一种栅藻、其活性成分的提取方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种栅藻、其活性成分的提取方法与应用，所述栅藻于2021年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 20211488。本发明专利技术中筛选得到一种栅藻，命名为Coelastrella sp.SDEC

A kind of Scenedesmus, the extraction method and application of its active components

【技术实现步骤摘要】
一种栅藻、其活性成分的提取方法与应用


[0001]本专利技术属于微藻生物
，涉及一种栅藻、其活性成分的提取方法与应用。

技术介绍

[0002]这里的陈述仅提供与本专利技术相关的
技术介绍
，而不必然地构成现有技术。
[0003]近年来，美白护肤品已经成为日常生活的必需品，但化学美白成分的添加往往会伴随着致敏性、细胞毒性等不安全因素。因此，开发安全、高效的天然产物中的美白成分作为美白护肤品添加物成为化妆品领域的研究热点。
[0004]微藻内含丰富的生物活性物质，包括脂质、多肽或氨基酸、抗氧化剂、多糖和色素，使其可以作为护肤品开发生产的良好来源，但是，目前微藻代谢物在护肤品中的应用技术主要是作为保湿剂和抗氧化剂，应用范围较为局限。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的是提供一种栅藻、其活性成分的提取方法与应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种栅藻，所述栅藻于2021年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M20211488。
[0008]第二方面，本专利技术提供所述栅藻的活性物质的提取方法，包括如下步骤：
[0009]将栅藻培养收获后，加入甲醇溶剂，超声破碎，至藻泥发白停止；
[0010]离心收集上清液，过滤，然后利用大孔树脂去除滤液中的叶绿素。
[0011]第三方面，本专利技术提供一种提取物，由所述提取方法提取得到的活性物质组成。
[0012]第四方面，本专利技术提供所述提取物在制备美白产品中的应用。
[0013]上述本专利技术的一种或多种实施例取得的有益效果如下：
[0014]本专利技术中筛选得到一种栅藻，命名为Coelastrella sp.SDEC
‑
28，从该栅藻提取得到的活性成分可以明显抑制黑色素瘤细胞的增殖活性，能够减少黑色素的产生，对皮肤起到美白的作用。
附图说明
[0015]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0016]图1是本专利技术实施例的栅藻SDEC
‑
28的显微形态学照片；
[0017]图2为本专利技术实施例提供的栅藻SDEC
‑
28的系统发育树；
[0018]图3为本专利技术实施例提供的栅藻SDEC
‑
28甲醇提取物的提取过程流程图；
[0019]图4为本专利技术实施例提供的栅藻SDEC
‑
28对黑色素瘤细胞的细胞活力的影响和抑制率的表征图。
具体实施方式
[0020]应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本专利技术使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0021]第一方面，本专利技术提供了一种栅藻，所述栅藻于2021年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M20211488。
[0022]第二方面，本专利技术提供所述栅藻的活性物质的提取方法，包括如下步骤：
[0023]将栅藻培养收获后，加入甲醇溶剂，超声破碎，至藻泥发白停止；
[0024]离心收集上清液，过滤，然后利用大孔树脂去除滤液中的叶绿素。
[0025]在一些实施例中，用于提取活性物质的栅藻为生长至稳定期的栅藻。
[0026]优选的，所述栅藻的培养基为BG11培养基，栅藻是全光培养，光照强度为50
‑
70μmol/m2/s。
[0027]在一些实施例中，超声破碎的功率为800
‑
1000W，超声破碎时间为80
‑
100min。
[0028]优选的，超声破碎的功率为900W，超声破碎时间为90min。
[0029]在一些实施例中，采用有机滤膜对上清液进行过滤。
[0030]第三方面，本专利技术提供一种提取物，由所述提取方法提取得到的活性物质组成。
[0031]第四方面，本专利技术提供所述提取物在制备抑制黑色素瘤细胞药物中的应用。
[0032]第五方面，本专利技术提供所述提取物在制备美白产品中的应用。
[0033]优选的，所述美白产品选自面膜、保湿霜、防晒乳或保湿乳。
[0034]实施例1
[0035]微藻的分离鉴定与培养
[0036]微藻Coelastrella sp.SDEC
‑
28保藏编号为CCTCC M 20211488，保藏日期为2021年11月25日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，分离于山东东营盐碱地中。
[0037]样品采集
[0038]2021年1月从山东东营盐碱地采集样品。
[0039]SDEC
‑
28的分离纯化
[0040]取回的水样离心浓缩后加入BG11培养基进行扩大培养，扩大培养7天后通过血球板计数法在显微镜下计数计算藻密度，然后将藻密度稀释至16
‑
18cells/mL(确保每个板孔中加入的细胞数为1或0个)。
[0041]在超净实验台中，取50μL稀释后的藻液于96孔板上的小孔中，其中每个小孔预先加有200μL BG11培养基，加盖用封口膜将培养板密封，防止液体挥发。
[0042]将培养板放在光照培养箱内培养10余天，待小孔中长出藻株在倒置显微镜下仔细观察并标记单细胞孔。待标记的单细胞孔内细胞增至500个以上或出现颜色时，转移单细胞孔内的藻细胞于装有10mL BG11培养基并经过灭菌的三角瓶中，用棉塞封口，置于光照培养箱中培养。经过筛选最终得到一株纯藻株，命名为SDEC
‑
28。
[0043]SDEC
‑
28的鉴定
[0044]1、SDEC
‑
28的形态鉴定
[0045]藻细胞在光学显微镜下为绿色，为多细胞和单细胞两种形态，呈圆形，直径为10
‑
15μm，其形态符合栅藻属特征，显微结构如图1所示。
[0046]2、SDEC
‑
28的分子生物学鉴定
[0047]离心收集对数生长期的藻细胞，使用真菌基因组DNA抽提试剂盒提取基因组DNA，对其进行18S rDNA扩增。PCR扩增体系为50μL，其中包括DNA样品0.5μL，10
×
Buffer(Mg
2+
)2.5μL，dNTP(各2.5mM)1μL，酶0.2μL，上游引物(10μM)0.5μL，下游引物(10μM)0.5μL，ddH2O 25μL。PCR扩增程序为：94℃预变性4min；94℃变性45s，55℃复性45s，72℃延伸1min，重复30个循环；72℃延伸10min。
[0048]上下游引物分别为：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种栅藻，其特征在于：所述栅藻于2021年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 20211488。2.权利要求1所述栅藻的活性物质的提取方法，包括如下步骤：将栅藻培养收获后，加入甲醇溶剂，超声破碎，至藻泥发白停止；离心收集上清液，过滤，然后利用大孔树脂去除滤液中的叶绿素。3.根据权利要求2所述栅藻的活性物质的提取方法，其特征在于：用于提取活性物质的栅藻为生长至稳定期的栅藻。4.根据权利要求2所述栅藻的活性物质的提取方法，其特征在于：所述栅藻的培养基为BG11培养基，栅藻是全光培养，光照强度为50
‑
70μmol/m2/s。5.根据权利要求2所述栅藻的活性物质的提取方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴海燕，蒋丽群，谢真，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：