一种大米中硒形态的分析检测方法技术

本发明专利技术涉及食品成分分析技术领域，具体涉及一种大米中硒形态的分析检测方法。包括以下步骤：取大米，对所述大米进行总硒消解制样，若总硒消解制样后的所述大米为富硒大米，则对大米进行粉碎制样，得到大米样品；将用于酶解的提取液对所述大米样品进行酶解处理，得到大米硒形态分析样液；采用高效液相色谱

An analytical method for selenium speciation in Rice

【技术实现步骤摘要】
一种大米中硒形态的分析检测方法


[0001]本专利技术涉及食品成分分析
，具体涉及一种大米中硒形态的分析检测方法。

技术介绍

[0002]硒是人体生命活动中必需的微量元素之一，有机硒主要包括硒蛋白、硒核酸和硒多糖等大分子硒，以及硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸、甲基硒代半胱氨酸和硒代乙硫氨酸等小分子硒化物。目前，大米中的有机形态的硒，如硒蛋白、硒代氨基酸、硒多肽和硒多糖在人体内转变为生理活性物质，为人体所吸收利用。
[0003]目前，用于大米中硒的检测方法有原子荧光光谱法(AFS)、原子吸收光谱法(AAS)和电感耦合等离子体质谱法(ICP
‑
MS)等方法，在食品硒测定的国家标准中，GB 5009.93
‑
2017《食品安全国家标准食品中硒的测定》在旧国标的基础上增加了ICP
‑
MS法为第三法，以及GB 5009.268
‑
2016《食品安全国家标准食品中多元素的测定》第一法采用ICP
‑
MS法，与两种分光光度法和电感耦合等离子体发射光谱法(ICP
‑
OES)相比，具有更快速、灵敏和试剂毒性低等优点。
[0004]然而，根据以上检测技术的不同，大米中的有机形态的硒经过消解的样品可直接进行总硒测定，多以总硒含量
‑
无机硒含量＝有机硒含量，测定过程较为繁琐，只能获得总有机硒含量，无法直接获得具体不同形态的有机硒的含量。
[0005]同时，以上现有的检测方法，由于硒的第一电离能较高(I1＝9.75eV)使得离子化效率相对较低，且存在多种多原子离子的干扰，如
40
Ar
36
Ar
+
对
76
Se、
40
Ar
38
Ar
+
对
78
Se、
40
Ar
37
Ar
+
对
77
Se、
37
Cl
37
Cl
+
对
74
Se及
81
Br1H对
82
Se等，这些多原子离子的干扰降低了ICP
‑
MS技术对硒测定的灵敏度与准确度，无法实现大米中硒形态的完全分离和在线测定。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的不足，本专利技术解决现有的分析检测方法在测定大米中硒形态时，灵敏度与准确度低，导致难以实现大米中硒形态的完全分离和在线测定的情况的问题。
[0007]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种大米中硒形态的分析检测方法，包括以下步骤：
[0008]取大米，对所述大米进行总硒消解制样，若总硒消解制样后的所述大米为富硒大米，则对大米进行粉碎制样，得到大米样品；
[0009]将用于酶解的提取液对所述大米样品进行酶解处理，得到大米硒形态分析样液；
[0010]采用高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体串联质谱联用仪对所述大米硒形态分析样液进行定性和定量分析，分析出大米中的硒形态。
[0011]优选的，所述总硒消解制样的方法采用微波消解法、湿法消解或高压消解法中的一种。
[0012]优选的，所述提取液由纯水、胰蛋白酶、蛋白酶K和链蛋白酶混合制成。
[0013]优选的，按质量份数计，所述提取液中的组分为：
[0014]纯水：22
‑
28份；胰蛋白酶：8
‑
12份；蛋白酶K：8
‑
12份；链蛋白酶8
‑
12 份。
[0015]优选的，所述酶解处理的具体步骤为：将所述提取液加入所述大米样品中，采用40℃
‑
65℃的温度进行水浴振荡4h
‑
6h。
[0016]优选的，所述高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体串联质谱联用仪采用加氧模式Se(m/z 80
‑
>96)，色谱柱为Hamilton PRP
‑
X100分析柱，流动相为pH5.0 的5mmol/L的柠檬酸溶液。
