一种高效诱导愈伤及再生的饲用狗牙根种质的筛选制造技术

本发明专利技术公开了一种高效诱导愈伤及再生的饲用狗牙根种质的筛选。本发明专利技术公开的饲用狗牙根种质的筛选方法包括：以

【技术实现步骤摘要】
一种高效诱导愈伤及再生的饲用狗牙根种质的筛选


[0001]本专利技术涉及生物
中，一种高效诱导愈伤及再生的饲用狗牙根种质的筛选。

技术介绍

[0002]狗牙根(Cynodon dactylon(L.)Pers.)为禾本科、狗牙根属多年生草本植物，秆细而坚韧，具有发达的根和匍匐茎，繁殖力强，可作优良的草坪草和牧草，是最重要、应用前景最广泛的暖季型草种之一。随着生物技术的成熟，利用植物组织培养技术建立狗牙根的愈伤诱导及再生体系，并基于此，利用转基因技术建立狗牙根的遗传转化体系，为狗牙根引入抗除草剂、耐干旱、耐盐碱等外源基因培育狗牙根优良新种质，已成为狗牙根研究的必然趋势。目前，通过筛选狗牙根种质(如
‘
Tifgreen
’
、
‘
TifEagle
’
、
‘
Savannah
’
、
‘
J1224
’
、
‘
suncity
’
等品种)、调节激素配比(如添加6
‑
BA、ABA、GA3)等方法在坪用狗牙根组织培养的研究中取得了一些进展。然而，狗牙根遗传背景复杂、自交不亲和，其同一品种不同种粒之间的基因型也不尽相同，形成的愈伤组织类型与分化再生能力也存在差异，致使其胚性细胞增殖及再生能力的保持依然很困难，这是狗牙根遗传转化的巨大障碍。因此，从中筛选具有高效诱导愈伤及再生的狗牙根核心组培种质具有非常重要的现实意义。
[0003]总之，狗牙根至今仍然是一种很难利用植物组织培养技术获得优质愈伤并高效再生的物种。目前国内外专家学者建立的都是坪用狗牙根的组织培养体系，针对饲用狗牙根的组织培养及再生体系尚未建立。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是如何筛选高效诱导愈伤及再生的饲用狗牙根种质。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了一种饲用狗牙根胚性愈伤组织的诱导方法，所述饲用狗牙根为
‘
Wrangler
’
，所述方法包括：以所述饲用狗牙根的种子为外植体，将所述外植体于37℃下利用次氯酸钠溶液和/或过氧化氢水溶液和/或乙醇水溶液进行灭菌，得到灭菌狗牙根种子；将所述灭菌狗牙根种子于狗牙根愈伤诱导培养基上进行愈伤组织的诱导，得到的黄色或淡黄色、形态为硬质颗粒状、致密又健康的胚性愈伤组织即得到饲用狗牙根胚性愈伤组织。
[0006]所选择胚性愈伤组织无分泌物、粘连物质，表现为偏干，黄色或淡黄色颗粒状，致密又健康。
[0007]上述方法中，所述狗牙根愈伤诱导培养基可为向MS培养基中添加2,4
‑
D、蔗糖得到的培养基，其中，2,4
‑
D、蔗糖的添加量分别为3mg/L、30g/L，PH为5.8。
[0008]上述方法中，所述愈伤组织的诱导可在25℃下进行。
[0009]上述方法中，所述愈伤组织的诱导可在黑暗下进行。
[0010]上述方法中，所述愈伤组织的诱导可为1个月。
[0011]上述方法还包括对饲用狗牙根胚性愈伤组织进行继代培养，所述继代培养在狗牙
根愈伤继代培养基中进行，所述狗牙根愈伤继代培养基为向MS培养基中添加2,4
‑
D、6
‑
BA、蔗糖得到的培养基，其中，2,4
‑
D、6
‑
BA、蔗糖的添加量分别为3mg/L、0.15mg/L、30g/L，PH为5.8。
[0012]所述继代培养可在25℃下进行。所述继代培养在黑暗下进行。
[0013]上述方法中，所述继代培养的时间可为1个月。
[0014]上述方法中，所述次氯酸钠溶液可为将有效氯浓度为5.6％的次氯酸钠水溶液与水按照3:97的体积比混合得到的溶液；
[0015]所述过氧化氢水溶液中过氧化氢的体积百分比为1.5％；
[0016]所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为70％。
[0017]上述方法中，所述次氯酸钠溶液处理的时间可为2
‑
4小时；
[0018]所述过氧化氢水溶液处理的时间可为12小时；
[0019]所述乙醇水溶液处理的时间可为1分钟。
