一种提取神经突触体的方法技术

本发明专利技术提供了一种提取神经突触体的方法。所述提取神经突触体的方法包括于2～8℃，依次获取组织匀浆，并对组织匀浆进行一次密度梯度离心和二次梯度离心，获得神经突触体。本发明专利技术的提取神经突触体的方法，全程控制在2～8℃进行操作，能够有效保持神经突触体中细胞活度，避免了RNA的降解，通过控制离心时离心液的密度梯度分布能够高效快速地获取神经突触体，缩短了提取时间，获得的神经突触体具有较高活性和总RNA完整性。和总RNA完整性。和总RNA完整性。

【技术实现步骤摘要】
一种提取神经突触体的方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，涉及一种提取神经突触体的方法。

技术介绍

[0002]突触是神经元之间功能联系和信号传导的关键部位，其将数十亿的神经元连接到神经元和神经胶质环路中，构成信息处理和驱动行为的基础，在调节人的学习、记忆以及思考方式中发挥关键作用。若突触在结构和功能上损伤，可能会导致大脑功能障碍疾病。
[0003]原位杂交技术揭示了在神经元树突、轴突和突触中存在大量的RNA，且RNA具有多样性，并且大量研究已经证明了某些蛋白在这些部位存在局部翻译。但在神经元与神经元之间，转录和翻译的特征及机制尚不清楚，仍需进行大量研究工作，如基因转录水平分析等，但目前对突触、树突及轴突部位RNA提取的技术尚不成熟，限制了相关研究的的发展。
[0004]神经突触体(Synaptodendrosome，SD)指突触小体及其夹断的突触末端和相连的树突片段，包括富集在突触小体周围并且由与突触形成和功能相关的特定的蛋白组成的亚细胞结构(特别是包含部分轴突、树突及突触前膜、突触后膜和突触链接复合体部分)，是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提取神经突触体的方法，其特征在于，所述提取神经突触体的方法包括以下步骤：(1)于2～8℃，将动物组织加入到组织匀浆缓冲液中进行研磨和过滤处理，得到组织匀浆；(2)于2～8℃，依次将密度梯度为30％～40％的组织匀浆
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OptiPrep溶液、密度梯度为24％～26％的OptiPrep溶液、密度梯度为14％～16％的OptiPrep溶液、密度梯度为11.5％～13.5％的OptiPrep溶液和密度梯度为8％～10％的OptiPrep溶液加入到离心管中，离心，得到一次离心液；(3)于2～8℃，取一次离心液中神经突触体层，并加入到缓冲液中进行稀释，获得混合液，依次将密度梯度为20％～26％的Percoll溶液、密度梯度为14％～16％的Percoll溶液、密度梯度为9％～11％的Percoll溶液、密度梯度为5％～7％的Percoll溶液和混合液加入到离心管中，离心，得到二次离心液；(4)于2～8℃，取二次离心液中神经突触体层，加入缓冲液进行稀释，离心，收集沉淀，得到所述神经突触体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述离心的转速为800～1200rpm；优选地，步骤(2)所述离心的时间为10～30min；优选地，步骤(1)所述组织匀浆缓冲液、步骤(3)所述缓冲液和步骤(4)所述缓冲液中含有RNA酶抑制剂；优选地，所述RNA酶抑制剂的浓度为4～40U/mL；优选地，步骤(3)所述稀释的倍数为≥1.5倍。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述动物组织包括鼠脑组织；优选地，步骤(1)所述组织匀浆缓冲液包括蔗糖、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液、乙二胺四乙酸、二硫苏糖醇和氟化钠；优选地，所述蔗糖在所述组织匀浆缓冲液中的浓度为300～340mM；优选地，所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液在所述组织匀浆缓冲液中的浓度为5～15mM；优选地，所述乙二胺四乙酸在所述组织匀浆缓冲液中的浓度为0.5～3mM；优选地，所述二硫苏糖醇在所述组织匀浆缓冲液中的浓度为1～3mM；优选地，所述氟化钠在所述组织匀浆缓冲液中的浓度为0.1～0.5mM；优选地，步骤(1)所述组织匀浆缓冲液、步骤(3)所述缓冲液和步骤(4)所述缓冲液中还包括蛋白酶抑制；优选地，步骤(1)步骤所述研磨的转速为1000～1500rpm；优选地，步骤(1)所述过滤的过滤器规格为25～35μm；优选地，步骤(1)所述过滤的过滤器包括尼龙过滤器。4.根据权利要求1
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3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述组织匀浆
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OptiPrep溶液加入离心管前还需和组织匀浆缓冲液混合；优选地，所述组织匀浆
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OptiPrep溶液和所述组织匀浆缓冲液的体积比为(1～1.5):2；优...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈宇，屈雪琪，林力，许进英，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：