一种胡子鲇性别特异性分子标记引物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种胡子鲇性别特异性分子标记引物，该引物为引物NP544，引物NP544包括正向引物NP544

【技术实现步骤摘要】
一种胡子鲇性别特异性分子标记引物及其应用


[0001]本专利技术属于胡子鲇性别鉴定技术，具体涉及一种胡子鲇性别特异性分子标记引物及其应用。

技术介绍

[0002]胡子鲇(Clariasfuscus)，又称塘虱鱼，隶属鲇形目、胡子鲇科、胡子鲇属。该物种肉质细嫩，味道鲜美，经济价值高，是我国南方大面积养殖的淡水鱼类。胡子鲇具有特殊的附属呼吸器官，可适应极低溶氧环境，为广温性鲇科鱼类，具有抗病能力强、养殖简单、周期短、产量高、成本低和容易运输等特点，目前在广西、广东和福建等地形成规模化养殖产业，成为具有较好发展前途的淡水养殖品种。胡子鲇属雄性异配XX/XY性别决定类型，具有明显的雌雄生长差异，在同等养殖条件下，雄鱼生长速度远远高于同龄雌鱼。当养殖胡子鲇达到上市规格时，雌性胡子鲇正处于性腺发育阶段，腹部膨大，其性腺指数远高于雄性，导致雌鱼比同等规格的雄鱼价格低4元/公斤左右。因此，进行全雄胡子鲇品种研究可以大大节约养殖成本、提高商品鱼质量和经济效益。然而，胡子鲇雌雄个体在胚胎和幼鱼阶段无法通过形态学鉴定性别，这给开展胡子鲇性腺分化研究和单性苗种培育带来很大的困难，也极大地限制了该物种产业的发展。迄今为止，国内外尚无能够成功鉴定胡子鲇遗传性别的分子标记的报道。因此，开发一种准确鉴定遗传性别的分子标记在胡子鲇单性育种中具有极大的生产应用价值。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种胡子鲇性别特异性分子标记引物及包括该引物的试剂盒。
[0004]本专利技术第二个目的在于提供一种胡子鲇性别鉴定方法。
[0005]本专利技术的最后一个目的在于提供上述引物或上述试剂盒或上述方法在胡子鲇性别鉴定方面的应用。
[0006]本专利技术的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现：一种胡子鲇性别特异性分子标记引物，所述引物为引物NP544，所述引物NP544包括正向引物NP544
‑
F和反向引物NP544
‑
R，所述正向引物NP544
‑
F的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，所述反向引物NP544
‑
R的碱基序列如SEQ ID NO：2所示。
[0007]具体的，引物NP544的核苷酸序列如下：
[0008]正向引物NP544
‑
F：5
’‑
cacacataagctggataaacggagaca
‑3’
；
[0009]反向引物NP544
‑
R：5
’‑
ttaaacccaagcccttgccaacaa
‑3’
。
[0010]本专利技术还提供了一种用于胡子鲇性别鉴定的试剂盒，该试剂盒包括上述胡子鲇特异性分子标记引物。
[0011]本专利技术的上述第二个目的可以通过以下技术方案来实现：一种胡子鲇性别鉴定方法，包括以下步骤：在雌雄个体的基因组DNA中采用PCR扩增出特异性片段，具体包括：合成
上述引物，提取待测胡子鲇的基因组DNA，采用上述引物，以基因组DNA为模板，进行PCR扩增，采用毛细管电泳检测扩增产物，根据测序峰型结果鉴定雌雄个体，其中杂合峰型为雄性个体，纯合峰型为雌性个体。
[0012]在上述胡子鲇性别鉴定方法中：
[0013]优选的，PCR扩增时采用的PCR反应体系包含30ng/μL DNA模板1.0μL，2
×
EasyPCR SuperMix 12.5μL，10mM正向引物NP544
‑
F和反向引物NP544
‑
R各0.5μL，ddH2O 10.5μL，总共25μL。
[0014]优选的，PCR扩增时采用的PCR反应程序是：94℃预变性5min，94℃变性30sec，58℃退火30sec，72℃延伸30sec，循环35次，72℃延伸10min。
[0015]本专利技术的上述第三个目的可以通过以下技术方案来实现：上述的引物或试剂盒或性别鉴定方法在鉴定胡子鲇性别方面的应用。
