基于VIGS的锦绣杜鹃叶片基因沉默体系及其构建方法技术

本发明专利技术属于植物基因工程技术领域，具体涉及基于VIGS的锦绣杜鹃叶片基因沉默体系及其构建方法。本发明专利技术具有时间短，速度快，高通量，不需要依赖于稳定的遗传转化的特点，具体包括以下步骤：构建含有特定目标基因片段的TRV2重组质粒，并和TRV1分别转化到农杆菌GV3101中，得到阳性农杆菌菌株并分别进行增殖后混合得到混合侵染液；将所述混合侵染液侵染锦绣杜鹃叶片中，实现对特定目标基因的沉默。本发明专利技术探究了可实现锦绣杜鹃叶片基因沉默的方法，利用本发明专利技术所述方法对锦绣杜鹃进行侵染，可使目标基因表达水平降低50％，为下一步锦绣杜鹃功能基因组学研究提供技术平台，为下一步验证锦绣杜鹃基因功能奠定基础。杜鹃基因功能奠定基础。杜鹃基因功能奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
基于VIGS的锦绣杜鹃叶片基因沉默体系及其构建方法


[0001]本专利技术属于植物基因工程
，具体涉及基于VIGS的锦绣杜鹃叶片基因沉默体系及其构建方法。

技术介绍

[0002]病毒诱导的基因沉默(virus
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induced gene silencing，VIGS)，是植物抵抗病毒感染的一种机制，通过在 病毒基因组中插入合适的目的基因构建成为重组的病毒载体，实现对植物内源基因表达抑制的一种新的基 因工程技术。VIGS技术无需构建转基因植株，具有周期短、操作简便和成本低等优点，是目前功能基因 组学研究领域常用的技术手段之一。广泛应用于植物的生长发育、抗虫病和代谢调控等相关基因功能研究， 包括茄科(烟草、番茄、土豆)、豆科(大豆、苜蓿、豌豆、大豆)、十字花科(拟南芥)、禾本科(大麦、 小麦、水稻、玉米)、罂粟科(罂粟)和大戟科(木薯)以及在各种组织和器官(叶、块茎、根、果实和 种子组织)中。虽然VIGS在许多植物中已经得到了广泛的应用，但是在该技术在锦绣杜鹃花上的应用和 相关研究较少。
[0003]杜鹃花是我国十大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于VIGS的锦绣杜鹃叶片基因沉默体系，其特征在于，包括辅助病毒载体和表达病毒载体，所述辅助病毒载体为烟草脆裂病毒pTRV1，所述表达病毒载体为目的基因片段的烟草脆裂病毒pTRV2，所述目的基因片段来源于锦绣杜鹃叶片。2.根据权利要求1所述的基于VIGS的锦绣杜鹃叶片基因沉默体系，其特征在于，所述目的基因片段为锦绣杜鹃的用于沉默PDS基因特异性片段，所述用于沉默PDS基因特异性片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求2所述的基于VIGS的锦绣杜鹃叶片基因沉默体系，其特征在于，所述PDS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.基于VIGS的锦绣杜鹃叶片基因沉默体系的构建方法，用于构建权利要求1
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3任一项所述的基于VIGS的锦绣杜鹃叶片基因沉默体系，其特征在于，包括如下步骤：S1，提取锦绣杜鹃叶片总RNA，反转录获得锦绣杜鹃cDNA；S2，利用特异性引物进行锦绣杜鹃cDNA片段PCR扩增，纯化获得目的基因片段；S3，将步骤S2中的目的基因片段与烟草脆裂病毒pTRV2进行重组连接，获得含目的基因的pTRV2重组载体；S4，将步骤S3中pTRV2重组载体以及烟草脆裂病毒pTRV1分别转...

【专利技术属性】
技术研发人员：金松恒，申建双，胡玥，
申请(专利权)人：浙江农林大学暨阳学院，
类型：发明
国别省市：