防蜡微生物混合菌剂的制备方法技术

本申请公开了一种防蜡微生物混合菌剂的制备方法，属于油井防蜡技术领域。本申请实施例提供了一种防蜡微生物混合菌剂的制备方法，由于该防蜡微生物混合菌剂中的微生物是从高矿化度的油井中筛选得到的，因此，由该微生物得到的混合菌剂可以对高矿化度的油井进行防蜡，从而提高对高矿化度的油井的防蜡效果。从而提高对高矿化度的油井的防蜡效果。从而提高对高矿化度的油井的防蜡效果。

【技术实现步骤摘要】
防蜡微生物混合菌剂的制备方法


[0001]本申请涉及油井防蜡
特别涉及一种防蜡微生物混合菌剂的制备方法。

技术介绍

[0002]对于溶有石蜡的原油，在开采过程中，随着温度、压力的降低，原油溶蜡能力下降，石蜡开始结晶析出，并不断聚集沉积从而使出现结蜡现象。结蜡不仅会堵塞油层空隙，降低油井产量，还会增大采油负荷，严重时造成生产事故。因此，需要对油井进行防蜡维护。
[0003]相关技术中主要采用微生物防蜡方法，通过向油井中加入食蜡性微生物降解石蜡，但该食蜡性微生物主要生存在低矿化度的油井中，对高矿化度的油井的适应性差，因此，相关技术中的微生物仅适用于对低矿化度的油井进行防蜡，导致对高矿化度的油井进行防蜡时，防蜡效果差。

