一种快速检测牛结核病的方法技术

本发明专利技术公开了一种通用快速检测牛结核病的引物、探针及检测方法，其中引物和探针适用于RAA荧光法检测，可实现在39℃条件下20分钟内完成动物布鲁氏菌核酸的检测；与猪链球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、布鲁氏菌核酸样本无交叉反应，特异性达100％；检测方法快速、容易实现高通量，同时降低了检测时间和检测成本，本发明专利技术提供的基于RAA荧光法通用快速检测牛结核病病原的方法，灵敏度高，反应检测灵敏度在95％的概率下达到66copies/反应。66copies/反应。66copies/反应。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测牛结核病的方法


[0001]本专利技术属于细菌分子生物学检测
，具体涉及一种对牛结核病病原的快速检测方法。

技术介绍

[0002]牛结核病(Bovine Tuberculosis，bTB)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis，M.bovis)等引起的一种人兽共患的慢性传染病，我国将其列为二类动物疫病。以组织器官的结核结节性肉芽肿和干酪样、钙化的坏死病灶为特征。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须通报的动物疫病(notifiable diseases)。2012年，我国发布《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)》，将牛结核病列为16种优先防治动物疫病病种。《国家奶牛结核病防治指导意见(2017
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2020年)》进一步提出了牛结核病的控制目标。据估计，全世界有超过5000万头牛感染，每年耗费30亿美元。人通过食用未经消毒的牛奶或与患病动物接触，感染牛结核病。
[0003]牛结核病通常呈慢性经过，潜伏期在半月至数年不等。大多数情况下，细菌以休眠状态潜伏在动物体内，不引起任何本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测牛结核病的扩增用引物对和探针，其特征在于，所述引物对用于检测序列为SEQ ID NO:1的片段，探针检测所述引物扩增的产物。2.如权利要求1所述的扩增用引物和探针，其特征在于，所述的引物对中的上游引物的序列为SEQ ID NO：2；下游引物的序列为SEQ ID NO：3。3.如权利要求1所述的扩增用引物和探针，其特征在于，所述的探针的序列为SEQ ID NO：4。4.如权利要求3所述的扩增用引物和探针，其特征在于，所述的探针的所述探针采用荧光报告基团和荧光淬灭基团进行修饰。5.如权利要求4所述探针采用荧光报告基团和荧光淬灭基团进行修饰，荧光报告基团修饰在探针序列离5
′
端碱基数30bp的位置上；荧光淬灭基团修饰在探针序列离3
′
端碱基数18bp的位置上，荧光报告基团与淬灭基团之间间隔了3个碱基CAG，其中A用四氢呋喃残基替换。6.如权利要求5所述的扩增用引物和探针，其特征在于，所述的述荧光报告基团为FAM；荧光淬灭基团为BHQ1。7.一种RAA荧光检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包含有权利要求1
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6任一项所述的扩增用引物和探针。8.一种基于重组酶等温扩增荧光法快...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊晓旭，张浩博，刘婷婷，亓菲，孙翔翔，刘蒙达，田莉莉，孙明军，董雅琴，焉鑫，付树芳，孙世雄，迟庆安，冯淑芳，仵国政，张培培，魏润宇，王毓秀，邵卫星，孙淑芳，范伟兴，
申请(专利权)人：中国动物卫生与流行病学中心，
类型：发明
国别省市：