捕蝇草组培快速育苗方法及应用技术

本发明专利技术涉及食虫植物培养技术领域，具体是一种捕蝇草组培育苗方法及应用，步骤包括：外植体的消毒；丛生芽的诱导；丛生芽的增殖；丛生芽的生根。本发明专利技术在捕蝇草增殖培养时，在培养初期进行高温无光培养，有利于从叶片快速诱导出大量丛生芽，在中期降低温度至适温，继续无光培养，可使丛生芽叶片迅速展开，从而增加增殖系数，而在后期进行适温，光暗交替培养，使丛生苗能更加健壮，一方面提高了可利用叶片数量，另一方面有利于生根时苗的健壮。另一方面有利于生根时苗的健壮。

【技术实现步骤摘要】
捕蝇草组培快速育苗方法及应用


[0001]本专利技术涉及食虫植物培养
，具体是一种捕蝇草组培快速育苗方法及应用。

技术介绍

[0002]捕蝇草(Dionaea muscipula)又名苍蝇夹，苍蝇的地狱等，为茅膏菜科捕蝇草属多年生草本植物，亦是捕蝇草属唯一的种，原产于美国南卡罗莱纳州东北部、北卡罗莱纳州东南部以及新泽西州和弗吉尼亚州等地，主要生长于半稀树草原的沼泽、湿地周围，该环境下土质多为泥炭土及硅砂。捕蝇草为最有趣味性的食虫植物，其叶片进化为夹子状捕虫器，可通过释放挥发性有机化合物吸引昆虫，当猎物爬过时多次触碰到夹子内的小刺，夹子即可产生动作电位并迅速关闭夹子，同时，昆虫在夹子内反复摆动，促使夹子分泌消化液，最终“吃”掉昆虫。早在1875年，达尔文便在其专著《Insectivorous Plants》中描述了捕蝇草的捕食现象,并称之为世界上最奇妙的植物。
[0003]随着科技的进步，对捕蝇草的研究不仅限于其观赏性及趣味性，21世纪，各国科学家研究了其捕虫机理，根据仿生学专利技术了捕蝇草仿生机器人、人工肌肉仿生结构的机翼、可编程复合材料、光驱动人工捕蝇器、基于吸湿电纺纳米纤维的双稳态软激发结构等。同时，捕蝇草内次生代谢产物白花丹醌及其衍生物、香草酸、槲皮素等的分离提纯，捕蝇草的药用价值也在逐步开发。
[0004]根据捕蝇草叶片、夹子等形态，将捕蝇草分别命名为大嘴、三头犬、蜘蛛、花市、鲨鱼等百余品系，由于其独特的观赏性和趣味性，捕蝇草被世界各国引种栽培。21世纪初，我国逐步开始引进捕蝇草的种植，目前主要集中于浙江、广东、北京、山东、云南、四川等省市栽培。
[0005]最初我国引种时捕蝇草主要以叶片进行扦插繁殖获得种苗，栽植一段时间后开始结籽，种子繁殖亦成为捕蝇草种苗的繁殖方法，但经过年多次的种子繁殖研究，种子繁殖极易出现“返祖”的情况，因此，后期在捕蝇草市场化栽培中，叶插还是作为捕蝇草种苗的主要繁殖方式。
[0006]随着科技的进步，利用现代生物组培技术，亦成为捕蝇草种苗来源的重要方式，但捕蝇草种类极多，且更新较快，捕蝇草需不停的进行新品种的组培初代诱导，而捕蝇草组培初代诱导时，在消毒环节极其难，一般单品种开展时，需经过一年甚至更长周期的初代培养。同时，现有捕蝇草组培技术还存在培养过程中叶片色泽变红，培养周期长，苗培养过程中极易产生僵苗等情况。

