改进生物分析测定中的电化学发光信号的方法技术

本发明专利技术公开了电化学发光(ECL)标记物分子，被所述ECL标记物分子标记的检测试剂，和在生物分析检测中使用所述ECL标记物分子和被所述ECL标记物分子标记的检测试剂的方法，特别是，涉及使用非局域化的发光基团的电产生化学发光或电化学发光(ECL)的免疫分析和核酸分析。析。析。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改进生物分析测定中的电化学发光信号的方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求获得2019年10月31日提交的美国非临时专利申请第16/670,226号的优先权，该申请的公开内容通过引用全部纳入本文。


[0003]本专利技术涉及生物分析测定的改进，特别是采用离域发光基团的电致化学发光或电化学发光(ECL)的免疫分析和核酸分析。

技术介绍

[0004]基于生物亲和性的生物分析测定，如免疫分析和DNA探测，在很大程度上依赖于标记技术，借助于标记技术，产生信号的单元通过共价键被连接至可与测定程序中的被测物特异性结合的生物分子的某些功能基团上。在一些竞争性的分析方法中，产生信号的单元通过共价键被连接在被测物分子上后，与样本中的被测物竞争其结合伴侣。在临床电化学发光(ECL)免疫分析中作为标记分子的是一种三联吡啶钌(II)的活性酯，如美国专利5,744,367和文献(G.F.Blackburn et al.,Clin.Chem.1991,37/9,1534
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1539)中披露的[4<br/>‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种检测样品中被测物的方法，其特征在于，包括以下步骤：a)将所述样品与检测试剂一起孵育以提供结合有被测物的被标记检测试剂，其中，所述样品中含有所述被测物，其中，所述检测试剂被一个或多个ECL标记物标记，其中所述ECL标记物含有至少一个式1的片段：其中，R1和R2相同或不同，并且各自含有ECL发光基团，其中，所述ECL发光基团是过渡金属配合物，并且其中所述结合有被测物的被标记检测试剂被固定在固相上；b)将所述结合有被测物的检测试剂与未结合被测物的检测试剂和其他未固定化的物质分开，以提供分开的结合有被测物的被标记检测试剂，其中，所述分开的结合有被测物的被标记检测试剂被固定在所述固相上；c)使所述分开的结合有被测物的被标记检测试剂与缓冲水溶液接触，其中该缓冲水溶液包含至少一种叔胺；d)电化学触发ECL发光基团和所述叔胺的氧化，从而释放ECL信号；和e)检测所述ECL信号，从而检测所述被测物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其进一步包括通过用一个或多个ECL标记物标记被测物特异性试剂来提供所述检测试剂的初始步骤。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，还包括以下步骤：f)定量化所述被测物。4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，其中，所述ECL标记物包括钌或铱配合物。5.根据权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，其中，R1和R2相同。6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，其中，所述叔胺是烷基叔胺。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，其中所述烷基叔胺是支链胺。8.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，其中所述叔胺是三正丙胺、三丁胺、三乙胺、或N,N
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二丁基乙醇胺。9.根据权利要求2～8任一项所述的方法，其特征在于，其中，所述被测物特异性试剂是所述被测物的单克隆抗体、蛋白质或核酸识别伴侣或其类似物，或是所述被测物的类似物/同源物/衍生物。10.根据权利要求1～9任一项所述的方法，其特征在于，其中所述叔胺相对于所述ECL标记物的浓度过量至少10倍。11.一种ECL标记物，其特征在于，其包括至少一个式1的片段：其中R1和R2是相同或不同的，并且各自包括ECL发光基团；其中，ECL发光体是一种过渡金属配合物，最好是钌或铱配合物。
12.被根据权利要求11所述的一种或多种ECL标记物标记的检测试剂，其特征在于，其中所述检测试剂是化学或生化分子。13.一种式2的ECL标记物：其中：Y1和Y2相同或不同，各自独立地是ECL发光基团、取代的发光基团或含有ECL发光基团的基团；X是羧基、羧酸的N
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琥珀酰亚胺酯、羧酸的磺基
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N
‑
琥珀酰亚胺酯、氨基磷酸酯(phosphoramidite)、异硫氰酸基(isothiocyanato)、甲酰基、肼基、羟基、或马来酰亚胺基；T1和T2分别独立为亚烷基、亚烯基、
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O
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C1‑
10
亚烷基
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、
‑
C1‑
10
亚烷基
‑
O
‑
C1‑
10
亚烷基
‑
、
‑
[CH2CH2‑
O]1‑
10
‑
、
‑
CONH
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C1‑
10
亚烷基
‑
、
‑
C1‑
10
亚烷基
‑
CONH
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、
‑
NHCO
‑
C1‑
10
亚烷基
‑
、
‑
[CONH
‑
CH2CH2]1‑
10
‑
、
‑
[CH2CH2‑
CONH]1‑
10
‑
、
‑
[NHCO
‑
CH2CH2]1‑
10
、芳香环；以及m和n独立地各自是1至10之间的整数；以及其中，ECL发光基团是过渡金属配合物，最好是钌或铱配合物。14.被根据权利要求11或13所述的一种或多种ECL标记物标记的检测试剂，其中所述检测试剂是选自蛋白质、抗体和核酸适配体组成的集合中的生化分子。15.一种式3的ECL标记物：其中：Y是ECL发光基团；X是羧基、羧酸的N
‑
琥珀酰亚胺酯、羧酸的磺基
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N
‑
琥珀酰亚胺酯、氨基磷酸酯(phosphoramidite)、异硫氰酸基(isothiocyanato)、甲酰基、肼基、羟基、或马来酰亚胺基；T1,T2和T3分别独立地为亚烷基、亚烯基、
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O
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C1‑
10
亚烷基
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,
‑
C1‑
10
亚烷基
‑
O
‑
C1‑
10
亚烷基
‑
,
‑
[CH2CH2‑
O]1‑
10
‑
,
...

【专利技术属性】
技术研发人员：周明，
申请(专利权)人：联吡啶钌科学公司，
类型：发明
国别省市：