一种茯苓中三萜酸类化合物含量的测定方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种茯苓中三萜酸类化合物含量的测定方法及应用，属于中药质量分析与控制领域。该测定方法包括以下步骤：S1、取供试品溶液，通过液相色谱法进行检测；S2、以茯苓酸为参照物，计算供试品溶液中茯苓新酸B、去氢土莫酸、茯苓新酸A、去氢茯苓酸、松苓新酸的含量；本发明专利技术建立了适宜的茯苓三萜酸类化合物的HPLC分析方法，选用茯苓酸为内参物，建立了同时测定茯苓中6种茯苓三萜酸含量的一测多评方法，节约检测成本和时间，为茯苓的质量控制提供了参考。参考。参考。

【技术实现步骤摘要】
一种茯苓中三萜酸类化合物含量的测定方法及应用


[0001]本专利技术属于中药质量分析与控制
，具体涉及一种茯苓中三萜酸类化合物含量的测定方法及应用。

技术介绍

[0002]茯苓系多孔菌科真菌茯苓(学名：Poria cocos(Schw.)Wolf Ryvarden&Gilb.)的干燥菌核，产于四川、安徽、云南、河南、河北等地，多于秋季采挖，有利水渗湿、健脾、健胃、宁心安神的功效，临床上用于治疗水肿尿少、痰饮眩悸、脾虚食少、便溏泄泻等症状。茯苓的主要活性成分为茯苓三萜类化合物和茯苓多糖类化合物。目前，从茯苓中分离出的三萜类化合物有80多种，茯苓三萜亦被证实有健脾、利尿、抗炎、抗肿瘤等药理作用。
[0003]中药多成分、多功效的作用特点使得单一成分的含量测定难以评价药材质量的优劣，即由于中药成分的复杂性，单一成分的测定并不能全面反应药材质量；因此，多成分、多指标的含量测定已经成为当前普遍认可的质量评价方式。相关技术中通过一测多评法测定多个三萜类化合物含量，来评价茯苓质量，但采用方法所需对照品量大且对照品不易获得(导致方法的成本较高)。即相关技术中茯苓质量的评价方法，面临着对照品不易获得、货源紧缺、价格昂贵等问题，限制了这些方法在实际生产等中的应用。且中国药典中也暂无茯苓[含量测定]项控制标准。
[0004]因此，需要构建一种茯苓中三萜酸类化合物含量的测定方法，该方法实现了茯苓中多种三萜酸类化合物的同时测定且大幅降低了分析成本、提高了操作效率。