技术实现思路

[0007]本专利技术针对现有技术的不足，专利技术了一种消毒污染率及消毒死亡率低、培养周期短、苗健壮、不会出现僵苗的捕蝇草组培繁育方法。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种捕蝇草组培快速育苗方法，步骤
包括：
[0009]1.外植体清洁：选取健康无病虫害的捕蝇草叶片作为外植体，用软毛刷蘸取饱和肥皂液反复轻刷叶片表面6～8次，并用自来水洗净表面肥皂液，后滴加2～3滴吐温
‑
80，浸泡30～40min，再用自来水冲淋60～70min；
[0010]2.外植体消毒：洗净的外植体转移至超净工作台，依次用75％(v/v)酒精消毒10～15s，无菌水涮洗2～3次，4％双氧水溶液消毒6～7min，无菌水涮洗2～3次，后在超声波清洗机中，将超声波调至25～30kHz，用0.4％新洁尔灭溶液超声消毒2～3min，用无菌水涮洗3～4次，后继续在超声波清洗机中用0.02％升汞溶液超声消毒1～2min，无菌水涮洗6～8次；
[0011]3.丛生芽诱导：消毒好丛生芽接种在以1/4MS+NAA 0.1～0.2mg/L+TDZ 1.0～1.5mg/L+ZT 0.3～0.5mg/L+活性炭1.0～1.2g/L的丛生芽诱导培养基中，在温度为28
±
2℃下完全暗培养培养15～20天，待丛生芽萌发后，温度调整至25
±
2℃继续暗培养10～15天，待叶片舒展后，保持温度不变，每天照2000～3000lux光12h进行光暗交替培养30～40天；
[0012]4.丛生芽增殖：诱导出丛生芽切成单芽，同时剪下叶片，分别将单芽和叶片接种在改良N6+NAA 0.5～0.6mg/L+TDZ 0.5～0.6mg/L+KT 2.0～2.5mg/L+CH 20～30mg/L+椰乳60～80mg/L+酵母粉20～30mg/L+活性炭0.3～0.4g/L的丛生芽增殖培养基中，在温度为28
±
2℃下完全暗培养5～10天，待丛生芽萌发后，温度调整至25
±
2℃继续暗培养5～10天，待叶片舒展后，保持温度不变，每天照2000～3000lux光12h进行光暗交替培养20～30天；
[0013]5.丛生芽生根：增殖丛生芽切成单芽，接种在改良N6+NAA 0.2～0.4mg/L+IBA 0.8～1.2mg/L+CH 50～80mg/L+茉莉酸甲酯0.3～0.4mg/L+椰乳60～80mg/L+活性炭0.5～0.6g/L，在温度25
±
2℃，每日照3000～4000lux光14h培养15～20天，开始生根后置于遮阴率75～85％的日光下培养10～15天。
[0014]专利技术中，上述改良N6培养基为在原N6培养基的基础上，将硝酸钾改为880mg/L，硫酸二氢钾改为120mg/L，硫酸铵改为360mg/L，硫酸镁改为35mg/L，氯化钙改为25mg/L。
[0015]本专利技术的有益技术效果是：
[0016]1.本专利技术在外植体消毒时，采用了酒精，双氧水溶液，新洁尔灭溶液消，升汞溶液四种消毒剂的复合消毒方法，不论是消毒浓度还是消毒时间，较组培时的常规消毒方法相对较低，同时在升汞溶液消毒时，还配合使用了超声波，使在减少对外植体伤害的前提下尽可能的降低消毒污染率。本专利技术的消毒污染率为47％，消毒死亡率为57％，是目前捕蝇草初代培养最佳的消毒方法。
[0017]2.本专利技术在增殖培养时，采用一定浓度的NAA、KT及TDZ的搭配组合，能使捕蝇草叶片产生大量丛生苗，且产生丛生芽的周期短。同时在增殖培养基中添加了一定浓度的CH、椰乳及酵母粉，可为捕蝇草丛生芽的生长提供优质、适宜的有机养分，促使丛生芽在短期内迅速生长，一方面缩短了培养周期，另一方面丛生苗叶片的迅速展开，可促使叶片可以更多的用于继续扩繁，从而增加了增殖系数。
[0018]3.本专利技术在生根培养时，采用了一定浓度的NAA和IBA的搭配组合，可使生根率达100％，同时，在生根培养基中继续添加了一定浓度的水解酪蛋白(CH)及椰乳而去掉增殖时的酵母粉，能最大程度的使生根苗快速生长的同时，还能防治生根过程中玻璃化的发生，同时，在生根培养基中添加一定浓度的茉莉酸甲酯，亦能在很大程度的防治玻璃化的发生，还能促使在瓶苗阶段大量夹子的产生，从而有利于缩短驯化时的成苗周期。
[0019]4.捕蝇草不同于现有常规植物，由于其长期生长在土壤贫瘠的地方，使得其可通过进化的夹子获得更多的营养，亦使得捕蝇草对各元素极其敏感。而利用现有的基本培养基进行捕蝇草组培培养时，均会出现大量的僵苗、红苗、枯稍本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.捕蝇草组培快速育苗方法，其特征在于，步骤包括：(1)外植体消毒：取捕蝇草叶片洗净后，依次用75％酒精消毒10～15s，4％双氧水溶液消毒6～7min，0.4％新洁尔灭溶液消毒2～3min，0.02％升汞溶液消毒1～2min，0.4％新洁尔灭溶液及0.02％升汞溶液消毒时配合25～30kHz的超声波消毒；(2)丛生芽诱导：消毒好丛生芽接种在以1/4MS+NAA 0.1～0.2mg/L+TDZ 1.0～1.5mg/L+ZT 0.3～0.5mg/L+活性炭1.0～1.2g/L的丛生芽诱导培养基中，28
±
2℃下完全暗培养15～20天，待丛生芽萌发后，温度调整至25
±
2℃继续暗培养10～15天，待叶片舒展后，保持温度不变，每天光照12h，进行光暗交替培养30～40天，光照强度2000～3000lux；(3)丛生芽增殖：诱导出丛生芽切成单芽，同时剪下叶片，分别将单芽和叶片接种在改良N6+NAA 0.5～0.6mg/L+TDZ 0.5～0.6mg/L+KT 2.0～2.5mg/L+CH 20～30mg/L+椰乳60～80mg/L+酵母粉20～30mg/L+活性炭0.3～0.4g/L的丛...

【专利技术属性】
技术研发人员：张媛，张颖，王德新，邓国宾，邱旭，向建英，
申请(专利权)人：西南林业大学，
类型：发明
国别省市：