一株具有预防和缓解过敏性哮喘症状的罗伊氏乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供一株新的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)，为罗伊氏乳杆菌VHProbi M07株，已于2019年10月08日保藏于位于中国武汉的武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2019779。本发明专利技术所提供的罗伊氏乳杆菌用于制备预防和治疗过敏性哮喘的制品。本发明专利技术提供的罗伊氏乳杆菌VHProbi M07可以作为一种食品原料来源使用，长期服用不会有副作用及过量的风险。本发明专利技术提供的罗伊氏乳杆菌能够有效预防和缓解过敏性哮喘症状，单独使用该菌株且无需与益生元和/或其它益生菌复配即可对过敏性哮喘有预防和缓解功效，具有重要的应用价值。具有重要的应用价值。具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一株具有预防和缓解过敏性哮喘症状的罗伊氏乳杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于益生菌筛选与应用
，具体涉及一株具有预防和缓解过敏性哮喘症状的罗伊氏乳杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]过敏性哮喘是一种累及下呼吸道的具有异质性的临床综合征。根据流行病学调查研究结果显示，中国的哮喘患者大约为2000万人，患病率正不断升高。哮喘临床表现为致敏后再次接触过敏原后显示出持续性或间歇性过敏症状，如喘息、咳嗽、呼吸困难和粘液增加等，病理表现为以嗜酸性粒细胞增多以及Th2型免疫反应相关的细胞因子增多。临床治疗上糖皮质激素、β2受体激动剂是治疗哮喘的主要药物，但药物毒性和依从性差等问题一直困扰患者。因此，寻找哮喘的新型治疗方案成为亟需解决的问题。
[0003]近二十年来，科学界对肠道菌群的研究呈现出爆发性增长。研究发现益生菌可以帮助消化吸收，促进肠道菌群平衡，维护人体健康。越来越多的证据表明，益生菌对于人体的健康影响不仅局限于肠道，还有更广泛的作用范围，如内分泌平衡调节、免疫平衡调节、神经系统调节、呼吸系统调剂等。因此，通过服用益生菌来预防和缓解过敏性哮喘这种与免疫调节相关的多因性疾病成为治疗哮喘的一种新思路。
[0004]公开号为CN 109628359 A的中国专利技术专利公开了一株可缓解过敏性哮喘的罗伊氏乳杆菌及其应用，经动物试验表明灌胃该菌株6周可缓解小鼠哮喘症状。公开号为CN 110643542 A的中国专利技术专利公开了一株可缓解过敏性哮喘的罗伊氏乳杆菌及其应用，经动物试验表明灌胃该菌株6周可缓解小鼠哮喘症状。但是现有预防和缓解过敏性症状的益生菌存在作用效果机制不明、见效慢和作用效果弱等问题。因此，亟需找到一株作用机制明确，作用效果显著，能快速针对预防和缓解过敏性哮喘，缓解肺部炎症及恢复Th1/Th2型免疫反应平衡的新益生菌株。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一株新的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)及其应用；所提供的罗伊氏乳杆菌分离自健康哺乳期妇女的母乳，能够调节免疫，改善人体免疫功能，有效预防和缓解过敏性哮喘症状。
[0006]本专利技术所提供的罗伊氏乳杆菌，为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)VHProbi M07株，已于2019年10月08日保藏于位于中国武汉的武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：M2019779。
[0007]M07菌株的RAPD指纹图谱如图2所示，rep
‑
PCR指纹图谱如图3所示。
[0008]本专利技术所提供的罗伊氏乳杆菌VHProbi M07株，其16s rDNA序列为SEQ ID NO:1。
[0009]本专利技术所提供的罗伊氏乳杆菌在制备用于预防和治疗过敏性哮喘的制品中的应用。
[0010]本专利技术还提供一种用于预防和治疗过敏性哮喘的功能性食品，其中包含有的罗伊氏乳杆菌VHProbi M07菌株。
[0011]本专利技术提供的罗伊氏乳杆菌VHProbi M07可以作为一种食品原料来源使用，长期服用不会有副作用及过量的风险。本专利技术提供的罗伊氏乳杆菌VHProbi M07能够有效预防和缓解过敏性哮喘症状，单独使用该菌株且无需与益生元和/或其它益生菌复配即可对过敏性哮喘有预防和缓解功效，具有重要的应用价值。
