一种融合蛋白及其制备与应用制造技术

本发明专利技术提供了一种融合蛋白，其从N端到C端依次包括：SEC2突变体、连接短肽和iNGR，所述SEC2突变体在如SEQ ID NO:18所示序列的第20、22、118和/或122位氨基酸残基发生突变，所述连接短肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述iNGR的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。本发明专利技术还提供了该融合蛋白的制备方法和应用。本发明专利技术的靶向性融合蛋白可特异性靶向并浸润到肿瘤组织微环境，大幅度提升了超抗原的肿瘤特异性和血管通透性，提高了对肿瘤的杀伤效率，从而用于治疗患者时可有效提高患者的存活能力，具有良好的临床应用价值。有良好的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种融合蛋白及其制备与应用


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种融合蛋白及其制备与应用。

技术介绍

[0002]肿瘤的免疫治疗，是指应用免疫学的原理和方法，通过激活体内的免疫细胞和增强机体抗肿瘤免疫应答，从而有效杀伤肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞生长的治疗方法。由于其副作用小、治疗效果明显，正逐渐成为未来肿瘤治疗的发展方向。
[0003]靶向性融合蛋白是在现代医学生物学发展的基础上提出的一种新型的治疗策略，由靶向分子和细胞毒性分子结合而成。靶向分子常选用肿瘤特异性抗体或短肽，将能够对目的细胞产生杀伤的效应分子递送至肿瘤患处，符合目前肿瘤精准治疗发展趋势。
[0004]iNGR是一种具有环状结构的靶向性穿膜肽，分子量较小，且具有较高的水溶性，序列为CRNGRGPDC，其中的NGR序列能够特异性地结合肿瘤组织血管内皮及肿瘤细胞高表达的整合素αv，然后被特定蛋白酶切割之后，残基片段具有R/KXXR/K的结构特点，能够与NRP
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1(神经纤毛蛋白
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1)相互作用，介导发生细胞膜穿透效应。iNG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白从N端到C端依次包括：SEC2突变体、连接短肽和iNGR，所述SEC2突变体在如SEQ ID NO:18所示序列的第20、22、118和/或122位氨基酸残基发生突变，所述连接短肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述iNGR的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述SEC2突变体在如SEQ ID NO:18所示序列上具有T20L、G22E、H118A、H122A中的4、3、2或1个氨基酸取代；较佳地，所述SEC2突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11所示。3.如权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10所示；较佳地，编码所述融合蛋白的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9所示。4.一种融合基因，其特征在于，其编码如权利要求1或2所述的融合蛋白；较佳地，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9所示。5.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体中含如权利要求4所述的融合基因；较佳地，所述重组表达载体的骨架载体为pET
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TEV。6.一种转化体，其特征在于，其通过在宿主中导入如权利要求4所述的融合基因或者如权利要求5所述的重组表达载体即得；较佳地，所述宿主为大肠杆菌，优选为大肠杆菌E.coliBL21(DE3)细胞或者E.coli TG1。7.一种融合蛋白的制备方法，其包括以下步骤：(1)获得如权利要求6所述的转化体；(2)筛选所述转化体，表达并纯化所述融合蛋白。8....

【专利技术属性】
技术研发人员：徐明恺，张成刚，张惠文，
申请(专利权)人：中国科学院沈阳应用生态研究所，
类型：发明
国别省市：