CamkIIδC基因过表达致射血分数降低型心衰的搭建方法技术

本发明专利技术公开了CamkIIδC基因过表达致射血分数降低型心衰的搭建方法，包括运用Crisp

【技术实现步骤摘要】
CamkII
δ
C基因过表达致射血分数降低型心衰的搭建方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及CamkIIδC基因过表达致射血分数降低型心衰的搭建方法。

技术介绍

[0002]心力衰竭是由各种原因的初始心肌损伤，引起心脏结构和功能的变化，导致心室充盈或射血能力受损的一种复杂的临床综合征，目前认为慢性心力衰竭发生发展的基本机制是心肌病理性重构，心衰的进展包括两个主要关键过程，一个过程是心肌死亡，另一个则是神经内分泌系统过度激活所致的系统反应，主要与肾素
‑
血管紧张素
‑
醛固酮系统和交感神经系统过度兴奋有关，干预这两个关键过程是有效预防和治疗心衰的基础，然而，由于医学伦理的限制，对慢性心力衰竭疾病机制及药效研究需要借助动物模型。
[0003]能够广泛应用于慢性心力衰竭疾病机制及药效研究的动物模型应该满足下条件：模型能够反映疾病主要的病理机制、症状、体征；模拟临床疾病的实际发病特点程度高；模拟临床疾病的病变程度可控，且具有良好的重复性；动物遗传背景资料完整；制备模型的方法先进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CamkIIδC基因过表达致射血分数降低型心衰的搭建方法，其特征在于：所述搭建方法包括有如下的搭建步骤：步骤一：运用Crisp
‑
cas9转基因技术，构建CaMKIIδC基因过表达小鼠；步骤二：通过他莫昔芬隔天注射，诱导CaMKIIδC基因过表达，一周后小鼠出现射血分数降低的心衰表型。2.根据权利要求1所述的CamkIIδC基因过表达致射血分数降低型心衰的搭建方法，其特征在于：所述步骤二中的他莫昔芬终浓度为20mg/ml，注射次数为5次，每次注射剂量为50mg/kg。3.根据权利要求1所述的CamkIIδC基因过表达致射血分数降低型心衰的搭建方法，其特征在于：根据步骤一和步骤二还有如下详细的操作流程：
①
查询NCBI获得鼠源CaMKⅡδB cDNA序列，通过体外转录的方式，获得Cas9 mRNA和gRNA；
②
通过构建同源重组的方式，在Rosa26基因位点定点插入CAG
‑
LSLCaMKIIδB
‑
3xHA
‑
IRES
‑
EYFP表达框；
③
构建同源重组载体(donor vector)；
④
通过同源重组的方式，在Rosa26基因位点定点插入CAG
‑
LSL
‑
CaMKIIδC
‑
3xFlag
‑
IRES
‑
tdTomato表达框；
⑤
将Cas9 mRNA、gRNA和donor vector显微注射到C57BL/...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘静，林谦，万洁，徐江林，蔡芸，
申请(专利权)人：北京中医药大学东方医院，
类型：发明
国别省市：