【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药质量检测，更具体地，涉及一种基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法。
技术介绍
1、白芍始载于《神农本草经》，2020年版《中国药典》规定白芍为毛茛科植物芍药paeonialactiflorapall.的干燥根，其味苦、酸，性微寒，归肝、脾经，具有养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳之功，用于治疗血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕。如何建立规范的中药质量评价体系，筛选与临床药效相关的中药质控成分，是中药学一直以来面临的科学难题。
2、《中国药典》2020年版将芍药苷确定为白芍药材的质控成分。现有技术中大多通过测定芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸等成分的含量或指纹图谱的方法对白芍进行质量控制(例如：谭菁菁，等.中药白芍的高效液相色谱指纹图谱及其主要成分含量测定[j].国际药学研究杂志，2014，41(2):238-243；赵淼，等基于“质-量”双标的白芍质量分析方法研究[j].中草药，2023，54(22):7325-7330；中国专利cn109490437a。)。中药发挥临床疗效，其化学成分多少需吸收入血才能直接或间接发挥作用，但现有白芍质量控制方法单从体外成分分析角度建立，均未涉及明确白芍入血的特征性成分，缺乏以入血成分为导向的白芍质量控制方法。“徐佳新.白芍药性物质基础及质量标准研究[d].天津中医药大学.2022.”研究了白芍入血成分的检测，但还是通过测定芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸等成分的含量，未能客观、真实反映白芍的质量。
3、鉴于以上不足，有必要专利
技术实现思路
1、基于现有技术中存在的上述技术问题，本专利技术提供了一种基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法。通过lc-ms对血中移行成分进行分析，筛选出几种白芍原型血中移行成分的特征峰，并进行指纹图谱检测。
2、为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
3、一种基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其包括如下步骤：
4、(1)供试品溶液制备；
5、(2)混合对照品溶液的制备
6、精密称取氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、芍药新苷、芍药二酮对照品，置于容量瓶中，加体积浓度70％的甲醇溶解并定容摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，得混合对照品溶液；
7、(3)高效液相色谱法测定白芍的指纹图谱
8、将按步骤(1)方法制备得到的12个批次的白芍饮片供试品溶液和混合对照品溶液分别注入高效液相色谱仪，测定指纹图谱；
9、(4)将步骤3中获得的12批白芍供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012；选择12批次白芍的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成白芍的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。
10、进一步地，步骤(1)中，所述供试品溶液制备具体为：白芍饮片粉碎后过4号筛，取粉末约0.5g，精密称定，置25ml容量瓶中，精密加入25ml 70％甲醇溶液，密塞，30℃超声(功率200w，频率40khz)30min，离心、取上清液，过0.45μm滤膜供hplc分析。
11、进一步地，步骤(2)中，所述混合对照品溶液中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、芍药新苷和芍药二酮的质量浓度分别为21.50μg/ml、98.20μg/ml、357.80μg/ml、1.10μg/ml、0.22μg/ml。
12、进一步地，对照品的选择通过uplc-q-tof-ms分析白芍体外成分和白芍血中移行成分得到。
13、跟进一步地，所述分析白芍体外成分和白芍血中移行成分具体包括：利用相同洗脱梯度和质谱条件下采集口服白芍饮片后大鼠血清样品，通过unifi分析软件，将白芍体外数据设为reference，提取大鼠血清中相同保留时间的白芍原型入血成分；比较选定离子与体外成分的mse高低碰撞能数据和碎片信息，确认了氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、芍药新苷及芍药二酮等14个白芍入血成分。
14、更进一步地，所述uplc-q-tof-ms分析包括：血清样品的采集与预处理
15、将12只雄性spf级sd大鼠适应性饲养1周，随机分为空白组和给药组，每组6只。给药组连续7d灌胃给予剂量为18g/kg的白芍冻干粉水溶液，空白组大鼠灌胃给予相同体积的蒸馏水。空白组、给药组大鼠禁食12小时，自由饮水，按体重3％的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，于4℃、4000rpm离心10min，取上层血清置于-80℃保存。
16、取大鼠血清2ml，加入40μl，涡旋混匀30s后上样到预先以2ml甲醇、2ml水活化平衡好的hlb固相萃取小柱上，以2ml水淋洗，淋洗液弃去，再以2ml纯甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，氮气吹干，残渣加入200μl50％甲醇溶液复溶，超声1min后于4℃、13000rpm离心10min，上清液过0.22μm微孔滤膜供液质分析。
