盐酸多柔比星脂质体注射液中铵根含量的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种盐酸多柔比星脂质体注射液中铵根含量的测定方法，包括以下步骤：(1)样品处理：盐酸多柔比星脂质体注射液采用破乳剂破乳后，稀释剂稀释，得待测样品液；(2)固相萃取：待测样品液经IC

【技术实现步骤摘要】
的一种。最优选甲醇作为破乳剂。
[0010]作为优选，所述稀释剂为纯化水。
[0011]作为优选，离子色谱检测的参数设置为：阳离子色谱柱Metrosep C6
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150/4.0mm，淋洗 液为1.7mmol/L HNO3+1.7mmol/L吡啶二羧酸，柱温：30℃
±
5℃，样品管温度：室温，流 速：0.9
±
0.1ml/min，进样量20μL，运行时间：40min，稀释剂采用纯化水。
[0012]作为优选，步骤(1)样品处理具体为：精密移取盐酸多柔比星脂质体注射液1.0ml 于50ml量瓶中，加入20ml破乳剂，振摇，破乳溶解(手动振摇30
‑
60秒破乳)，再用稀释剂 稀释至刻度，摇匀；再移取5.0ml于25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，得待测样品 液。
[0013]作为优选，所述IC
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RP柱的填料为聚苯乙烯/二乙烯苯高聚物，规格是1cc 50/pkg，平 均粒度为40
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60μm。
[0014]常规的离子色谱法，要求被分析样品溶液比较干净，组分单一，而本专利技术的检测对象 盐酸多柔比星脂质体是个很复杂的样品体系，辅料种类较多，而且含有4种磷脂类大分子化 合物，因此，对于本专利技术的检测对象，常规的离子色谱法无法适用，为了使得本专利技术的样品 适合离子色谱法的检测，本专利技术对于样品进行了特定的前处理，脂质体样品是不同粒径大小 的微粒，检测分析时，破乳是首要的目标，而且要破乳完全，这样内水相的物质才能游离出 来，目标分析物铵根离子才能全都解离出来便于上离子色谱检测，核心的关键就是破乳剂的 选择。破乳剂的定义是一种能破坏乳状液的表面活性剂。专利技术人前期筛选了多种表面活性剂 试验，发现效果均不理想，经过不停扩大探索范围，发现采用极性溶剂如醇类，尤其是甲醇， 取得了非常好的破乳效果，能完全释放铵根离子，不会对样品定容造成干扰，也不会损伤色 谱柱，且成本低。
[0015]本专利技术的样品中含有4种磷脂类辅料，都是大分子，如果不去除，很容易伤害离子色 谱柱，而离子色谱柱比较昂贵(一根色谱柱约2万人民币)，而且离子色谱柱是消耗型的，一 旦破坏了以后，无法再生，永久性损害，所以减少对离子色谱的损伤降低检测成本，本专利技术 在进样采用特殊的进样小柱(IC
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RP柱)去除大分子，以避免损伤离子色谱柱，减少干扰因 素。IC
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RP柱的选择和使用对本专利技术的实现也非常关键。
[0016]此外，本专利技术优化了离子色谱检测的参数以便于精确检测铵根含量。
[0017]本专利技术的有益效果是：方法操作简便、高效、成本低，方法还有专属性好、线性良好、 重复性好、精确度高、灵敏度高的优点。本专利技术的方法当天就可以检测完成，而且样品处理 过程简单。
附图说明
[0018]图1是稀释剂的离子色谱图。
[0019]图2是对照品的离子色谱图。
[0020]图3是样品的离子色谱图。
[0021]图4是铵根的标准曲线。
具体实施方式
[0022]下面通过具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。
[0023]本专利技术中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。
下 述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
[0024]实施例：1、仪器与样品离子色谱仪(万通，940)，分析天平(梅特勒，XP205)，分析天平(梅特勒，ML204/02)。
[0025]2,4
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吡啶二羧酸(≥98.0％，Sigma)，硝酸(AR，国药)，甲醇(HPLC，TEDIA)，乙 醇(HPLC，TEDIA)，异丙醇(HPLC，TEDIA)。
[0026]对照品：铵根(厂家：Merck，批号：HC99836412，浓度：C＝1000μg/ml)。
[0027]稀释剂：纯化水。
[0028]2、方法与结果2.1色谱条件阳离子色谱柱Metrosep C6
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150/4.0，淋洗液为1.7mmol/L HNO3+1.7mmol/L吡啶二羧酸，柱 温：30℃，样品管温度：室温，流速：0.9ml/min，进样量20μl，运行时间：40min，稀释剂 为纯化水。
