠萝泛菌。13.一种含N
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酰基
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氨基的化合物或其盐的制造方法，其包含：在具有N
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酰化活性的修饰酶的存在下，使含氨基化合物和含羧基化合物反应，生成含N
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酰基
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氨基的化合物或其盐的步骤，其中，所述修饰酶包含下述(A)、(B)或(C)，具有N
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酰化活性，并且相对于包含序列编号1的氨基酸序列的酶，下述(i)～(iii)中的任一项特性得到了提高，(A)一种修饰氨基酸序列，其包含：在序列编号1的氨基酸序列中含有选自N101、R117、T122、I123、Y134、L137、V140、S161、V174、Q200、V231、V311、C335、T336、M337、A339、S340、Y344、R350、G379、K388、L390、S455、E483、Q533和C576中的1种以上的氨基酸残基的变异的氨基酸序列；(B)一种氨基酸序列，其是在所述修饰氨基酸序列中包含1个或数个追加的氨基酸残基的置换、缺失、插入或添加的氨基酸序列；(C)一种氨基酸序列，其是在所述修饰氨基酸序列中包含1个以上的氨基酸残基的追加变异，并且相对于所述修饰氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，(i)针对L
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谷氨酸和/或L
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天冬氨酸的N
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酰化活性；(ii)针对L
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谷氨酸的基质特异性；(iii)针对L
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谷氨酸和/或L
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天冬氨酸的N
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酰化活性，以及针对L
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谷氨酸的基质特异性。14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述修饰酶为纯化酶。15.根据权利要求13所述的方法，其中，所述在修饰酶存在下进行的反应是使用产生所述修饰酶的转化微生物或其处理物而进行的反应。16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述转化微生物为进行了选自下述(1)～(4)中的至少1种以上的基因修饰的微生物：(1)脂肪酸供给能力强化；(2)氨基酸供给能力强化；(3)ATP供给能力强化；(4)N
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酰基氨基酸分解酶缺损或弱化。17.根据权利要求15或16所述的方法，其中，含氨基化合物和含羧基化合物是通过在碳源的存在下培养所述转化微生物而在所述转化微生物内生成的。18.一种含氨基化合物和含羧基化合物通过酰胺键键合而得到的含N
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酰基
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氨基的化合物或其盐的制造方法，其包含：在碳源的存在下培养下述微生物的步骤，
所述微生物进行了选自下述(1)～(4)中的至少1种以上的基因修饰，并且包含编码下述酶的多聚核苷酸的表达单元，所述酶具有使羧基和氨基以依赖ATP的方式键合而形成酰胺键的能力，(1)脂肪酸供给能力强化；(2)氨基酸供给能力强化；(3)ATP供给能力强化；(4)N
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酰基氨基酸分解酶缺损或弱化。19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述酶为GH3蛋白质或PaaK蛋白质。20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述GH3蛋白质是选自(I)或(II)中的酶：(I)包含下述(A)、(B)或(C)，具有N
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酰化活性，并且相对于包含序列编号1的氨基酸序列的酶，下述(i)～(iii)中的任一项特性得到了提高的具有N
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酰化活性的修饰酶：(A)一种修饰氨基酸序列，...

【专利技术属性】
技术研发人员：永田秀美，田上宇乃，野崎博之，肥沼景子，D，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：