技术实现思路

[0005]为解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种茯苓中三萜酸类化合物含量的测定方法，该方法实现了茯苓中多种三萜酸类化合物的同时测定且成本低、效率高。
[0006]本专利技术还提供了上述方法在茯苓质量控制中的应用。
[0007]为解决上述第一个技术问题，本专利技术提供的技术方案为：一种茯苓中三萜酸类化合物含量的测定方法，包括以下步骤：
[0008]S1、取供试品溶液，通过液相色谱法进行检测；
[0009]所述三萜酸类化合物包括茯苓新酸B(CAS号为：137551
‑
39
‑
4)、去氢土莫酸(CAS号为：6754
‑
16
‑
1)、茯苓新酸A(CAS号为：137551
‑
38
‑
3)、去氢茯苓酸(CAS号为：77012
‑
31
‑
8)、茯苓酸(CAS号：29070
‑
92
‑
6)、松苓新酸(CAS号：29220
‑
16
‑
4)；
[0010]S2、以所述茯苓酸为参照物，计算供试品溶液中茯苓新酸B、去氢土莫酸、茯苓新酸A、去氢茯苓酸、松苓新酸的含量；
[0011]计算公式如下：
[0012]W
m
＝f
km
×
W
k
×
A
m
/A
k
；
[0013]A
k
为参照物峰面积；W
k
为参照物质量，单位为mg或μg；
[0014]A
m
为目标物m的峰面积，W
m
为目标物m的质量，单位为mg或μg；
[0015]f
km
为校正因子；
[0016]所述液相色谱法包括如下条件：
[0017]流动相A：质量分数为0.05％～0.4％的磷酸水溶液；
[0018]流动相B：乙腈；
[0019]洗脱方式：梯度洗脱；
[0020]所述梯度洗脱的条件为：
[0021]0min～18min，所述流动相B的体积分数由48％～52％升高至58％～62％；
[0022]18min～28min，所述流动相B的体积分数保持为58％～62％；
[0023]28min～58min，所述流动相B的体积分数保持由58％～62％升高至90％～94％；
[0024]58min～68min，所述流动相B的体积分数保持为90％～94％。
[0025]根据本专利技术测定方法的一种技术方案，至少具备如下有益效果：
[0026]本专利技术的测定方法，本专利技术通过对梯度洗脱的条件进行控制，从而实现了对茯苓新酸B、去氢土莫酸、茯苓新酸A、去氢茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸的分离。
[0027]再采用一测多评(QAMS)技术，选取相对易得的茯苓酸作为内参物，建立了内参物茯苓酸与其余5种待测三萜化合物茯苓新酸B、去氢土莫酸、茯苓新酸A、去氢茯苓酸、松苓新酸的相对校正因子，实现通过只测定茯苓酸的含量，用校正因子计算出另外5种三萜成分的含量，节约检测成本和时间，为茯苓多成分质量控制提供参考。
[0028]根据本专利技术的一些实施方式，所述供试品溶液的制备方法，包括以下步骤：
[0029]将茯苓样品与甲醇混合后，固液分离，收集滤液即得；所述茯苓样品和甲醇的质量体积比为1g：20mL～30mL。
[0030]经上述方法处理所得样品可直接用于HPLC分析，目标成分含量均在线性范围内。
[0031]采用甲醇为提取剂，实现了茯苓样品中三萜类化合物的高效提取。
[0032]根据本专利技术的一些实施方式，所述茯苓样品包括人工培育得到的茯苓样品。
[0033]根据本专利技术的一些实施方式，所述茯苓样品包括茯苓皮或白茯苓。
[0034]根据本专利技术的一些实施方式，所述茯苓样品包括人工培育得到的茯苓皮或人工培育得到的白茯苓。
[0035]根据本专利技术的一些实施方式，所述茯苓样品包括茯苓皮及其衍生产品。
[0036]根据本专利技术的一些实施方式，所述茯苓样品包括白茯苓及其衍生产品。
[0037]根据本专利技术的一些实施方式，所述茯苓样品包括茯苓菌发酵培养所得产品。
[0038]根据本专利技术的一些实施方式，所述流动相A为质量分数为0.2％～0.4％的磷酸水溶液。
[0039]根据本专利技术的一些实施方式，所述供试品溶液的制备方法，包括以下步骤：
[0040]将茯苓样品过筛后与甲醇混合，超声处理，固液分离即得。
[0041]根据本专利技术的一些实施方式，所述超声处理的功率为200W～250W。
[0042]根据本专利技术的一些实施方式，所述超声处理的频率为38kHz～42kHz。
[0043]根据本专利技术的一些实施方式，所述超声处理的时间为30min～40min。
[0044]根据本专利技术的一些实施方式，所述固液分离的方法为微孔滤膜过滤。
[0045]根据本专利技术的一些实施方式，所述微孔滤膜的孔径为0.2μm～0.25μm。
[0046]根据本专利技术的一些实施方式，当所述茯苓样品为茯苓皮时，所述供试品溶液的制
备方法，包括以下步骤：
[0047]将所述茯苓样品粉碎后过60目本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种茯苓中三萜酸类化合物含量的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、取供试品溶液，通过液相色谱法进行检测；所述三萜酸类化合物包括茯苓新酸B、去氢土莫酸、茯苓新酸A、去氢茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸；S2、以茯苓酸为参照物，计算供试品溶液中茯苓新酸B、去氢土莫酸、茯苓新酸A、去氢茯苓酸、松苓新酸的含量；计算公式如下：W
m
＝f
km
×
W
k
×
A
m
/A
k
；A
k
为参照物峰面积；W
k
为参照物质量，单位为mg或μg；A
m
为目标物m的峰面积，W
m
为目标物m的质量，单位为mg或μg；f
km
为校正因子；所述液相色谱法包括如下条件：流动相A：质量分数为0.05％～0.4％的磷酸水溶液；流动相B：乙腈；洗脱方式：梯度洗脱；所述梯度洗脱的条件为：0min～18min，所述流动相B的体积分数由48％～52％升高至58％～62％；18min～28min，所述流动相B的体积分数保持为58％～62％；28min～58min，所述流动相B的体积分数保持由58％～62％升高至90％～94％；58min～68min，所述流动相B的体积分数保持为90％～94％。2.根据权利要求1所述的茯苓中三萜酸类...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔培梧，占慧慧，孟俊华，韦春玲，
申请(专利权)人：湖南中医药大学，
类型：发明
国别省市：