[0029]2.2样品的制备对照品配制：精密移取铵根标样(C＝1000μg/ml)1.0ml于50ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻 度，摇匀，即得储备液，C＝20μg/ml。精密移取储备液5.0ml于100ml量瓶中，用稀释剂稀 释至刻度，摇匀，即得，C＝1.0μg/ml。
[0030]供试品溶液配制：精密移取盐酸多柔比星脂质体注射液1.0ml于50ml量瓶中，加入20ml异丙醇，振摇，破乳溶解(手动振摇30
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60秒)，再用稀释剂稀释至刻度，摇匀；再移取 5.0ml于25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。经IC
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RP柱过滤(去除磷脂等大 分子疏水性物质)；弃去初滤液1ml，再开始收集续滤液于样品管。IC
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RP柱使用前，用5ml 甲醇，低流速推注，后用10ml纯化水，低流速推注，平放20min，待用。
[0031]2.3稀释剂、对照品及样品色谱图见图1
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3，峰形良好，分离良好。
[0032]2.4专属性空白溶剂及空白辅料均不干扰铵根的检测，专属性良好。
[0033]2.5进样精密度取铵根标准溶液(C＝1.0μg/ml)，精密吸取20μL进样，重复进样6次，记录各主峰面积，计 算该方法进样精密度。结果表明，铵根峰面积的相对标准偏差小于2.0％，表明本方法的进样 精密度良好。
[0034]2.6线性移取铵根标样(C＝1000μg/ml)1.0ml于40ml量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，即得， C＝25μg/ml的储备液。
[0035]再分别移取储备液1.0ml、2.0ml、2.0ml、4.0ml、8.0ml于100ml、100ml、50ml、50ml、 50ml量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，即得25％、50％、100％、200％、400％的线性各 浓度溶液。铵根在25％
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400％范围内，线性良好(图4)。
[0036]2.7准确度准确度标准储备液：精密移取铵根标样(C＝1000μg/ml)5.0ml于50ml量瓶中，用纯化水稀 释至刻度，摇匀，即得，C＝100μg/ml的储备液。
[0037]准确度样品溶液Arc50％：移取空白脂质体(不含铵根)1.0ml于50ml量瓶，精密加 入准确度标准储备(C＝100μg/ml)1.0ml，加异丙醇20ml，振摇溶解，再用稀释剂稀释至刻 度，摇匀；再移取5.0ml于25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。经IC
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RP柱过 滤，收集续滤液于样品管，平行配制3份。
[0038]准确度样品溶液Arc100本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种盐酸多柔比星脂质体注射液中铵根含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品处理：盐酸多柔比星脂质体注射液采用破乳剂破乳后，稀释剂稀释，得待测样品液；(2)固相萃取：待测样品液经IC
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RP柱过滤，弃去初滤液，收集续滤液于样品管；(3)离子色谱检测：样品管上离子色谱检测，外标法计算后获得铵根含量。2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述破乳剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、正丁醇、丙二醇、丙三醇中的一种。3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述稀释剂为纯化水。4.根据权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于，离子色谱检测的参数设置为：阳离子色谱柱Metrosep C6
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150/4.0mm，淋洗液为1.7mmol/L HNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：王艳娟，李龙英，曹婉，韩勇，周华，
申请(专利权)人：浙江圣兆药物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：