17、进一步地，所述uplc-q-tof-ms分析中色谱条件为：
18、色谱柱为acquity uplc beh c18柱(100mm×2.1mm i.d.，1.7μm)；流动相为0.1％甲酸水(a)-乙腈(b)，洗脱梯度为0-2min，98％-90％a；2-6min，90％-80％a；6-12min，80％-65％a；12-15min，65％-60％a；15-22min，60％-50％a；22-26min，50％-20％a；26-27min，20％-0％a；柱温40℃；样品仓温度10℃；流速为0.3ml·min-；进样体积6μl；色谱仪流出液不经分流直接注入质谱仪进行正负离子扫描。
19、进一步地，所述uplc-q-tof-ms分析中质谱条件为：
20、电喷雾离子源(esi)，正负离子检测的全模式，质量扫描范围：m/z 50-1500da，毛细管电压正负模式下分别为3.0kv、2.5kv，样品锥孔电压：40v，离子源温度100℃，去溶剂化气流温度400℃，锥孔气流50l.h-1，去溶剂气流量800l·h-1。利用亮氨酸-脑啡肽([m+h]+＝556.2771，[m-h]-＝554.2615)作为内标液进行质量实时校正，流速10μl·min-1。
21、所述氧化芍药苷的结构式为：
22、
23、所述芍药内酯苷的结构式为：
24、
25、所述芍药苷的结构式为：
26、
27、所述芍药新苷的结构式为：
28、
29、所述芍药二酮的结构式为：
30、
31、进一步地，步骤(3)中，所述高效液相色谱法测定白芍的指纹图本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述供试品溶液制备具体为：白芍饮片粉碎后过4号筛，取粉末约0.5g，精密称定，置25mL容量瓶中，精密加入25mL 70％甲醇溶液，密塞，30℃超声(功率200W，频率40kHz)30min，离心﹑取上清液，过0.45μm滤膜供HPLC分析。
3.根据权利要求1所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述混合对照品溶液中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、芍药新苷和芍药二酮的质量浓度分别为21.50μg/mL、98.20μg/mL、357.80μg/mL、1.10μg/mL、0.22μg/mL。
4.根据权利要求3所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，对照品的选择通过UPLC-Q-TOF-MS分析白芍体外成分和白芍血中移行成分得到。
5.根据权利要求4所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，所述分析白芍体
6.根据权利要求5所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，所述UPLC-Q-TOF-MS分析包括：血清样品的采集与预处理
7.根据权利要求6所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，所述UPLC-Q-TOF-MS分析中色谱条件为：
8.根据权利要求7所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，所述UPLC-Q-TOF-MS分析中质谱条件为：
9.根据权利要求1所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤(4)中，对照指纹图谱中有13个共有指纹峰；其中，氧化芍药苷为2号峰，保留时间为9.55min；芍药内酯苷为4号峰，保留时间为20.53min；芍药苷为5号峰，保留时间为25.71min；芍药新苷为9号峰，保留时间为45.45min；芍药二酮为13号峰，保留时间为54.23min。
10.一种权利要求1-9任一项所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法在白芍质量控制中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述供试品溶液制备具体为：白芍饮片粉碎后过4号筛，取粉末约0.5g，精密称定，置25ml容量瓶中，精密加入25ml 70％甲醇溶液，密塞，30℃超声(功率200w，频率40khz)30min，离心﹑取上清液，过0.45μm滤膜供hplc分析。
3.根据权利要求1所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述混合对照品溶液中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、芍药新苷和芍药二酮的质量浓度分别为21.50μg/ml、98.20μg/ml、357.80μg/ml、1.10μg/ml、0.22μg/ml。
4.根据权利要求3所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，对照品的选择通过uplc-q-tof-ms分析白芍体外成分和白芍血中移行成分得到。
5.根据权利要求4所述的基于血中移行成分的白芍指纹图谱检测方法，其特征在于，所述分析白芍体外成分和白芍血中移行成分具体包括：利用相同洗脱梯度和质谱条件下采集口服白芍饮片后大鼠血清样品，通过unifi分析软件，将白芍体外数...
【专利技术属性】
技术研发人员：于静波，韩越，王宇红，孙洋，艾启迪，
申请(专利权)人：湖南中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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