一种丙谷二肽的分离纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种丙谷二肽的分离纯化方法，其包括以下步骤：向溶解于甲酸的丙谷二肽粗品中添加溶剂，所述溶剂包括氢氧化钠的醇溶液，待所述丙谷二肽粗品析晶完全后，降温后离心即可。使用本发明专利技术的分离纯化方法分离纯化丙谷二肽时，能够有效去除三肽、四肽、以及多肽杂质，所得丙谷二肽的收率高且纯度高，并且对设备和工艺环境要求较低，更适于工业化生产。更适于工业化生产。更适于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种丙谷二肽的分离纯化方法


[0001]本专利技术涉及一种丙谷二肽的分离纯化方法。

技术介绍

[0002]丙谷二肽(Alanyl Glutamine)，化学名为N(2)
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L
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丙氨酰
‑
L
‑
谷氨酰胺(见式1)，分子式：C8H
15
N3O4，分子量：217.15。本品为白色结晶性粉末；无臭无味；易溶于水、甲酸，不溶于乙醇、甲醇、丙酮和乙醚。
[0003][0004]谷氨酰胺是一种条件必需氨基酸，是生物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶等的重要前体物质,也是蛋白质合成与分解的调节物。但谷氨酰胺本身由于不稳定、水溶性低而不能直接作为药物，只有将其转化为稳定的衍生物才能充分发挥谷氨酰胺对人体的作用。Peter Furst等发现丙氨酰谷氨酰胺(简称丙谷二肽)是谷氨酰胺理想替代品并于1995年将其开发为肠外营养用药。该药物具有促进肌肉蛋白合成、改善危重病人的临床与生化指标、维持肠道功能、保持机体氮平衡、增强免疫系统等作用，尤其在对大面积突发性创伤的病人具有重要的营养支持作用，目前在欧美等被广泛使用。
[0005]丙谷二肽的合成方法早期为化学合成法，但化学法合成，存在步骤较长，用到的化学试剂较多等问题，限制了其工业化应用。
[0006]近年来由于日本科学家Yokozeki和Hara等在酶技术上的突破(Yokozeki K.,Hara S.,Journal of Biotechnology,2005,115(02):211
‑
220.)，采用酶法合成丙谷二肽能够直接以L
‑
丙氨酸和L
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谷氨酰胺为底物在酶催化的作用下一步合成丙谷二肽，与之前的化学合成法相比技术上，成本上、安全上都取得飞跃性突破，但是该技术路线会产生难以去除的三肽杂质丙氨酰丙氨酰谷氨酰胺、四肽杂质丙氨酰丙氨酰丙氨酰谷氨酰胺和其它多肽类杂质。在目前的工艺技术中大家多采用2～3倍体积水溶剂丙谷二肽粗品，再加入大量的甲醇进行除杂和精制。中国专利CN110407914A公开了一种丙谷二肽的分离提纯方法，即粗品溶解于3倍量的水中，再加入0.1～50％的酸性物质，30～80℃加热搅拌，加入6倍水量的甲醇析晶，65℃减压干燥得纯化的精制品，纯度最高达到99.83％，单个杂质小于0.1％。该技术使用了粗品12倍水量的甲醇，资源浪费较大，对设备和工艺环境要求较高，且除杂效果不佳。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术中去除制备丙谷二肽时产生的三肽、四肽、以及多肽杂质时资源浪费较大从而成本较高、对设备和工艺环境要求较高且除杂效果不佳等缺陷，提供了一种丙谷二肽的分离纯化方法。使用本专利技术的分离纯化方法分离纯
化丙谷二肽时，能够有效去除三肽、四肽、以及多肽杂质，所得丙谷二肽的收率高且纯度高，并且对设备和工艺环境要求较低，更适于工业化生产。
[0008]本专利技术人经过大量研究后意外发现，当采用甲酸作为丙谷二肽的良溶剂，以氢氧化钠的醇溶液进行析晶时，能够有效去除三肽、四肽、以及多肽杂质，且有效提高所得丙谷二肽的收率和纯度。此外，本专利技术还可进一步同时采用氢氧化钠的醇溶液和小极性溶剂(例如正庚烷等)的混合溶剂进行析晶，能够使得析晶效果更佳，从而能够大大减少相关溶剂的用量，从而降低成本。
[0009]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种丙谷二肽的分离纯化方法，其包括以下步骤：向溶解于甲酸的丙谷二肽粗品中添加溶剂以使得所述丙谷二肽粗品进行析晶，所述溶剂包括氢氧化钠的醇溶液，待所述丙谷二肽粗品析晶完全后，降温后离心即可。
[0010]本专利技术人在试验过程中有尝试过采用其他酸性溶剂，但发现最终都难以达到去除杂质的目的，只有采用甲酸时最终才能有效去除杂质。本专利技术人还有尝试使用碳酸钠的醇溶液进行试验，但最终效果均不理想，还尝试过使用甲醇钠、乙醇钠，效果同样不理想，并且这些试剂价格还很昂贵。
[0011]本专利技术中，所述的析晶完全通常是指丙谷二肽粗品被完全析出。本领域技术人员应当知晓，进行本领域常规操作就能够使得丙谷二肽粗品结晶，最终完全被析出。