[0020]所述次氯酸钠溶液的处理可分两次在所述过氧化氢水溶液处理之前和之后分别进行，在所述过氧化氢水溶液处理之前所述次氯酸钠溶液的处理时间可为2.5小时，在所述过氧化氢水溶液处理之后所述次氯酸钠溶液的处理时间可为1小时。
[0021]所述灭菌可在摇床中进行。
[0022]本专利技术还提供了一种饲用狗牙根再生苗的培养方法，所述饲用狗牙根为
‘
Wrangler
’
，所述方法包括：按照所述饲用狗牙根胚性愈伤组织的诱导方法制备饲用狗牙根胚性愈伤组织，将所述饲用狗牙根胚性愈伤组织进行分化和生根培养，得到饲用狗牙根再生苗。
[0023]其中，所述分化培养可在狗牙根愈伤分化培养基中进行，所述狗牙根愈伤分化培养基为向MS培养基中添加6
‑
BA、KT、脯氨酸、酶水解干酪素、蔗糖得到的培养基，其中，6
‑
BA、KT、脯氨酸、酶水解干酪素、蔗糖的添加量分别为0.5mg/L、2mg/L、0.5g/L、0.5g/L、30g/L，PH为5.8。
[0024]所述生根培养可在狗牙根生根壮苗培养基中进行，所述狗牙根生根壮苗培养基为向1/2MS培养基中添加NAA、蔗糖得到的培养基，其中，NAA、蔗糖的添加量分别为0.2mg/L、8g/L，PH为5.8。
[0025]所述分化培养可在25℃下进行，16小时光照/8小时黑暗。
[0026]所述生根培养可在25℃下进行，16小时光照/8小时黑暗。
[0027]所述饲用狗牙根胚性愈伤组织的诱导方法或所述饲用狗牙根再生苗的培养方法在狗牙根育种中的应用，也属于本专利技术的保护范围。
[0028]利用所述饲用狗牙根胚性愈伤组织的诱导方法得到的胚性愈伤组织(如编号43号的
Ⅶ
型愈伤)，或利用所述饲用狗牙根再生苗的培养方法得到的再生苗，也属于本专利技术的保护范围。
[0029]利用所述饲用狗牙根胚性愈伤组织的诱导方法得到的胚性愈伤组织(如编号43号的
Ⅶ
型愈伤)，或利用所述饲用狗牙根再生苗的培养方法得到的再生苗，在狗牙根育种中的应用，也属于本专利技术的保护范围。
[0030]实验证明，利用本专利技术的饲用狗牙根胚性愈伤组织的诱导方法成功得到了黄色或淡黄色，形态为硬质颗粒状、致密又健康、分化率高的胚性愈伤组织，其中的编号43号的
Ⅶ
型愈伤分化能力极强，15天左右分化出绿色芽点，30天左右分化出小苗，分化率平均为95％。
附图说明
[0031]图1为不同温度条件对狗牙根种子萌发的影响。(A)37℃培养箱；(B)22℃组培室；(C)25℃室温条件。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.饲用狗牙根胚性愈伤组织的诱导方法，所述饲用狗牙根为
‘
Wrangler
’
，所述方法包括：以所述饲用狗牙根的种子为外植体，将所述外植体利用次氯酸钠溶液和/或过氧化氢水溶液和/或乙醇水溶液进行灭菌，得到灭菌狗牙根种子；将所述灭菌狗牙根种子于狗牙根愈伤诱导培养基上进行愈伤组织的诱导，得到的黄色或淡黄色、形态为硬质颗粒状、致密又健康的胚性愈伤组织即得到饲用狗牙根胚性愈伤组织；所述狗牙根愈伤诱导培养基为向MS培养基中添加2,4
‑
D、蔗糖得到的培养基，其中，2,4
‑
D、蔗糖的添加量分别为3mg/L、30g/L，PH为5.8。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述愈伤组织的诱导在25℃下进行。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述愈伤组织的诱导在黑暗下进行。4.根据权利要求1
‑
3中任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括对饲用狗牙根胚性愈伤组织进行继代培养，所述继代培养在狗牙根愈伤继代培养基中进行，所述狗牙根愈伤继代培养基为向MS培养基中添加2,4
‑
D、6
‑
BA、蔗糖得到的培养基，其中，2,4
‑
D、6
‑
BA、蔗糖的添加量分别为3mg/L、0.15mg/L、30g/L，PH为5.8。5.根据权利要求1
‑
4所述的方法，其特征在于：所述次氯酸钠溶液为将有效氯浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐筱，付金民，
申请(专利权)人：鲁东大学，
类型：发明
国别省市：