一种可拮抗RBM25蛋白RNA结合活性的多肽RBIP-21及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种可拮抗RBM25蛋白RNA结合活性的多肽RBIP

【技术实现步骤摘要】
一种可拮抗RBM25蛋白RNA结合活性的多肽RBIP
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21及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物
，特别是涉及一种可拮抗RBM25蛋白RNA结合活性的多肽RBIP
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21及其应用。

技术介绍

[0002]子宫内膜异位症(内异症)是指子宫内膜组织(腺体和间质)在子宫腔被覆内膜及子宫以外的部位出现、生长、浸润，反复出血，继而引发疼痛、不孕及结节或包块等。内异症是生育年龄妇女的多发病、常见病。内异症病变广泛、形态多样、极具侵袭性和复发性，具有性激素依赖的特点。约10％的育龄期女性受到该疾病的困扰，在临床诊疗中我们发现该疾病在不孕女性中约占20％
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50％，在慢性盆腔痛的育龄期女性中可高达90％。据2018年的一项权威统计，全世界约有176,000,000育龄期女性被确诊为内异症。内异症的具体发病机制尚未完全阐明，目前的主要学说认为异位内膜于宫腔外种植可能与粘附侵袭、新生血管形成、微环境免疫异常、炎症等生物学过程有关。其中子宫内膜异位症间质细胞的无序过度增殖和肌层浸润是导致内异症反复发作，逐渐进展的关键因素。目前已有的抗内异症方法虽有一定疗效，但仍存在疗效低、选择性差、毒副反应大、易产生耐药等问题。因此，寻找新型高效低毒的抗内异症药物一直是国内外医药研发的热点。
[0003]抗内异症的靶向治疗是指在分子水平上，通过药物靶向作用于无序过度增殖和肌层浸润的内异症间质细胞，使其生长显著抑制，而不影响正常组织细胞。与传统细胞毒性药物治疗不一样，抗内异症分子靶向治疗具有特异性抗内异症作用，且毒性明显减少。靶向治疗的发展使得人类对内异症的治疗更加精准。近十年来，抗内异症靶向药物的研发已经有了长足的发展，在既往非靶向抗内异症药物非甾体类抗炎药(NSAID)、口服避孕药的基础上，新型的具有靶向性的高效孕激素、雄激素衍生物以及促性腺激素释放激素激动剂(GnRH
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a)占到抗内异症药物研发中的70％。
[0004]靶向多肽由于易于合成、免疫原性低、活性高、不良反应轻和来源广泛等优点，已应用于药物研究。抗细胞过度增殖性多肽通过与特定位点的结合，发挥抑制细胞无序过度增殖过程的发生和发展的作用。因此，越来越多的多肽药物被开发并应用于临床。迄今在生物体内发现的多肽已达数万种，广泛参与调节机体内各系统、器官、组织和细胞的功能活动，在生命活动中发挥重要作用。近年来，利用现代生物技术合成的多肽药物已成为药物研发的热点之一。
[0005]但是针对内异症的靶向多肽面临靶点寻找困难等问题，所以有必要积极研究针对内异症的靶向多肽的靶点，并给予相应的靶向多肽干预。
[0006]RBM25(RNA binding motif 25，RNA结合基序25)是一种RNA结合蛋白，在真核细胞谱系中广泛保守。它包含一个N端RNA结合基序结构域(RRM)、一个中央富含谷氨酸/精氨酸的序列(ER
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rich结构域)和一个C端PWI结构域。在酵母中，RBM25同源物是U1小核核糖核蛋白的组成成员，而在人类中，它与完整的剪接体结合并可以被共同纯化。据报道，人RBM25通过调节BCL2L1基因的促凋亡和抗凋亡转录物的平衡来调节HeLa细胞的凋亡，也可以导致心
力衰竭期间SCN5A编码的心脏电压门控Na+通道截断。总的来说，这些研究表明人类RBM25作为一个RNA剪接因子起作用。已知RBM25与多种良恶性细胞的无序增殖有着密切的联系，新近发现RBM25与子宫内膜异位症间质细胞的无序过度增殖和肌层浸润密切相关，RBM25在子宫内膜异位症疾病的发生发展中均起到促进作用。目前，RBM25特异性抑制剂尚未见报道。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种可拮抗RBM25蛋白RNA结合活性的多肽RBIP
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21及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术通过设计靶向多肽，针对RBM25的作用位点，从而阻断RBM25的促子宫内膜异位症效应，最终抑制子宫内膜异位症的发生发展；并且将该多肽与细胞穿膜肽通过共价键连接起来，达到既有靶向包括内膜异位症在内的无序增殖细胞，又具有高效入胞的效果。
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0009]本专利技术提供一种可拮抗RBM25蛋白RNA结合活性的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。实验证明，该多肽可竞争性拮抗内异症促无序增殖基因RBM25与RNA的结合，并在细胞水平表现出明显的抑制无序增殖和抑制浸润的作用。
[0010]本专利技术还提供一种多肽在拮抗RBM25蛋白RNA结合活性中的应用，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0011]本专利技术还提供一种多肽在制备抗子宫内膜异位症药物中的应用，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0012]本专利技术还提供一种抗子宫内膜异位症多肽，包括子宫内膜异位症间质细胞杀伤结构域和穿膜结构域，其中，所述子宫内膜异位症间质细胞杀伤结构域的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0013]进一步地，所述穿膜结构域的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0014]进一步地，所述穿膜结构域连接于所述子宫内膜异位症间质细胞杀伤结构域的N端。
[0015]本专利技术还提供一种如上所述的抗子宫内膜异位症多肽在制备抗子宫内膜异位症药物中的应用。
[0016]进一步地，所述药物通过如下一种或多种途径治疗子宫内膜异位症：
[0017](1)抑制子宫内膜异位症间质细胞的生长；
[0018](2)抑制子宫内膜异位症间质细胞的增殖活性；
[0019](3)抑制子宫内膜异位症间质细胞的浸润能力。
[0020]本专利技术公开了以下技术效果：
[0021]本专利技术设计的多肽，通过特异性、竞争性抑制RBM25和RNA的结合，从而阻遏两者相互作用带来的生物学效应，发挥抑制内异症的作用。此外，可在该多肽N端添加了穿膜肽以提高其进入细胞的效率。加入生物素标记，使得其更方便的在细胞水平中进行应用，实验通过生物素富集相关的分子，从而进行下一步的机制研究。加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记使其可通过荧光共聚焦显微镜观察该多肽分子在细胞中的定位，明确其发挥作用的区域。
[0022]本专利技术的抗内异症多肽的穿膜结构域本身没有细胞毒性，但连接内异症间质细胞杀伤结构域后，有明显的抑制内异症间质细胞增殖、克隆形成、细胞浸润的效应。本专利技术的
抗内异症多肽，不仅可以单独作为抗内异症的生物治疗药物，还有望结合其他治疗方式来抑制内异症。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0024]图1为RBM25蛋白的结构域示意本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可拮抗RBM25蛋白RNA结合活性的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。2.一种多肽在拮抗RBM25蛋白RNA结合活性中的应用，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。3.一种多肽在制备抗子宫内膜异位症药物中的应用，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。4.一种抗子宫内膜异位症多肽，其特征在于，包括子宫内膜异位症间质细胞杀伤结构域和穿膜结构域，其中，所述子宫内膜异位症间质细胞杀伤结构域的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。5.根据权利要求4所述的抗子宫内膜异...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈莉娟，韩志强，胡彬，刘伟，朱建华，周浩，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：