[0012]本专利技术中，所述离心主要是为了甩料，以得到分离纯化后的丙谷二肽产物。
[0013]本专利技术中，所述的甲酸可以加入粗品中，粗品也可加入甲酸中，两者添加顺序可以不分先后。
[0014]本专利技术中，仅能向丙谷二肽粗品中添加(例如以滴加的形式进行添加)所述溶剂。本专利技术人有尝试过向所述的溶剂中添加粗品，发现会导致最终的分离纯化效果不佳。因此，所述的添加优选通过滴加的方式进行。
[0015]本专利技术中，所述溶解可以通过本领域常规的溶解方式，例如可以通过搅拌进行溶解，优选通过在室温下搅拌进行溶解。所述溶解通常是溶解至溶液澄清(将粗品溶解完全)即可，即使达到溶清即可。所述的室温具有本领域技术人员常规所理解的含义，例如20～25℃左右。
[0016]本专利技术中，所述的溶解于甲酸的丙谷二肽粗品通常是指将丙谷二肽粗品溶解于甲酸中，并且溶解时的溶剂可仅有甲酸而不存在其他种类的溶剂例如水。即，所述的溶解于甲酸的丙谷二肽粗品中不含水。
[0017]本专利技术中，所述氢氧化钠的醇溶液可为本领域常规，例如其中的氢氧化钠占所述醇溶液的质量体积比可以为5
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20％，例如15％，例如可为5
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15％或15
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20％等。
[0018]本专利技术中，所述的醇溶液通常可以优选为低级醇溶液。所述的低级醇通常是指碳链较短的醇类，比如可以是指含有6个碳原子以下的一元醇及二元醇。所述的一元醇通常是指在分子内仅含有一个羟基的醇；二元醇则通常是指具有两个羟基(
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OH)的醇类；所述的醇溶液例如可以为乙醇溶液、甲醇溶液、异丙醇或乙二醇溶液。
[0019]本专利技术中，所述溶剂还可以包括小极性溶剂，所述小极性溶剂为溶于醇类但不溶于水的直链烷烃或其衍生物。所述的直链烷烃或其衍生物中的衍生物具有本领域技术人员通常所理解的含义，通常可以是指直链烷烃分子中的氢原子被其他原子或者原子团所取代而生成的一系列化合物。所述小极性溶剂可为本领域常规，例如可以为选自正庚烷、正己烷
和甲基叔丁基醚中的一种或多种。当进一步同时采用氢氧化钠的醇溶液和小极性溶剂(例如正庚烷等)的混合溶剂进行析晶时，能够使得析晶效果更佳，从而能够大大减少相关溶剂的用量，降低了成本。在某一较佳实施例中，所述的溶剂由氢氧化钠的醇溶液和小极性溶剂组成。
[0020]本专利技术中，所述的醇类具有本领域技术人员通常所理解的含义，通常可以是指分子中含有跟烃基或苯环侧链上的碳结合的羟基的化合物，其官能团为
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OH，所述的醇类包括但不限于甲醇、乙醇、苯甲醇、乙二醇等。
[0021]本专利技术中，所述小极性溶剂的体积可以优选为所述甲酸体积的0.5
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2.5倍，例如0.75倍或1倍，例如可为0.75
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种丙谷二肽的分离纯化方法，其特征在于，其包括以下步骤：向溶解于甲酸的丙谷二肽粗品中添加溶剂，所述溶剂包括氢氧化钠的醇溶液，待所述丙谷二肽粗品析晶完全后，降温后离心即可。2.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述溶解为通过搅拌进行溶解，优选在室温通过搅拌进行溶解；和/或，所述的溶解于甲酸的丙谷二肽粗品中不含水；和/或，所述的添加优选通过滴加的方式进行。3.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述氢氧化钠的醇溶液中氢氧化钠占所述醇溶液的质量体积比为5
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20％，例如15％。4.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述的醇溶液为低级醇溶液，其中所述低级醇优选为含有6个碳原子以下的一元醇和二元醇，所述的醇溶液例如为乙醇溶液、甲醇溶液、异丙醇或乙二醇溶液。5.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述溶剂还包括小极性溶剂，所述小极性溶剂为溶于醇类但不溶于...

【专利技术属性】
技术研发人员：何嘉俊，朱程军，张凯莉，李建华，李敬，唐鹏，查丽燕，苏海霞，郭丽萍，黄蕾，凡佩，张吉书，杨磊，刘莎，
申请(专利权)人：武汉远大弘元股份有限公司，
类型：发明
国别省市：