[0016]因此，本专利技术胡子鲇性别特异性分子标记引物的成功开发，突破了胡子鲇遗传性别鉴定的技术瓶颈，为胡子鲇遗传性别控制提供了工具。该技术的应用能够实现孵化早期对胡子鲇苗种进行性别鉴定，提高培育效率、降低成本，促进胡子鲇性别决定、性别控制等研究工作的开展。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：
[0018](1)本专利技术设计的胡子鲇性别特异性分子标记引物，特异性好，准确度高，鉴定方法简单易行，鉴定成功率高，可达100％；
[0019](2)本专利技术方法可一次性快速准确批量鉴定胡子鲇的遗传性别；
[0020](3)本专利技术方法实现了对于胡子鲇苗种遗传性别的准确鉴定，突破了胡子鲇早期苗种无法鉴定性别的技术瓶颈；
[0021](4)本专利技术引物、试剂盒和方法对于胡子鲇性别决定、性别控制具有重要的科研价值和实际应用价值。
附图说明
[0022]图1为实施例2中利用NP544引物对胡子鲇个体进行PCR扩增后的测序峰图，测序采用正向引物NP544
‑
F，上：雄性个体杂合峰型；下：雌性个体纯合峰型；箭头所指碱基即为目标检测位点。
具体实施方式
[0023]下面结合具体实施例详细说明本专利技术的技术方案，以便本领域技术人员更好理解和实施本专利技术的技术方案。下述实施例和附图仅用于示例性说明，不能理解为对本专利技术的限制。实施例中所用试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。除非特别说明，使用的实验仪器均为实验室常规仪器。
[0024]实施例1
[0025]本实施例提供的胡子鲇特异性分子标记引物，所述引物为引物NP544，所述引物NP544包括正向引物NP544
‑
F和反向引物NP544
‑
R，所述正向引物NP544
‑
F核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述反向引物NP544
‑
R的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0026]具体的，引物NP544的核苷酸序列如下：
[0027]正向引物NP544
‑
F：5
’‑
cacacataagctggataaacggagaca
‑3’
；
[0028]反向引物NP544
‑
R：5
’‑
ttaaacccaagcccttgccaacaa
‑3’
。
[0029]采集胡子鲇1个全同胞家系，包含2个亲本和200个子代个体，解剖后鉴定生理学性别。利用高通量测序以胡子鲇基因组序列(NCBI登录号：PRJNA822706)为参考序列对亲本和子代进行标记开发，利用连锁分析定位性别性状位点，定位到单个区间，将区间内显著与性别连锁的SNP标记开发为性别特异性标记。
[0030]利用Primer6从胡子鲇基因组序列中性别决定区间内的部本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胡子鲇性别特异性分子标记引物，其特征是：所述引物为引物NP544，所述引物NP544包括正向引物NP544
‑
F和反向引物NP544
‑
R，所述正向引物NP544
‑
F的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，所述反向引物NP544
‑
R的碱基序列如SEQ ID NO：2所示。2.一种用于胡子鲇性别鉴定的试剂盒，其特征是：所述试剂盒包括权利要求1中的引物。3.一种胡子鲇性别鉴定方法，其特征是：在雌雄个体的基因组DNA中采用PCR扩增出特异性片段，具体包括：合成权利要求1中的引物，提取待测胡子鲇的基因组DNA，采用权利要求1中的引物，以基因组DNA为模板，进行PCR扩增，采用毛细管电泳法检测扩增产物，根据测序峰型结果鉴定雌雄个体，其中杂合峰型...

【专利技术属性】
技术研发人员：田昌绪，沈奕君，林星桦，周大颜，潘炎杨，郑显龙，李广丽，朱春华，廖愚，肖珊，
申请(专利权)人：广西壮族自治区水产引育种中心，
类型：发明
国别省市：