[0017]优选的，所述高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体串联质谱联用仪使用的具体参数值为：
[0018]射频功率为1550W，射频电压为1.30V，采样深度为8.0
‑
10.0mm，载气流速为0.77
‑
1.07L/min，氧气比例为10％
‑
30％，氦气流速为2
‑
5L/min，碰撞模式为O2，检测元素为
78
Se和
80
Se，质量迁移为
78
Se
16
O(m/z 78
‑
>94)，
80
Se
16
O (m/z 80
‑
>96)。
[0019]优选的，所述定性和定量分析的时间为15
‑
20分钟。
[0020]优选的，所述高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体串联质谱联用仪的具体的操作方法为：
[0021]所述大米硒形态分析样液经HPLC液相分离，进入电感耦合等离子体串联质谱仪雾化器雾化，雾化后的样液经高压电离成等离子体；
[0022]等离子体经锥孔进入第一级四级杆Q1进行第一步质量筛选，筛出的等离子体进入碰撞池，碰撞池通入氧气m/z＝16，进行碰撞反应；
[0023]碰撞反应后的离子经第二级四级杆Q2进行第二步质量筛选，进行质量迁移，筛出符合的等离子体。
[0024]与现有技术相比，本方案产生的有益效果是：
[0025]通过提取液对所述大米样品进行酶解后得到大米硒形态分析样液，再采用高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体串联质谱联用仪对大米硒形态分析样液进行定性和定量分析，能够实现在一次进样中实现大米中的硒形态的完全分离和在线测定，能够满足快速准确检测出大米中SeCys2、MeSeCys、Se(IV)、SeMet 和Se(VI)的含量。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式，下面将对具体实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。
[0027]图1为本专利技术一种大米中硒形态的分析检测方法中使用的微波消解法的程序表；
[0028]图2为实施例2中的方法对大米进行分析检测出的5种混合硒形态的标准溶液配制表；
[0029]图3为实施例2中的方法对大米进行分析检测中混合硒形态的标准溶液配制表；
[0030]图4为实施例2中的方法对大米进行分析检测出的SeMet
‑
硒代蛋氨酸的检出限和精密本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大米中硒形态的分析检测方法，其特征在于，包括以下步骤：取大米，对所述大米进行总硒消解制样，若总硒消解制样后的所述大米为富硒大米，则对大米进行粉碎制样，得到大米样品；将用于酶解的提取液对所述大米样品进行酶解处理，得到大米硒形态分析样液；采用高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体串联质谱联用仪对所述大米硒形态分析样液进行定性和定量分析，分析出大米中的硒形态。2.根据权利要求1所述的大米中硒形态的分析检测方法，其特征在于，所述总硒消解制样的方法采用微波消解法、湿法消解或高压消解法中的一种。3.根据权利要求2所述的大米中硒形态的分析检测方法，其特征在于，所述提取液由纯水、胰蛋白酶、蛋白酶K和链蛋白酶混合制成。4.根据权利要求3所述的大米中硒形态的分析检测方法，其特征在于，按质量份数计，所述提取液中的组分为：纯水：22
‑
28份；胰蛋白酶：8
‑
12份；蛋白酶K：8
‑
12份；链蛋白酶8
‑
12份。5.根据权利要求1或4所述的大米中硒形态的分析检测方法，其特征在于，所述酶解处理的具体步骤为：将所述提取液加入所述大米样品中，采用40℃
‑
65℃的温度进行水浴振荡4h
‑
6h。6.根据权利要求5所述的大米中硒形态的分析检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体串联质谱联用仪采用加氧模式Se（m/z 80
‑
> 96），色谱柱为Hamilton PRP
‑
X100分析柱，流动相为pH5.0的5mm...

【专利技术属性】
技术研发人员：符郁馥，谷满屯，韦盈，康蕊，刘冬妮，
申请(专利权)人：海南省食品检验检测中心海南省实验动物中心，
类型：发明
国别省市：