技术实现思路

[0004]本申请实施例提供了一种防蜡微生物混合菌剂的制备方法，可以提高对高矿化度油井的防蜡效果。具体技术方案如下：
[0005]本申请实施例提供了一种防蜡微生物混合菌剂的制备方法，所述方法包括：
[0006]确定矿化度大于预设矿化度的目标油井；
[0007]从结蜡的所述目标油井中筛选得到芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC13613(T)；
[0008]制备多个种子培养基，所述多个种子培养基用于培养所述芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、所述贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和所述芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)；
[0009]将所述芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、所述贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和所述芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)分别接种于所述多个种子培养基进行培养，得到多种单菌种子液；
[0010]将所述多种单菌种子液按预设比例混合，得到防蜡微生物混合菌剂。
[0011]在一种可能的实现方式中，所述芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、所述贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和所述芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)的混合的预设比例为(1～3):(1～2):(1～2)。
[0012]在另一种可能的实现方式中，所述芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、所述贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和所述芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)的混合的预设比例为3:2:1。
[0013]在另一种可能的实现方式中，所述从结蜡的目标油井中筛选得到芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)，包括：
[0014]从结蜡的所述目标油井中取油水试样，静置待油水分离后取第一体积的原油加入第一期富集培养基中，放入恒温摇床培养，所述原油中含有所述芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、所述贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和所述芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)；
[0015]在达到第一预设培养时间时，取所述第一期富集培养基的上清液转入含有灭菌原油的第二期富集培养基中，再次培养，直至培养周期达到预设周期，每期富集培养基中所述灭菌原油的浓度均大于上一期富集培养基中所述灭菌原油的浓度；
[0016]取最后一期富集培养基的培养液，进行梯度稀释后涂平板，挑取外观不同的菌落重复划线，得到多个不同的菌株；
[0017]对于每个菌株，采用所述菌株对应的菌液涂血平板，测试所述菌液的乳化性能，得到乳化性能最好的两株菌；
[0018]对所述多个菌株进行液蜡膜溶解测试，得到石蜡膜溶解时间最短且溶解圈最大的一株菌；
[0019]提取得到的三株菌的16S rDNA，根据每株菌的16S rDNA，对所述每株菌进行测序，确定所述三株菌分别为所述芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、所述贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和所述芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)。
[0020]在另一种可能的实现方式中，所述方法还包括：
[0021]将5.0g氯化钠、1.0g硫酸铵、0.3g七水合硫酸镁、2.0g硝酸钠、5.0g磷酸二氢钾、10.0g三水合磷酸氢二钾溶于1000mL去离子水中，得到所述第一期富集培养基。
[0022]在另一种可能的实现方式中，所述采用所述菌株对应的菌液涂血平板，测试所述菌液的乳化性能，得到乳化性能最好的两株菌，包括：
[0023]将所述菌株接种在LB培养基中，放入恒温摇床培养，在达到第二预设培养时间时，得到所述菌株的发酵菌液；
[0024]将所述菌株的发酵菌液梯度稀释后涂血平板，选取溶血圈最大的两株菌；
[0025]将所述两株菌的发酵菌液在12000r/min下，离心15min，分别取上清液与液体石蜡按体积比1:1混合，在旋混仪上混合均匀后静置24h，分别测量所述两株菌的乳化指数；
[0026]当所述两株菌的乳化指数均大于预设乳化指数时，得到乳化性能最好的两株菌。
[0027]在另一种可能的实现方式中，所述对所述多个菌株进行液蜡膜溶解测试，得到石蜡膜溶解时间最短且溶解圈最大的一株菌，包括：
[0028]将第二体积的去离子水放入烧杯中；
[0029]取第三体积的液体石蜡滴在所述烧杯的水面上，静置3～5min，待所述液体石蜡均匀铺开；
[0030]对于每个菌株，取第四体积的所述菌株的发酵菌液滴在所述液体石蜡的蜡膜上，选取石蜡膜溶解时间最短且溶解圈最大的一株菌。
[0031]在另一种可能的实现方式中，所述制备多个种子培养基，包括：
[0032]对于每个种子培养基，将10.0g蛋白胨、5.0g酵母浸粉、10.0g氯化钠溶于1000mL去离子水中充分搅拌，得到第一溶液；
[0033]将0.29g硫酸锌、0.24g氯化钙、0.25g硫酸铜、0.17g硫酸镁和0.28g硫酸亚铁溶于
1000mL去离子水中充分搅拌，得本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种防蜡微生物混合菌剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括：确定矿化度大于预设矿化度的目标油井；从结蜡的所述目标油井中筛选得到芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)；制备多个种子培养基，所述多个种子培养基用于培养所述芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、所述贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和所述芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)；将所述芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、所述贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和所述芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)分别接种于所述多个种子培养基进行培养，得到多种单菌种子液；将所述多种单菌种子液按预设比例混合，得到防蜡微生物混合菌剂。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、所述贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和所述芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)的混合的预设比例为(1～3):(1～2):(1～2)。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、所述贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和所述芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)的混合的预设比例为3:2:1。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述从结蜡的目标油井中筛选得到芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)，包括：从结蜡的所述目标油井中取油水试样，静置待油水分离后取第一体积的原油加入第一期富集培养基中，放入恒温摇床培养，所述原油中含有所述芽孢杆菌Bacillus velezensis CR
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502(T)、所述贪铜菌Cupriavidus gilardii LMG 5886(T)和所述芽孢杆菌Bacillus siamensis KCTC 13613(T)；在达到第一预设培养时间时，取所述第一期富集培养基的上清液转入含有灭菌原油的第二期富集培养基中，再次培养，直至培养周期达到预设周期，每期富集培养基中所述灭菌原油的浓度均大于上一期富集培养基中所述灭菌原油的浓度；取最后一期富集培养基的培养液，进行梯度稀释后涂平板，挑取外观不同的菌落重复划线，得到多个不同的菌株；对于每个菌株，采用所述菌株对应的菌液涂血平板，测试所述菌液的乳化性能，得到乳化性能最好的两株菌；对所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏晓霞，扈福堂，马莎莎，何伟荣，党杨斌，张祎，龚玉存，胡斌，孙培耀，
申请(专利权)人：中国石油天然气股份有限公司，
类型：发明
国别省市：