一种非编码RNATDRKH-AS1作为标志物和治疗靶点的用途制造技术

本发明专利技术提供一种非编码RNA TDRKH

【技术实现步骤摘要】
一种非编码RNA TDRKH
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AS1作为标志物和治疗靶点的用途


[0001]本专利技术属于肿瘤生物治疗领域，具体涉及一种非编码RNA TDRKH
‑
AS1作为标志物和治疗靶点的用途。

技术介绍

[0002]乳腺癌是当今全球范围内发病率最高的女性恶性肿瘤，每年发病约为30.4万，发病率呈现持续上升的趋势，严重影响女性健康。而乳腺癌中又有将近70%为激素受体阳性乳腺癌，所以基于激素受体阳性乳腺癌的治疗方法和药物显得至关重要。内分泌治疗就是现有技术中常见的治疗该类乳腺癌的方法，其虽然是现有技术中较有效的治疗方法，但其仍存在较大缺陷，即内分泌治疗中的原发或继发内分泌耐药，该类耐药特性会严重影响患者的治疗效果，使得治疗效果无法达到预期。而目前尚无有效的生物标志物可用于预测氟维司群敏感性或用于靶向治疗逆转耐药。
[0003]近年来以非编码RNA为核心的表观遗传调控机制在生命活动中的作用越来越受到重视。长非编码RNA是一类转录本长度在200nt以上的非编码RNA分子，通常被认为不具备编码蛋白功能。但越来越多研究显示长非编码RNA的表达在不同的组织具有高度特异性，不仅其表达水平与肿瘤发展的不同阶段、不同组织学类型密切相关，可以作为肿瘤检测的特异标志物；而且长非编码RNA在肿瘤发生发展中的重要的调控作用也显示其作为肿瘤治疗靶点的可能性。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种非编码RNA TDRKH
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AS1作为标志物和治疗靶点的用途，通过检测非编码RNA TDRKH
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AS1在乳腺癌中的表达，能够预测乳腺癌氟维司群耐药，通过敲低非编码RNA TDRKH
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AS1的表达能够提高耐药乳腺癌细胞对氟维司群的敏感性。
[0005]本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：一种抑制非编码RNA TDRKH
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AS1表达的shRNA在制备逆转氟维司群耐药的药物中的用途，上述shRNA的编码序列选自1)、2)、3)中的一种：1) SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的编码序列；2) SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的编码序列；3) SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的编码序列。
[0006]一种构建物在制备增加乳腺癌细胞对氟维司群敏感性的药物中的用途，该构建物由上述shRNA插入慢病毒载体质粒pLKO.1
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GFP
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Puro所得。
[0007]在一些实施方式中，上述构建物以冻干制剂形式保存。
[0008]一种非编码RNA TDRKH
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AS1在制备预测乳腺癌氟维司群耐药的检测剂中的用途。
[0009]在一些实施方式中，上述检测剂包括用于检测非编码RNA TDRKH
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AS1的表达情况的引物对。
[0010]在一些实施方式中，上述引物对如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。
[0011]一种抑制非编码RNA TDRKH
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AS1表达的shRNA和氟维司群在制备治疗乳腺癌药物中的用途，上述shRNA的编码序列选自1)、2)、3)中的一种：1) SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的编码序列；2) SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的编码序列；3) SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的编码序列。
[0012]一种抑制非编码RNA TDRKH
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AS1表达的慢病毒的构建方法，包括将上述shRNA通过Age I和EcoR I酶切位点插入慢病毒载体质粒pLKO.1
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GFP
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Puro，然后与psPAX2和pMD2.G共转染到宿主细胞293FT培养。
[0013]一种药物组合物，包括氟维司群，还包括上述的一种shRNA或上述的一种构建物，以及药学上可接受的载体和/或辅料。
[0014]在某些实施方案中，上述构建物的剂型为冻干剂型。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：基于非编码RNA TDRKH
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AS1在不同乳腺癌组织中的异常表达，通过检测样本中非编码RNA TDRKH
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AS1能够帮助判断样本中乳腺癌细胞是否对氟维司群耐药，从而制定更为有效的治疗方案，提高治疗效果；此外，本专利技术还提供一种敲低非编码RNA TDRKH
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AS1的shRNA，通过敲低非编码RNA TDRKH
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AS1表达实现乳腺癌氟维司群耐药的逆转，提高乳腺癌对氟维司群的敏感性，提高治疗效果。
附图说明
[0016]图1为本专利技术实施例1中MCF
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7及MCF
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7R细胞中TDRKH
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AS1的相对表达量；图2为本专利技术实施例1中细胞中TDRKH
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AS1的荧光原位杂交图；图3为本专利技术实施例2中TDRKH
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AS1过表达乳腺癌细胞中TDRKH
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AS1的相对表达量；图4为本专利技术实施例2中细胞的集落形成；图5为本专利技术实施例2中氟维司群对乳腺癌细胞的生长抑制率；图6为本专利技术实施例3中细胞中TDRKH
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AS1的相对表达量；图7为本专利技术实施例3中细胞的集落形成；图8为本专利技术试验例1中冻存3个月后的细胞存活率；图9为本专利技术试验例1中24h细胞增殖率；图10为本专利技术试验例1中48h细胞增殖率；图11为本专利技术试验例1中72h细胞增殖率。
具体实施方式
[0017]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0018]需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本专利技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式。
[0019]为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本专利技术的技术方案，以下结合实施例对本专利技术作进一步详细描述：
实施例1：1、检测在氟维司群敏感乳腺癌细胞系、氟维司群耐药乳腺癌细胞系中长非编码RNA TDRKH
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AS1的表达水平。MCF
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7为氟维司群敏感乳腺癌细胞系；MCF
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7R为氟维司群耐药乳腺癌细胞系。
[0020]1.1 MCF
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7细胞从ATCC细胞库获得，将MCF
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7细胞培养于含10wt%胎牛血清的DMEM完全培养基，培养基加入200U/mL青霉素及200U/mL链霉素。
[0021]1.2 MCF
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7R细胞系的构建：取对数生长期的MCF
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...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制非编码RNA TDRKH
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AS1表达的shRNA在制备逆转氟维司群耐药的药物中的用途，其特征在于：所述shRNA的编码序列选自1)、2)、3)中的一种：1) SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的编码序列；2) SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的编码序列；3) SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的编码序列。2.一种构建物在制备增加乳腺癌细胞对氟维司群敏感性的药物中的用途，其特征在于：所述构建物由权利要求1所述的shRNA插入慢病毒载体质粒pLKO.1
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GFP
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Puro所得。3.一种非编码RNA TDRKH
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AS1在制备预测乳腺癌氟维司群耐药的检测剂中的用途。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述检测剂包括用于检测非编码RNA TDRKH
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AS1的表达情况的引物对。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓稼，雷蕾，
申请(专利权)人：浙江省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：