新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法，该新冠病毒S蛋白总抗体ELISA试剂盒包括阴阳性对照物质、5(6)

Covid-19 s protein total antibody ELISA kit and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及免疫学检测
，具体涉及一种新冠病毒S蛋白总抗体 ELISA检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]新冠病毒是目前人类已发现的第7种可以感染人的冠状病毒，国际病毒分类 委员会对其正式命名为：SARS
‑
CoV
‑
2。新冠病毒属于β属的新型冠状病毒，有 包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60～140nm。SARS
‑
CoV
‑
2能否 入侵人或动物，取决于人或动物等宿主细胞表面的血管紧张素转化酶2(ACE2 蛋白)与SARS
‑
CoV
‑
2病毒表面的S蛋白受体结合域(S
‑
RBD)结合的紧密程度。 当SARS
‑
CoV
‑
2入侵机体后，在该病毒的刺激下，机体中的B细胞会针对 SARS
‑
CoV
‑
2的S蛋白分泌不同类型的抗体，包括IgM、IgG以及IgA。针对S 蛋白产生的IgM、IgG以及IgA的总称即为总抗体。
[0003]人感染新冠病毒后常见的体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难 等。在较严重病例中，人感染新冠病毒可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰 竭，甚至死亡。如何快速有效的从大规模人群中筛选出新冠病毒感染者仍然任重 而道远。
[0004]目前，针对新冠病毒感染者的筛选方法包括：(1)分子生物学检测方法有 实时荧光PCR定量技术；(2)免疫学检测方法有免疫胶体金方法、免疫荧光层 析方法、ELISA方法、化学发光方法。
[0005]其中，实时荧光PCR定量方法虽然灵敏度高，但是漏检的情况比较突出， 同时取样比较繁琐，取样的手法也会造成检测结果的差异。目前市场上免疫学检 测方法的产品主要是针对新冠IgM、新冠IgG或者IgM/IgG的联合检测。并且， 免疫胶体金方法所得结果的判定主要是通过肉眼，因此免疫胶体金方法比免疫荧 光层析、ELISA方法及化学发光发光方法灵敏度低，漏检的可能性较大。免疫荧 光层析方法和化学发光方法对仪器的要求比较高，生产成本也比较高，并且方法 学本身的限制，也存在一定的漏检。
[0006]常规ELISA普通HRP直接标记方法可以针对新冠病毒S蛋白总抗体(IgM、 IgG以及IgA)的进行检测，但是存在灵敏度低、阳性检出率低的问题。

技术实现思路

[0007]基于此，有必要提供新灵敏度高、阳性检出率高的冠病毒S蛋白总抗体高敏 ELISA检测试剂盒及其制备方法。
[0008]本专利技术采用如下技术方案：
[0009]本专利技术提供一种5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记的新冠病毒S蛋白，由 5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺酯与新冠病毒S蛋白在弱碱性条件下反应制备而成。
[0010]本专利技术还提供一种HRP标记的抗5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺抗体，制备方 法为：采用高碘酸钠在弱碱性条件下氧化HRP制备含醛基的HRP中间产物，再 由含醛基的HRP中间产物与抗5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺抗体在弱碱性条件下 反应。
[0011]本专利技术提供一种新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒，包括包被物、 HRP标记的抗5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺抗体、5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺酯 标记的新冠病毒S蛋白、单组分TMB显色液以及终止液；所述包被物含新冠病 毒S蛋白；所述封闭液为S蛋白稳定剂。
[0012]优选地，所述的新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒还包括阴性对照 物质和/或阳性对照物质。所述阴性对照物质为健康志愿者的血清，所述阳性对照 物质为新冠RBD全人源单抗，选自IgM、IgG、IgA中的任意一种或几种。
[0013]优选地，所述的新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒还包括用于HRP 标记的抗5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺抗体、5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记的 新冠病毒S蛋白、阴性对照物质和/或阳性对照物质稀释的稀释液。
[0014]在其中一些实施例中，所述稀释液为含BSA、吐温20、Proclin 300的PBS 缓冲液。所述稀释液优选为含0.1％BSA、0.05％吐温20、0.1％Proclin 300的0.01MPBS缓冲液，pH为7.4。
[0015]在其中一些实施例中，包被物新冠病毒S蛋白包被浓度为0.5～4μg/mL。
[0016]优选地，所述的新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒还包括酶标板， 所述包被物被固定于所述酶标板上。
[0017]在其中一些实施例中，所述包被物被固定于所述酶标板上的步骤为：将包被 物新冠病毒S蛋白用包被液稀释，转入酶标板内，于2～8℃孵育16～24h；甩掉 酶标板孔中的液体，再加入封闭液，于37
±
0.5℃孵育；将封闭处理的酶标板置 于37
±
0.5℃干燥，真空塑封。
[0018]其中，酶标板优选采用深圳金灿华的高吸附ELISA用酶标板。包被液优选 为含0.1％Proclin 300的0.05M CBS缓冲液。
[0019]在其中一些实施例中，封闭液为含BSA、海藻糖、Proclin 300的PBS缓冲 液。优选为含0.1％BSA、8％海藻糖、0.1％Proclin 300的0.01M PBS缓冲液，pH 为7.4。
[0020]在其中一些实施例中，单组分TMB显色液采用麦克林货号为T820901、 500mL的底物。
[0021]在其中一些实施例中，所述终止液为硫酸溶液，优选为2M H2SO4。
[0022]优选地，当所述5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记的新冠病毒S蛋白的浓度 为1mg/mL时，其工作稀释比例为1/5000～1/20000。
[0023]优选地，当所述HRP标记的抗5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺抗体的浓度为 1mg/mL时，其工作稀释比例为1/10000～1/100000。
[0024]本专利技术还提供一种新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒的制备方法， 包括如下步骤：制备新冠病毒S蛋白包被的酶标板：将包被物新冠病毒S蛋白用 包被液稀释，转入酶标板内，于2～8℃孵育16～24h，甩掉板酶标板孔中的液体， 加入封闭液，于37
±
0.5℃孵育，封闭处理的酶标板置于37
±
0.5℃干燥，真空塑 封；将其余组分分别分装；封装，即得。
[0025]本专利技术的工作原理以及有益效果：
[0026]本专利技术的新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒是以ELISA双抗原夹心 法为基础，建立一种放大的HRP显色体系：在酶标板本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记的新冠病毒S蛋白，其特征在于，由5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺酯与新冠病毒S蛋白在弱碱性条件下反应制备而成。2.一种新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括包被物、HRP标记的抗5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺抗体、权利要求1所述的5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记的新冠病毒S蛋白、单组分TMB显色液以及终止液；所述包被物含新冠病毒S蛋白。3.根据权利要求2所述的新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒，其特征在于，还包括阴性对照物质和/或阳性对照物质，所述阴性对照物质为健康志愿者的血清，所述阳性对照物质为新冠RBD全人源单抗。4.根据权利要求2或3所述的新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒，其特征在于，还包括用于HRP标记的抗5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺抗体、5(6)
‑
羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记的新冠病毒S蛋白、阴性对照物质和/或阳性对照物质稀释的稀释液。5.根据权利要求4所述的新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒，其特征在于，还包括酶标板，所述包被物被固定于所述酶标板上。6.根据权利要求5所述的新冠病毒S蛋白总抗体ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述包被物被固定于所述酶标板上的步骤为：包被物新冠病毒S蛋白用包被液稀释...

【专利技术属性】
技术研发人员：冷毅斌，王长乐，杨飞，朱峰胜，
申请(专利权)人：伊莱瑞特武汉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：