附图说明
[0012]图1为M07菌株Riboprinter指纹图谱；
[0013]图2为M07菌株的RAPD指纹图谱；
[0014]图3为M07菌株的rep
‑
PCR指纹图谱；
[0015]图4为各组别小鼠白细胞分类计数结果图；
[0016]图5为各组别小鼠细肺泡灌洗液细胞因子测定结果图；
[0017]图6为各组别小鼠肺部组织病理染色结果图。
具体实施方式
[0018]本专利技术所述筛选方法并不局限于实施例所述，已知的能够达到筛选目的的方法均可以，实施例的筛选说明只是对本专利技术的说明，并不是对本专利技术保护范围的限制。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。
[0019]下面结合具体实施例对本专利技术做详细的描述。
[0020]实施例1罗伊氏乳杆菌VHProbi M07的分离筛选
[0021]1、初筛
[0022]配制MRS(Man Rogosa Sharpe)琼脂培养基：纯化水1000mL，蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，酵母提取物5.0g,乙酸钠5g，葡萄糖5g，磷酸二氢钾2g，吐温80 1.0mL，柠檬酸二胺2.0g,碳酸钙20g，七水硫酸镁0.58g，七水硫酸锰0.25g，琼脂15g，调pH6.2
‑
6.5，121℃高压灭菌15min。
[0023]依据2019版《人类遗传资源库伦理规范》，与样本提供者签订项目承诺书和知情同意书后，按照生物样本库标准操作规范，取1mL半年内未食用过益生菌制剂的哺乳期产妇的新鲜母乳，经无菌生理盐水稀释后放入无菌样品袋中，用匀浆仪拍打混匀；取100μL混匀液梯度稀释，涂布于MRS琼脂培养基后于37℃厌氧培养48h，待平板长出单菌落镜检。
[0024]根据镜检结果，申请人共筛选出7株潜在乳酸杆菌，分别命名为M01，M02，
……
M06，M07。
[0025]2、复筛
[0026]配制1L的MRS液体培养基121℃高压灭菌15min，待培养基冷却后加入3.2g猪粘膜胃蛋白酶，摇匀溶解，置37℃水浴摇床中温水浴1h制成耐酸性培养基。
[0027]将筛选得到的7株乳酸杆菌M01，M02，
……
M06，M07，按6％接种量分别接种于上述耐酸性培养基中，37℃条件下厌氧静置培养48h，取发酵液进行菌量计数。
[0028]结果显示，所述7株乳酸杆菌发酵液中活菌量的对数值分别为7.23、6.94、6.76、
7.56、6.33、5.39、8.78Log CFU/mL，其中M07菌株经耐酸性培养基复筛后活菌量最多，对数值高达8.78Log CFU/mL。从而说明M07号菌株耐酸能力最高。
[0029]实施例2菌株鉴定
[0030]1、菌落形态鉴定
[0031]将M07菌株接种于MRS琼脂培养基上，37℃厌氧培养24h后，可见M07单菌落呈乳白色，菌落直径在1.5
‑
3mm左右，表面湿润，显微镜下末端呈圆形的弯曲杆菌。
[0032]2、生理生化特性鉴定
[0033]接种液的准备如下：在无菌条件下，取适量新鲜M07菌液，5000rpm/min离心5min，用PBS缓冲液洗2次，再用同体积PBS缓冲液重菌体后稀释50倍，作为接种液。
[0034]2.1、盐度耐受性试验
[0035]在无菌条件下，向96孔板中分别加入190μL盐浓度为1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％的BSM液体培养基，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种罗伊氏乳杆菌，其特征在于，所述的罗伊氏乳杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M2019779。2.如权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌，其特征在于，所述的罗伊氏乳杆菌的RAPD指纹图谱如图2所示。3.如权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌，其特征在于，所述的罗伊氏乳杆菌的rep
‑
PCR指纹图谱如图3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：段治，张景燕，崔洪昌，郭超群，张陆霞，
申请(专利权)人：青岛蔚蓝生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：