一种基于NMR波谱法对三七有效成分快速鉴别的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于NMR波谱法对三七有效成分快速鉴别的方法，属于分析检测技术领域。本发明专利技术基于三七植物原材有效成分—三七总皂苷(total panax notoginseng saponins,tPNS)，其中主要单体皂苷具有共同母核结构——带侧链烯

【技术实现步骤摘要】
一种基于NMR波谱法对三七有效成分快速鉴别的方法


[0001]本专利技术涉及一种基于NMR波谱法对三七有效成分快速鉴别的方法，属于分析检测


技术介绍

[0002]三七(Panax notoginseng)，为五加科人参属植物，是中国传统名贵中药材。因其具有散瘀止血、消肿定痛、抗炎和抗氧化等功效，因此，在药品、化妆品、保健品等领域有广泛应用。三七主要功效成分为三七总皂苷(total panax notoginseng saponins,tPNS)，含量占全株植物7％左右，绝大多数tPNS的化学结构属达玛烷型四环三萜皂苷。三七根的主要单体皂苷包括人参皂苷Rg1、Rb1、Rd和三七皂苷R1，含量约占tPNS的80％。
[0003]植物原材和提取物的质量直接关系到制成品功效。目前市售三七根提取液产品的鉴别与定量多采用TLC、HPLC、GC等方法。尽管色谱类方法具有检测灵敏度高等优点，然而实际应用中，由于植物源样品成分复杂，色谱峰分离度低，往往需要繁复的样品预处理步骤，分析过程耗时长费用高。同时，此类天然产物的标准对照品多数不易获得，价格昂贵，也限制了方法的广泛应用。另外，由于实际样品中成分的复杂性，植物源样品鉴别也经常采用指纹图谱对检材整体评价，这种非靶向分析方法不能给出确切的成分信息。质谱(MS)能阐释物质的化学结构，液质联用(HPLC
‑
MS)技术为植物源产品鉴别与定量分析提供了有力支持。然而在快速鉴别领域，由于这类检测的样品制备程序繁琐，数据解读复杂而不具优势，如被检测成分定性也需要有相应标准品；色谱柱固定相对样品溶液相pH、温度有适用范围要求等。以上对HPLC应用于复杂被测对象—植物源样品分析—带来一定困难。
[0004]核磁共振波谱技术具有重现性好、非破坏性、非特异性和可定量等优点，在植物初级代谢物或特异代谢物(如酚类、生物碱、萜类、聚酮化合物、生氰糖苷、芥子油苷、香豆素、鞣质、苯并恶唑类等)的研究中已获得非常广泛的应用，液体NMR已是表征植物样品提取物中极性、半极性或非极性化合物结构的通用工具。但是植物源样品1H NMR存在谱峰重叠严重、谱图复杂的特点，故很难直接用于实际样品的鉴定。为了克服这类问题，人们提出了许多新型的核磁检测技术。例如姜阳明等采用CPMG脉冲序列采集杜仲的特征化合物松脂醇二葡萄糖苷的1H NMR谱，对谱图作CRAFT分析提取到杜仲1H NMR谱的特征信号，并用于杜仲产地鉴别。鉴于植物源样品成分的复杂性，也有对标准植物检材采集1D NMR图谱，构建NMR指纹谱库，以非靶向分析建立鉴别模型的技术。NMR非靶向分析一般采用微步径积分法处理图谱，对数据聚类分析进而达到鉴别的目的。非靶向分析具有操作简便易行的特点，在实际工作和三七产品鉴定中具有广泛的应用前景，然而该方法不能明确指证其中有效成分。
[0005]HSQC
‑
TOCSY核磁共振谱是一种HSQC法与TOCSY法相结合的一种2D NMR相关实验。在HSQC
‑
TOCSY谱图中既显示一键1H
‑
13
C偶合(HSQC)，还显示了整个自旋体系中的相关性(TOCSY)。例如藤荣伟等在分析大叶吊兰苷A时，采用HMQC
‑
TOCSY法成功归属分子中糖基部分的结构。HMQC与HSQC方法稍有区别，同为观察一键1H
‑
13
C偶合。HSQC
‑
TOCSY谱法在复杂糖类和肽类化合物结构分析应用较广泛。鉴于目前尚没有适合于三七产品快速鉴定的理想方
11进行处理。
[0020]在本专利技术的一种实施方式中，所述自旋共振信号群通过
13
C NMR谱全归属的基础上获得。
[0021]在本专利技术的一种实施方式中，所述
13
C NMR谱数据采集条件：脉冲序列zgpg30；采样时间(AQ)1.36s；时间域(TD)64k；扫描次数(NS)4096；弛豫时间(D1)2s，谱宽(SW)24038.4Hz。
[0022]本专利技术还提供了上述方法在检测领域的应用。
[0023]有益效果：
[0024]本专利技术操作步骤简单，可以对三七植物原材及其制成品快速靶向鉴别。
[0025]本专利技术基于三七植物原材有效成分—三七总皂苷(total panax notoginseng saponins,tPNS)，其中的主要单体皂苷具有共同母核结构——带侧链烯
‑
24达玛烷环，本方法实现了对三七有效成分快速靶向鉴别，以2DHSQC
‑
TOCSY谱图是否显示三七总皂苷特征自旋共振信号群，判断所检测产品是否真实含有三七有效成分，本方法指标值
13
C化学位移的检测误差Δδ≤0.02(n＝5)。
附图说明
[0026]图1为所采集HSQC
‑
TOCSY谱图。
[0027]图2为所采集
13
CNMR谱图。
[0028]图3为所采集1HNMR谱图。
具体实施方式
[0029]下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。
[0030]实施例1参数优化
[0031](1)HSQC
‑
TOCSY谱数据采集参数自旋锁定(spin lock)时间D9需优化，以保证采集数据性噪比足够高，相关峰系在谱图显现。
[0032]固定其它谱图采集和数据处理条件(同实施例2)，以D9为单一变量，分别修改D9为20、30、40、50、60、70、80、100、120ms，观察相关峰的峰容积变化，并用其它NMR方法交叉验证相关峰。研究发现，当D9为50～80ms时，能够取得三七皂苷特征自旋共振信号群，即能够同时检出四条峰系，因此，最终确定D9优化参数为50～80ms。
[0033](2)当待测样品为三七提取液时，其中固体小柱品牌和规格、甲醇的洗脱体积需优化，以保证尽可能除去助溶剂而目标提取物不致损失。
[0034]平行将市售三七提取液吸附于固体小柱，单因素观察甲醇洗脱体积的影响。采用甲醇分别洗脱2、4、6、8、10mL，采用气相色谱仪测定助溶剂在洗脱液中含量，紫外可见分光光度计测定三七总皂苷在洗脱液中含量。绘制洗脱曲线，计算助溶剂累计清除率、三七总皂苷总损失量，研究发现，当甲醇洗脱体积为6～8mL时，助溶剂累计清除率为>90％、三七总皂苷总损失量为<5％，满足要求，故优选洗脱体积为6～8mL。
[0035](3)当待测样品为三七根时，其中提取液乙醇浓度和大孔吸附树脂柱的类型需优化，以保证目标提取物提取率高而共存杂质被清除。
[0036]具体参照(2)制定优化方案。平行将市售三七根粉末用不同浓度乙醇溶液浸提，单
因素观察乙醇浓度对三七总皂苷提取率的影响。采用乙醇浓度分别为0、20、40、50、70、90％，紫外可见分光光度计测定三七总皂苷在浸提液中含量。最本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三七有效成分快速鉴别的方法，其特征在于，所述方法包括：取一定量的待测样品用氘代试剂萃取，将所得萃取物复溶于氘代试剂，采集HSQC
‑
TOCSY核磁共振谱并进行谱图分析，通过比对HSQC
‑
TOCSY谱图是否显示有三七皂苷特征自旋共振信号群，即可鉴定待测样品中是否存在三七有效成分，其中，三七皂苷特征自旋共振信号群包括：峰系1为
13
Cδ125.8
‑
δ36.1
‑
δ22.8；峰系2为
13
Cδ88.8
‑
δ39.0
‑
δ26.5，或δ78.8
‑
δ39.1
‑
δ27.4；峰系3为
13
Cδ70.0
‑
δ49.5
‑
δ30.6，或δ70.0
‑
δ48.9
‑
δ31.5；峰系4为
13
Cδ56.2
‑
δ34.9
‑
δ18.3，或δ77.8
‑
δ61.2
‑
δ44.7。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，HSQC
‑
T...

【专利技术属性】
技术研发人员：冉国侠，宋启军，王婵，陈小芬，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：